黄芪颗粒联合微RNA-30a对肾病综合征小鼠肾组织中内质网应激相关蛋白、有丝分裂原活化蛋白激酶蛋白和血清炎症因子水平的影响

目的探讨黄芪颗粒联合微RNA(miR)-30a对肾病综合征小鼠内质网应激、炎症水平和有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)蛋白表达的影响。方法将50只小鼠随机分为对照组(n=10)和模型组(n=40)。模型组小鼠经尾静脉注射阿霉素溶液(7.5 mg·kg^(-1))制备原发性肾病综合征(PNS)模型,对照组小鼠经尾静脉注射等体积的生理盐水。造模成功后将模型组小鼠随机分为PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组,每组10只。黄芪组小鼠灌胃黄芪颗粒冲剂(20 mg·g^(-1)),每日2次;miR-30a组小鼠经尾静脉注射miR-30a antagomir(10 mg·kg^(-1)),每周1次;黄芪+miR-30a组小鼠灌胃黄芪颗粒冲剂(20 mg·g^(-1),每周1次),同时经尾静脉注射miR-30a antagomir(10 mg·kg^(-1));模型组和对照组小鼠灌胃与黄芪组等量的生理盐水,每日1次;各组小鼠均干预4周。于给药0、2、4周时检测各组小鼠24 h尿蛋白;于末次给药24 h后,应用全自动生物化学分析仪检测各组小鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平,采用酶联免疫吸附试验法检测各组小鼠血清中白细胞介素(IL)-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,苏木精-伊红染色观察各组小鼠肾组织病理学变化,免疫组织化学法检测各组小鼠肾组织中糖调节蛋白-78(GRP-78)和激活转录因子6(ATF6)的表达,Western blot法检测各组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、线粒体外活化蛋白激酶(ERK)、磷酸化线粒体外活化蛋白激酶(p-ERK)蛋白表达。结果PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠给药0、2、4周时24 h尿蛋白显著高于对照组(P<0.05)。给药2、4周时,黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠的24 h尿蛋白显著低于PNS组(P<0.05);黄芪组与miR-30a组小鼠的24 h尿蛋白比较差异无统计学意义(P>0.05);黄芪+miR-30a组小鼠24 h尿蛋白显著低于黄芪组和miR-30a组(P<0.05)。PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平显著高于对照组(P<0.05);黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平显著低于PNS组(P<0.05);黄芪组与miR-30a组小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平比较差异无统计学意义(P>0.05);黄芪+miR-30a组小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平显著低于黄芪组和miR-30a组(P<0.05)。PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平显著高于对照组(P<0.05);黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平显著低于PNS组(P<0.05);黄芪组与miR-30a组小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平比较差异无统计学意义(P>0.05);黄芪+miR-30a组小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平显著低于黄芪组和miR-30a组(P<0.05)。对照组小鼠肾小球排列规则,无明显炎症细胞浸润;PNS组小鼠肾小球排列不规则,有大量炎症细胞浸润到肾间质;与PNS组相比,黄芪组和miR-30a组小鼠肾组织病理学变化得到明显改善,肾间质炎症细胞浸润明显减少;黄芪+miR-30a组小鼠肾间质偶见炎症细胞。PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值显著高于对照组(P<0.05);黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值显著低于PNS组(P<0.05);黄芪组与miR-30a组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值比较差异无统计学意义(P>0.05);黄芪+miR-30a组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值显著低于黄芪组和miR-30a组(P<0.05)。结论黄芪颗粒联合miR-30a可显著降低肾病综合征小鼠内质网应激,减轻炎症反应,抑制肾组织中MAPK蛋白的表达。

N-乙酰半胱氨酸影响p38有丝分裂原活化蛋白激酶对顺铂诱导急性肾损伤的保护作用

目的研究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对顺铂(cisplatin,CDDP)诱导大鼠急性肾损伤(acute kidney in-jury,AKI)后组织细胞凋亡的影响和与p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38MAPK)的关系。方法静脉注射CDDP制备大鼠AKI模型。大鼠随机分为正常对照组、AKI模型对照组、NAC低剂量组(50 mg.kg-1)、NAC中剂量组(100 mg.kg-1)、NAC高剂量组(200 mg.kg-1)、特异性p38MAPK抑制剂SB203580组(10mg.kg-1)。大鼠预先连续给药3 d,给予CDDP,再继续给药5 d。TUNEL法进行细胞凋亡检查。试剂盒测定肾脏组织caspase-3。Western blot测定caspase-3、Bax、Bcl-2、磷酸化p38MAPK(phosphorylated p38MAPK,p-p38MAPK)表达。结果与正常对照组相比,CDDP诱导AKI模型组肾组织凋亡细胞增加,caspase-3、Bax、p-p38MAPK表达升高,Bcl-2表达降低(P<0.01)。与AKI模型组相比,NAC与SB203580减少凋亡细胞、降低肾脏组织caspase-3、Bax、p-p38MAPK表达和增加Bcl-2表达(P<0.01)。结论 NAC可有效防治CD-DP诱导大鼠AKI,并与p38MAPK相关。

