人小胶质细胞中促甲状腺激素受体的表达、分布及活性观察

目的 探讨人小胶质细胞(HMC3)中促甲状腺激素受体(TSHR)的表达、分布及活性。方法 取人小胶质细胞HMC3,以人甲状腺细胞及肝细胞作为对照,采用逆转录聚合酶链式反应检测TSHRN mRNA表达,以验证TSHR mRNA转录物。通过Western blotting法和免疫荧光染色分析测定HMC3细胞中TSHR蛋白水平及分布。将HMC3细胞分为0、20、50、100、200 ng/mL促甲状腺激素受体刺激抗体(TSAb)组和阴性对照组,将各组细胞加入100μmol/L磷酸二酯酶抑制剂IBMX预孵育60 min,然后向TSAb组分别加入相应浓度的TSHR特异性抗体TSAb培养24 h。使用免疫测定试剂盒测定各组环磷酸腺苷(cAMP)水平,验证TSHR在HMC3细胞中的活性。结果 在HMC3细胞中检测到TSHR mRNA,其序列与人甲状腺细胞及肝细胞来源的mRNA相同。TSHR蛋白在HMC3细胞的细胞膜中表达。与0 ng/mL TSAb组相比,20 ng/mL TSAb组cAMP水平无统计学差异,50、100、200 ng/mL TSAb组cAMP水平增加,且高浓度组cAMP水平高于低浓度组(P<0.05或<0.01)。结论 TSHR在人小胶质细胞中存在并表达于细胞膜,且具有信号传导功能。

单核细胞计数/高密度脂蛋白胆固醇及促甲状腺激素对绝经期女性急性冠脉综合征患者预测价值及与冠状动脉病变相关性研究

背景既往研究发现单核细胞计数、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、促甲状腺激素(TSH)与急性冠脉综合征(ACS)相关,然而单核细胞计数/高密度脂蛋白胆固醇(MHR)与ACS发病的相关性研究较少,绝经期女性MHR、TSH与ACS发病是否存在关联仍不明确。目的探讨MHR、TSH对绝经期女性ACS患者发病的预测价值,并研究上述指标与患者冠状动脉狭窄程度的相关性。方法选择2020—2021年在苏北人民医院心血管内科住院诊治并行冠状动脉造影的325例绝经期女性作为研究对象。通过电子病历系统收集患者一般资料,研究对象入院后采集静脉血检测单核细胞计数、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、HDL-C、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、TSH等。以双平面Simpson法测量左心室射血分数(LVEF),通过冠状动脉造影术观察冠状动脉病变情况。采用Gensini评分标准统一衡量冠状动脉病变情况。符合ACS诊断标准的患者为ACS组(n=184),非ACS者为对照组(n=141)。同时依据Gensini评分三分位数将ACS组进行分组:≤36.5分为低危亚组(n=59),36.6~66.5分为中危亚组(n=64),>66.5分为高危亚组(n=61)。采用单因素及多因素Logistic回归分析探究ACS的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估TSH、MHR及联合检测对ACS的诊断价值并计算ROC曲线下面积(AUC)。采用Spearman秩相关分析探究TSH、MHR及联合检测指标与Gensini积分的相关性。结果ACS组与对照组患者基线资料结果示,ACS组BMI、吸烟比例、高血压、糖尿病、LDL-C、单核细胞计数、TSH、MHR高于对照组,LVEF、HDL-C低于对照组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果示,吸烟、高血压、BMI≥24.0 kg/m^(2)、LDL-C≥3.30 mmol/L、TSH≥2.1m U/L、MHR≥0.25是绝经期女性发生ACS的危险因素,HDL-C≥1.2 mmol/L为保护因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,MHR、TSH及联合预测指标诊断绝经期女性ACS的AUC分别为0.777(95%CI=0.725~0.830,P<0.001)、0.747(95%CI=0.694~0.800,P<0.001)、0.810(95%CI=0.764~0.857,P<0.001)。中危亚组、高危亚组MHR、TSH均高于低危亚组,高危亚组MHR、TSH高于中危亚组(P<0.05)。Spearman秩相关分析结果示,ACS组患者MHR(r_(s)=0.497,P<0.01)、TSH(r_(s)=0.498,P<0.01)及联合预测指标与Gensini评分均呈正相关(r_(s)=0.600,P<0.001)。结论TSH及MHR升高是绝经期女性发生ACS的独立危险因素,两指标及联合对病情预测具有较高的灵敏度和特异度,并与患者冠状动脉病变程度相关,对绝经期女性ACS的早期识别及风险评估具有一定的临床应用价值。

