樱桃幼树夏季摘心促梢试验

樱桃幼树生长旺 ,一年具有多次抽梢的习性 ,但当年生新梢成枝力弱 ,树冠骨架建造慢。为提早成形结果 ,本课题组于 2 0 0 1年夏季对初龄幼树进行摘心试验 ,试验结果表明 :夏季摘心对初龄樱桃增加枝量、扩大树冠。

经济法的特殊价值在构建社会主义和谐社会中的凸显

经济法具有兼顾公平、促进效率的特殊价值,随着我国社会主义市场经济的快速发展并融入世界,宏观调控不断加强,经济法特殊价值的法律运作在构建社会主义和谐社会中的地位、作用日益彰显。

水牛胎儿成纤维细胞电转染条件的优化

高活力的转基因细胞的制备是转基因克隆动物研究的关键环节。为了高效制备转基因细胞,外源基因转入水牛胎儿成纤维细胞的条件需要优化。采用组织块贴壁法分离获得水牛胎儿成纤维细胞,经染色体核型分析表明获得的细胞具有正常的生物学功能,可用于细胞转染。采用电穿孔法将载体EGFP-N1导入水牛胎儿成纤维细胞,分别比较不同电压(200V,250V,300V,350V)、不同电击时间(5ms,10ms,15ms)和不同细胞代数(第3代、第5代、第10代)的转染效率,并利用优化的电转染条件将乳腺特异性表达的水牛促乳素(PRL)基因导入水牛胎儿成纤维细胞,G418筛选获单克隆并进行鉴定。结果发现电压为300 V,脉冲时间为10 ms时,细胞GFP阳性率为35.5%,转染效率较高。随传代次数的增加,细胞的转染效率下降;传至第10代的细胞转染效率显著低于第3代的水牛胎儿成纤维细胞(30%VS 35.5%,P<0.05)。运用优化条件转染、筛选可获得转PRL单克隆细胞,转染效率为2.1×10-5(84/4×106)。挑取单克隆细胞扩大培养,经PCR鉴定和核型分析,证实单克隆稳定整合促乳素基因,并且核型分析正常,可作为核供体,用于生产水牛转基因克隆胚胎。为采用体细胞克隆技术生产水牛转基因胚胎奠定了基础。