低分子肝素对大鼠创伤性深静脉血栓形成中促细胞分裂原活化蛋白激酶通路的影响

观察低分子肝素治疗大鼠创伤性深静脉血栓形成的效果,从基因水平探讨低分子肝素治疗创伤性深静脉血栓形成的作用机制。将150只SD大鼠采用定量击打双侧大腿+双后肢石膏固定的方式造模,再将造模后5天有血栓形成的大鼠,随机分为药物治疗组和对照组,分别用低分子肝素和生理盐水进行干预,第一次干预后3h,各组随机取10只大鼠股静脉血管及其主要属支,采用Trizol一步法提取总RNA,运用Gene-chip Rat Genome 4302.0芯片测定股静脉RNA表达。倍数变化分析筛查出差异性表达基因,进一步行path-way分析。结果表明:对照组比较,药物组血栓消退率较高(x2=4.698,P<0.05);有1229个基因呈现差异性表达,该基因主要参与了MAKP、Ca2+、细胞因子及受体信号传导通路,参与MAPK通路的始动基因如IL1、TGF、FGF及其受体,末端效应基因如c-Junn、ur77、p53等均呈现上调。低分子肝素可调控促细胞分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路并影响血栓的预后。

有丝分裂原活化蛋白激酶在妊娠期高血压疾病大鼠心脏组织中的表达及意义

目的通过检测妊娠期高血压疾病大鼠心脏组织中有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达水平及活性的变化,以探讨妊娠期高血压疾病心脏病理生理变化发生的机制。方法注射亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)方法制备妊娠期高血压疾病动物模型并应用Western印迹试验及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量方法分别检测15只妊娠期高血压疾病大鼠、正常妊娠大鼠、健康育龄大鼠对照组心脏组织MAPK活性及其ERK亚型的表达情况。结果妊娠期高血压疾病大鼠心脏组织MAPK活性明显高于正常妊娠组(P<0.01),而正常妊娠组心脏组织MAPK活性明显高于对照组(P<0.01)。妊娠期高血压疾病大鼠心脏组织中MAPK的蛋白及mRNA表达水平显著高于正常妊娠组(P<0.01),正常妊娠组心脏组织MAPK的蛋白、基因表达水平明显高于对照组(P<0.01)。结论在妊娠期高血压疾病大鼠心脏组织中存在MAPK活性升高以及蛋白、基因的过度表达,这可能在妊娠期高血压疾病心脏病理损伤中起着重要作用。

着床期小鼠子宫内膜有丝分裂原活化蛋白激酶的表达及LeY寡糖对其表达的调控

目的观察围着床期小鼠子宫内膜有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的定位及表达变化, 探讨LeY寡糖对其表达的调控. 方法应用免疫组织化学、Western-blot方法,检测小鼠着床期(D1～D8)子宫内膜MAPK的两种亚型ERK1(p44 MAPK)和ERK2(p42 MAPK)的表达部位及水平;并通过点杂交方法,分析细胞表面的LeY寡糖被抗体阻断后,对培养的D4子宫内膜上皮细胞ERK1/2表达的影响. 结果免疫组织化学分析显示D2、3、4磷酸化活性ERK1/2分布于子宫内膜腔上皮和腺上皮, D4主要集中在腔上皮, 而D5、6则以蜕膜细胞表达最强;Western-blot结果显示ERK1亚型表达水平高于ERK2,后者在围着床期的变化趋势较前者明显;LeY寡糖被抗体阻断后D4内膜上皮细胞ERKs的表达下降. 结论 MAPK在围着床期小鼠子宫内膜中有特异的定位和表达规律,其表达强度与子宫内膜的接受态及蜕膜化有关.LeY寡糖可能作为一种信息分子,对MAPK信号转导通路起调控作用.