人促甲状腺激素受体A亚单位蛋白在昆虫细胞体系中的分泌性表达

目的拟构建昆虫细胞分泌表达体系,在草地夜蛾卵巢细胞分泌性促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)A亚单位蛋白。方法将TSHR A亚单位蛋白(22-289)和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因连接到质粒,并通过转化、蓝白斑筛选获得重组杆粒,将其转染入sf9昆虫细胞收获重组杆状病毒,扩增并测定滴度。最终通过蛋白印迹实验鉴定重组蛋白的表达并优化表达条件。结果在蛋白表达体系的构建过程中,PCR鉴定和测序均证实了重组质粒和重组杆粒序列的正确性。将重组杆粒转染入细胞后观察到病毒出芽迹象,空斑实验鉴定P1代病毒的滴度为2×10^(7) pfu/m。蛋白印迹显示重组蛋白分子质量为55 ku,主要在培养基中。蛋白表达的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1,最佳感染时程为72 h。结论本研究构建了TSHR A亚单位的昆虫细胞杆状病毒表达体系,该体系能够外泌性表达分子质量为55 ku左右的蛋白TSHR 22-289,且蛋白能够成功的糖基化修饰。该系统为其工业化平台的建设及生产提供前期基础,也针对日后TSHR蛋白的研究和Graves病的病因预防提供了有用的工具。

信迪利单抗注射液致原发性甲状腺功能减退症合并促肾上腺皮质激素缺乏症1例

现阶段,免疫检查点抑制剂(ICPis)在肿瘤领域发展越来越快,是肿瘤免疫治疗的选择之一^([1])。ICPis通过调控免疫系统,活化免疫细胞,产生免疫应答,从而来消灭肿瘤细胞,在此过程中,也会因自身免疫激活而出现一系列不良反应,主要发生于内分泌系统、皮肤、呼吸系统、消化系统等^([2-3])。部分患者应用ICPis后,会出现垂体、肾上腺、胰腺、甲状腺等腺体功能异常^([3])。随着肿瘤的免疫治疗的应用越来越广泛,相关患者出现内分泌腺体功能异常的情况随之增多。

34周以下早产儿促甲状腺激素延迟升高及影响因素

目的 评估<34周早产儿促甲状腺激素延迟升高(dTSH)的相关因素。方法 回顾性分析2020年3月—2021年9月出生并入住新生儿重症监护室的<34周早产儿的临床资料、初筛和生后15~28天静脉血促甲状腺激素(TSH)结果。结果 共纳入441例<34周早产儿,男253例、女188例,平均胎龄(30.0±2.0)周。dTSH 17例(3.9%),其中暂时性高TSH血症7例,先天性甲状腺功能减退症(CH)10例。初筛与生后15~28天,dTSH组的TSH水平均高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析发现,使用多巴胺、低出生体重、5分钟Apgar评分<7是dTSH发生的独立危险因素(P<0.05)。结论 <34周早产儿存在dTSH现象,低出生体重、5分钟低Apgar评分,使用多巴胺更容易出现dTSH,对早产儿应注意甲状腺功能的动态监测。

TSH和高碘对FRTL细胞甲状腺激素合成相关基因表达的影响

目的观察不同浓度TSH和高碘对FRTL细胞钠/碘转运体(NIS)mRNA、甲状腺过氧化物酶(TPO)和甲状腺球蛋白(Tg)基因表达的影响。方法采用FRTL细胞系,用不含有TSH的培养基培养7d后,用不同水平TSH(0.1、0.5、1、10、50、100U/L)刺激。培养24h后,检测3种基因NIS、TPO、Tg的mRNA水平。高碘组按照10-7、10-6、10-5、10-4、10-3mol/L的碘离子浓度加入培养基,在第24和48小时,收集细胞,检测3种基因NIS、TPO、Tg的mRNA水平。结果TSH刺激24h后,FRTL细胞内NIS、TPO、Tg基因表达都伴随TSH水平的升高而上升。TSH从0.1U/L开始就对NIS基因表达增加有显著性影响(P<0.05),TSH对TPO基因表达的刺激从1U/L开始有显著性影响。TSH对Tg基因表达的作用从0.1U/L开始就有刺激作用(P<0.05)。高碘组对细胞这3种基因的表达没有刺激作用。结论TSH对FRTL细胞系产生甲状腺激素具有明显的刺激上调的作用。但高碘对该细胞3种基因的表达没有上调的作用。

