扶正化瘀方调控代谢抑制巨噬细胞促炎表型极化的机制研究

目的利用label-free蛋白质组学技术探究扶正化瘀方(FZHY)抑制巨噬细胞向促炎表型(M1)极化的分子机制。方法脂多糖(LPS)和γ干扰素(IFN-γ)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7向M1极化。细胞分为空白对照组、M1组和FZHY低、高剂量组(100、200 mg/L),通过非标记定量蛋白质组学遴选差异蛋白(DEPs)及进行生物信息学分析,并通过实验验证差异蛋白及其信号通路。结果受LPS和IFN-γ诱导后,巨噬细胞向M1极化,与空白对照组比较,共有223个DEPs,其中120个上调,103个下调。经FZHY处理后,与M1组比较,共有103个DEPs,其中80个上调,23个下调。以上各组DEPs的交集为28个,其中脂肪分化相关蛋白2(Plin2)、溶酶体酸脂肪酶A(Lipa)、含犰狳重复序列蛋白6(Armc6)等25个DEPs在M1组中水平降低,在FZHY高剂量组中显著上调;IFN-γ诱导的GTP酶1(Iigp1)、三结构域蛋白质30a(Trim30a)和RAB11家族相互作用蛋白1(Rab11fip1)共3个蛋白在M1组中水平提高,在FZHY高剂量组中显著下调。差异蛋白采用基因本体(GO)数据库分析,发现其生物学功能包括定位修复等、细胞组成涉及细胞质部分等、分子功能包括催化活性等。采用京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库分析显示差异蛋白富集于代谢通路、溶酶体以及谷胱甘肽代谢等。与空白对照组比较,M1组的炎症表面标志物白细胞分化抗原40(CD40)、白细胞分化抗原86(CD86)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及差异蛋白Iigp1的表达显著提高,而差异蛋白Plin2的表达降低。FZHY处理后可逆转上述炎症诱导的蛋白表达。M1巨噬细胞代谢以糖酵解为主,α-酮戊二酸脱氢酶(AKGDH)和谷氨酰胺连接酶(GLUL)在M1组中的表达降低,伴随着糖酵解速率提高,FZHY的处理可显著提高AKGDH和GLUL的基因表达并降低糖酵解速率。结论FZHY方可通过调控代谢中的关键代谢酶AKGDH、GLUL和差异蛋白Plin2、Iigp1及炎症标记物CD40、CD86、iNOS的表达,下调糖酵解速率而抑制巨噬细胞向M1的极化。

SB203580对LPS诱导的肺泡巨噬细胞NR8383促炎表型的影响

目的探讨p38MAPK信号通路抑制剂SB203580对肺泡巨噬细胞促炎表型的影响。方法培养肺泡巨噬细胞NR8383,细胞融合至80%后铺6孔板,设3组为对照组,LPS组和SB203580组。LPS组中LPS的浓度为2μg/mL;SB203580组提前30 min加入SB203580,给药浓度为50μM,然后给予LPS刺激。24 h后,收集3组细胞。提取细胞蛋白,用Western blot方法检测细胞中干扰素调节因子5(IRF5)、iNOS蛋白及NFκB信号通路关键蛋白的表达变化,细胞免疫荧光方法检测iNOS蛋白在NR8383细胞中的表达分布。结果 Western blot结果显示,LPS刺激NR8383细胞后IRF5表达上调(P<0.05),iNOS蛋白表达显著上调(P<0.05);细胞荧光实验显示iNOS蛋白荧光强度增加,p-NFκB p65蛋白高表达(P<0.05)。给予SB203580后,IRF5(P<0.05)、iNOS(P<0.05)、p-NFκB p65(P<0.05)蛋白的表达被抑制。结论 LPS刺激肺泡巨噬细胞NR8383,细胞呈现M1型促炎的表型,NFκB信号通路激活;给予SB203580后,肺泡巨噬细胞的促炎表型被抑制,同时抑制了NFκB信号通路激活,这为临床通过抑制肺泡巨噬细胞的促炎表型降低肺组织炎症损伤提供实验依据和治疗策略。