有丝分裂原活化蛋白激酶对HER-2阳性乳腺癌化疗疗效考核价值

目的 探讨有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)对HER-2阳性乳腺癌患者化疗的疗效及生存预后的预测价值。方法 选择2010年5月~2012年5月本院收治的83例HER-2阳性乳腺癌患者为研究对象,所有患者均接受新辅助化疗和手术治疗,采用免疫组化染色检测癌组织和癌旁组织MAPK、MAPK磷酸化(pMAPK)蛋白表达,采用RT-PCR检测组织MAPK、pMAPK mRNA表达;以患者年龄、手术方式、临床分期、月经、雌激素受体、MAPK、pMAPK表达等作为观察指标,分析影响乳腺癌化疗疗效的因素。结果 癌组织MAPK、pMAPK mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P<0.05)。83例乳腺癌患者CR 15例,占18.1%;PR 45例,占54.2%;SD 22例,占26.5%;PD 1例,占1.2%.临床有效共计60例占72.3%。单因素分析显示MAPK、pMAPK蛋白阳性患者临床有效率显著低于MAPK、pMAPK蛋白阴性患者(P<0.05);多因素分析显示MAPK、pMAPK表达是影响乳腺癌化疗疗效的独立危险因素(P均<0.05)。MAPK阳性患者3年无复发生存率为41.8%,MAPK阴性患者为60.7%,MAPK阳性3年无复发生存率显著低于MAPK阴性(χ~2=11.037,P<0.001);pMAPK阳性患者3年无复发生存率为39.1%,pMAPK阴性患者为58.7%,pMAPK阳性3年无复发生存率显著低于MAPK阴性(χ~2=4.103,P=0.041)。结论 MAPK、pMAPK可以作为HER-2阳性乳腺癌患者化疗疗效及生存预后的评估指标之一。

有丝分裂原活化蛋白激酶信号通路介导大鼠星形胶质细胞氧糖剥夺后水通道蛋白4的表达

目的探讨有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)是否介导缺血后大鼠星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)的表达。方法分离培养新生Sprague-Dawley大鼠脑星形胶质细胞。第2代细胞分成对照组、氧糖剥夺(OGD)组和阻断组。后两组复制OGD 5 h后复氧模型,12 h后阻断组分别换入含U0126(1μmol/L和10μmol/L,U1组和U10组)、SP600125(1μmol/L和10μmol/L,SP1组和SP10组)和SB203580(1μmol/L和10μmol/L,SB1组和SB10组)的培养液。复氧后0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、3 h、4 h、8 h和12 h检测OGD组细胞体积,复氧后0.5 h、1 h、1.5 h、8 h和12 h Western blotting法检测OGD组AQP4表达;复氧后24 h,检测各组乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western blotting法检测各组AQP4,磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)和p38MAPK(p-p38 MAPK)表达。结果复氧后1.5 h、2 h、3 h和4 h时,OGD组细胞体积较对照组显著增大(P<0.001),OGD组AQP4水平较对照组显著升高(P<0.001),并在复氧后1.5 h达到峰值。OGD组p-ERK、p-JNK和p-p38 MAPK、AQP4水平较对照组显著增加(P<0.001),阻断组p-ERK、p-JNK和p-p38 MAPK较OGD组显著下降(P<0.001),SB10组AQP4较OGD组显著下降(P<0.001)。除SP1组、SB1组外,各干预组LDH活性较OGD组显著下降(P<0.01),SB10组最低(P<0.001)。结论 MAPK信号通路,特别是p38MAPK可介导大鼠星形胶质细胞AQP4蛋白表达,加重细胞坏死。

有丝分裂原激动蛋白激酶(MAPK)信号级联与肾脏疾病

有丝分裂原活化蛋白激酶 (mitogen activatedproteinkinase ,MAPK)是一种胞浆内广泛分布的含有丝氨酸 苏氨酸残基的蛋白质激酶 ,它通过转录因子磷酸化而改变基因的表达水平 ,参与多种胞内信息传递过程。

MEKK3蛋白激酶的研究进展

有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶(mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase kinase kinase 3,MEKK3)是MAP3K(mitogen-activated protein kinase kinase kinase)家族的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它在哺乳类动物的各种组织中广泛表达。该蛋白激酶能够有效激活有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和NF-κB信号通路,与多种肿瘤的发生与发展密切相关。本文将从其结构、蛋白磷酸化、信号传导、免疫调节及与肿瘤的关系等方面对MEKK3的研究进行相关综述。

EPHB6受体型酪氨酸蛋白激酶对ERK信号通路的调控效应

目的:探讨促红细胞生成素产生肝细胞B6(EPHB6)对于胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路的作用.方法:以非小细胞肺癌细胞系A549作为研究对象,采用Western Blot法检测ERK的磷酸化水平及通路检测(PathDe-tect)法检测ERK下游分子和Ets结构域蛋白1(Elk-1)转录因子的活性.结果:A549细胞中EPHB6的表达导致ERK的磷酸化.相反,siRNA干涉EPHB6的表达可以逆转ERK的磷酸化.并且,EPHB6导致的ERK磷酸化与Elk-1转录因子脱偶联.结论:表明EPHB6对于ERK信号通路具有调控作用.

有丝分裂原活化蛋白激酶及核转录分子在宫颈癌病变中的表达与高危型HPV感染关系

目的探讨有丝分裂原活化蛋白激酶、核转录分子(MEKK3、NF-κB)在宫颈癌及宫颈癌前病变中表达及其与高危型HPV感染的关系,进一步分析宫颈癌的发生机制,为其靶向治疗提供指导。方法应用免疫组化(En Vision)法检测90例宫颈癌、76例宫颈上皮内瘤变(CIN)及30例慢性宫颈炎组织中MEKK3、NF-κB表达水平,同时于术前采用第二代基因杂交捕获法(HC-Ⅱ)检测患者高危型HPV(HR-HPV)感染情况。结果 MEKK3、NF-κB在慢性宫颈炎、宫颈CIN和宫颈癌中阳性表达率均逐渐升高,差异均有统计学意义(P<0.05);MEKK3、NF-κB在宫颈癌临床分期、浸润深度及淋巴结转移阳性率分别递增,差异均有统计学意义(P<0.05);HR-HPV在宫颈癌中感染阳性率均高于宫颈CIN和慢性宫颈炎(P<0.05);MEKK3、NF-κB过表达均与HR-HPV感染呈正相关(P<0.05)。结论 MEKK3、NF-κB过表达可能与HR-HPV感染有关,其在宫颈癌的发生发展过程中起协同作用,联合检测MEKK3、NF-κB和HR-HPV可作为宫颈癌筛查及预后判断的生物学标志物。

有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶3在早期子宫颈癌中的表达及其临床意义

目的探讨有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶3(MEKK3)表达在早期子宫颈癌中的临床意义。方法收集山西省肿瘤医院2010年3月至10月行手术治疗的71例子宫颈上皮内瘤变(CIN)患者、92例早期子宫颈癌患者的子宫颈组织标本,以及同期30例因患子宫肌瘤而切除子宫患者的正常子宫颈组织标本,通过免疫组织化学法检测MEKK3的表达情况并分析其临床意义。计数资料的比较采用χ^2检验。结果MEKK3在正常对照组中的阳性表达率为13.33%(4/30),CINⅠ组为28.57%(6/21),CINⅡ组为38.89%(7/18),CINⅢ组为56.25%(18/32),早期子宫颈癌组为70.65%(65/92)。各组间MEKK3阳性表达率比较,差异有统计学意义(χ^2=36.870,P<0.05)。与正常对照组相比,CINⅢ组和早期子宫颈癌组MEKK3阳性表达率升高(χ^2值分别为12.458和30.251,均P<0.005);与CINⅠ组相比,早期子宫颈癌组MEKK3阳性表达率升高(χ^2=12.964,P<0.005)。MEKK3的表达与组织分化程度和淋巴结转移有关(χ^2值分别为6.832和4.404,均P<0.05),与患者年龄、国际妇产科联盟(FIGO)分期、组织学类型、肿瘤直径及侵犯肌层深度无关(均P>0.05)。结论MEKK3在早期子宫颈癌的发生、发展及预后中发挥一定的作用,检测其表达有助于评估早期子宫颈癌病变程度。

有丝分裂原活化蛋白激酶/细胞外调节信号激酶信号转导通路与肝纤维化逆转的相关性

近年发现,无论是消除致病因素或是应用有效抗纤维化药物,都可逆转患者及模型动物的肝纤维化[1].但具体机制尚不明确.由于有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节信号激酶(ERK)信号通路在多种损伤修复过程中发挥重要作用,我们在建立肝纤维化自发逆转动物模型的基础上,检测MAPK/ERK信号通路的活性,以揭示该通路与肝纤维化逆转的相关性.

基于有丝分裂原活化蛋白激酶信号通路探讨谷胱甘肽对肝损伤小鼠的保护作用

目的探讨谷胱甘肽对肝损伤小鼠的保护作用及机制。方法45只小鼠随机分为正常组、模型组和谷胱甘肽组,分别经生理盐水、生理盐水和还原型谷胱甘肽灌胃,灌胃后模型组和谷胱甘肽组腹腔注射四氯化碳橄榄油溶液建模,正常组腹腔注射等剂量生理盐水。24 h后麻醉取血,采用HE染色和VG染色观察肝左叶结构,比较血清ALT、AST、HA、Hyp水平及肝组织p38、p-p38、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK1/2、p-JNK1/2蛋白表达水平。结果正常组肝细胞形态、结构、肝小叶均正常,模型组可见炎细胞浸润,肝小叶破坏,谷胱甘肽组可见少量炎细胞浸润、胶原纤维增生;模型组肝指数(4.37±0.73)%高于正常组(3.24±0.72)%和谷胱甘肽组(3.32±0.22)%(P<0.05);血清ALT、AST、HA、Hyp比较模型组>谷胱甘肽组>正常组(P<0.05);模型组p-p38/p38(0.0596±0.0092)、p-ERK1/2/ERK1/2(0.1123±0.0109)、p-JNK1/2/JNK1/2(0.5257±0.0082)均>谷胱甘肽组(0.0503±0.0152)、(0.0930±0.0109)、(0.3876±0.0482)>正常组(0.0327±0.0038)、(0.0614±0.0127)、(0.2760±0.0192)(P<0.05)。结论还原型谷胱甘肽可减轻急性肝损伤所致的肝细胞损伤,抑制纤维化,其机制可能与抑制有丝分裂原活化蛋白激酶通路,调控p-p38、p-ERK1/2、p-JNK1/2蛋白表达水平有关。

胎衣不下奶牛母体胎盘中有丝分裂原活化蛋白激酶及细胞外信号调节蛋白激酶基因异常表达的分析

目的分析胎衣不下(retained fetal membranes,RFM)奶牛母体胎盘组织中有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK,MEK)及细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK,p42/44 MAPK)的异常表达。方法选取年龄、胎次、体况相近的产后胎衣正常排出和RFM奶牛各3头,分别为N和R组。产后用子宫内膜采样器采集两组奶牛胎盘样本,Western blot法检测样本中MEK、p42/44 MAPK、P-p42/44MAPK蛋白表达水平,RT-qPCR法检测样本中MEK、p42/44 MAPK基因mRNA转录水平。结果与N组比较,R组奶牛胎盘组织中MEK蛋白表达水平显著下调(P <0. 01),p42/44 MAPK蛋白表达水平下调,但差异无统计学意义(P> 0. 05),P-p42/44 MAPK蛋白表达水平显著上调(P <0. 001);R组奶牛胎盘组织中MEK及p42/44 MAPK基因mRNA转录水平均显著下调(P <0. 01)。结论 RFM奶牛母体胎盘组织中MEK与p42/44 MAPK蛋白及m RNA转录水平均明显下调,可能是奶牛RFM发生机制中的关键。

P38有丝分裂原活化蛋白激酶在烟雾暴露大鼠肺血管重塑中的作用

目的探讨P38有丝分裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)在烟雾暴露大鼠肺血管重塑中的作用。方法50只SD雄性大鼠随机分为对照组(C组)、烟雾暴露4周组(S4组)、烟雾暴露12周组(S12组)、P38MAPK抑制剂(SB203580)干预4周组(SB4组)及SB203580干预12周组(SB12组),每组各10只。采用苏木素-伊红染色观察大鼠肺动脉形态改变,测量并计算肺动脉管壁面积/血管总面积比值(WA)和血管壁厚度/血管外径比值(WT);采用免疫组化法检测大鼠肺动脉α-平滑肌肌动蛋白(SMA)和P38MAPK蛋白的表达水平;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠肺动脉P38MAPK mRNA的表达水平。结果烟雾暴露组大鼠肺动脉管壁可见不同程度增生;与烟雾暴露各组比较,P38MAPK抑制剂干预各组大鼠肺动脉管壁增生减弱。S4组、S12组大鼠肺动脉WA、WT、α-SMA、P38MAPK蛋白及mRNA的表达水平均高于C组,且S12组上述指标均高于S4组(P<0.05);SB4组大鼠肺动脉WA、WT、α-SMA、P38MAPK蛋白及mRNA的表达水平均低于S4组,SB12组上述指标均低于S12组(P<0.05)。结论烟雾暴露可上调大鼠肺血管P38MAPK的表达并促使肺血管重塑,SB203580明显抑制大鼠肺血管P38MAPK的表达和肺血管重塑,推测P38MAPK信号通路可能参与烟雾暴露引起的大鼠肺血管重塑过程。

脊髓TLR4/p38MAPK级联活化介导持续性术后痛时TNF-α的增加

目的:研究脊髓肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)在持续性术后痛中的作用及与Toll样受体4(TLR4)/p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)级联的关系。方法:选择鞘内置管成功的雄性SD大鼠120只,采用随机数字表法随机分为5组(每组24只):假手术组、持续性术后痛组、Toll样受体4小干扰RNA组(TLR4 si RNA组)、4-(4-氟苯基)-2-(4-甲磺酰基苯基)-5-(4-吡啶基)咪唑组(SB203580组)和重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子组(rh TNFR-Fc组)。按Flatters介绍的方法建立大鼠皮肤肌肉切口牵拉(skin/muscle incision and retraction,SMIR)持续性术后痛模型;在术前1天及术后第1、3、7、12和22天时测定大鼠机械缩足反应阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT);按ELISA法测定脊髓TNF-α含量。结果:与术前基础值及假手术组比较,持续性术后痛组大鼠在术后第3、7、12和22天MWT明显降低(P<0.05),脊髓TNF-α含量在术后7、12和22天明显升高(P<0.05);与持续性术后痛组比较,TLR4 si RNA组和SB203580组大鼠在术后第3、7和12天,rh TNFR-Fc组在术后第7和12天MWT明显升高(P<0.05),TLR4 si RNA组、SB203580组和rh TNFR-Fc组大鼠脊髓TNF-α含量在术后第7、12和22天明显降低(P<0.05)。结论:脊髓TNF-α参与了大鼠SMIR持续性术后痛的形成,其增加与脊髓TLR4/p38MAPK级联的活化有关。

人参、三七提取物对Ras相关信号蛋白的影响

目的探讨益气活血中药人参、三七提取物对血管内皮细胞血管生成信号蛋白血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)、Ras及有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达的影响。方法采用Western Blot检测人脐静脉内皮细胞(HUVEC)上VEGFR-2、Ras、MAPK蛋白表达和人参、三七提取物大、中、小剂量及碱性成纤维生长因子(bFGF)对其表达的影响。结果与空白对照组比较,中药大剂量组VEGFR-2及Ras蛋白表达明显增强,中药小剂量组MAPK及Ras蛋白表达明显上调,而bFGF组VEGFR-2、Ras及MAPK的表达均显著增强,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论人参、三七提取物可促进血管生成信号通路上VEGFR-2、Ras及MAPK蛋白的表达,这可能是益气活血中药促进内皮增殖、产生促血管生成作用的基础。

ERK信号通路在檞皮素促大鼠MSCs成骨分化中的作用

目的:观察细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在檞皮素(QUE)促进SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化过程中的作用。方法:(1)用0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L和100μmol/L QUE干预MSCs,MTT法检测各浓度QUE对MSCs增殖的影响,碱性磷酸酶(ALP)测定试剂盒检测各浓度QUE对MSCsALP表达的影响;(2)用ERK1/2抑制剂干预后,加入QUE,用ALP测定试剂盒检测ALP的表达,ELISA法检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)和骨钙素(BGP)的表达,Western blotting检测ERK1/2的表达,荧光定量PCR检测转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA、骨形成蛋白2(BMP-2)mRNA和核心结合因子α1(Cbfα1)mRNA表达。结果:(1)0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L QUE剂量依赖性地促进MSCs ALP的表达,同时能促进MSCs的增殖;(2)与空白组相比,QUE组ALP、BGP和ColⅠ表达均增加(P<0.01),加入ERK1/2抑制剂后,磷酸化的ERK1/2表达减少(P<0.05),同时ALP、BGP和ColⅠ表达降低(P<0.01);(3)与空白组比较,QUE组TGF-β1mRNA、BMP-2 mRNA和Cbfα1mRNA的表达均增加(P<0.05),加入ERK1/2抑制剂后这3个基因的表达都下降(P<0.05)。结论:一定浓度的QUE能促进MSCs的增殖和成骨分化,ERK通路的激活在此过程中起到了重要的作用。