Roche E170检测系统测定促甲状腺激素(TSH)分析灵敏度的验证

目的对Roche E170检测系统测定促甲状腺激素(TSH)项目的检测低限、功能灵敏度进行验证。方法对空白样品进行连续20 d在天间重复性实验,验证TSH检测低限;制备系列低浓度的TSH样品,验证其功能灵敏度。结果RocheE170检测系统测定TSH的最低检测限为0.005μIU/ml,与Roche厂家产品说明书声称的一致;其功能灵敏度该室验证值为0.011μIU/ml,与Roche厂家产品说明书声称有差异(0.014μIU/ml)。结论实验室必须验证和建立本实验室条件的分析灵敏度,为甲状腺患者提供准确可靠的促甲状腺激素(TSH)低值结果。

褪黑素抑制促甲状腺释放激素刺激乳鼠垂体前叶细胞催乳素基因的表达

褪黑素（melatonin，MEL）主要由松果腺分泌，它是一种吲哚类激素，其功能之一能抑制下丘脑的促性腺释放激素和垂体前叶的促性腺激素。本工作利用原位杂交方法，观察了MEL对促甲状腺释放激素（thyrotropinreleasinghormone，TRH）兴奋垂体前叶激素-催乳素（prolactin，PRL）表达的影响。结果表明，在一定浓度范围内，MEL不但可抑制TRH刺激PRL基因表达的效应，还可直接抑制垂体前叶细胞PRL基因的表达。这为进一步探讨在体条件下MEL对PRL合成与分泌的调节，提供了实验依据。

碘过量对大鼠仔鼠垂体促甲状腺激素细胞的影响

目的探讨碘过量对仔鼠垂体TSH细胞的影响。方法将断乳1个月的W istar大鼠,雌雄各半随机分为4组:NI组、10H I组、50H I组和100H I。饲养3个月的雌雄大鼠1∶1合笼交配产生仔鼠,断乳后的仔鼠喂养同上述大鼠。测定出生60日龄仔鼠的甲状腺和垂体的相对重量及垂体TSH细胞的体密度和面数密度。结果50H I组、100H I组仔鼠的体密度和面数密度明显高于NI组和10H I组,但垂体和甲状腺的相对重量与NI组相比无明显变化。结论50H I组、100H I组不会引起仔鼠甲状腺肿,甲状腺对碘过量有较强的适应性和耐受性。

促红细胞生成素和甲状腺激素对K562细胞铁代谢的影响

目的 探讨重组人促红细胞生成素 (rh EPO)和甲状腺激素 (T3)对红白血病细胞 K5 6 2铁代谢的影响及其可能的机制。方法 参照骨髓铁染色的方法进行细胞铁染色 ,计算阳性细胞率 ,并通过流式细胞术观察转铁蛋白受体 (Tf R)的表达。结果 rh EPO与 Fe Cl3共培养细胞时 ,可见铁染色阳性细胞率有明显上升 ,尤以 rh EPO5 U/ml组上升更为明显 (P<0 .0 1) ,且随培养时间延长 ,阳性率逐渐上升 ;不同浓度 T3均使 K5 6 2铁染色阳性细胞率明显上升 ,且以培养 4 8h组阳性率最高 ;不同浓度 rh EPO培养细胞 72 h均使 K5 6 2细胞 Tf R表达明显增加 (P<0 .0 5 ) ,而不同浓度的 T3对转铁蛋白受体的表达无明显作用。结论 rh EPO能增加 K5 6 2细胞铁染色的阳性细胞率 ,其机制可能是由于增加 Tf R的表达使细胞大量摄入铁 ;而

促甲状腺激素受体抗体对人肝癌细胞HepG2凋亡和增殖的影响

目的格雷夫斯病(Graves disease,GD)患者肝功能损害发病率高,可能与升高的促甲状腺激素受体抗体(TRAb)相关,探讨TRAb对肝细胞损伤的机制。方法用含不同浓度TRAb的GD患者血清、正常人血清及胎牛血清的DMEM培养基处理人肝癌细胞株HepG2细胞,采用异硫氰酸荧光素(annexin V-FITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)及MTT法分别检测细胞的凋亡和增殖状况。结果 5%、10%及20%TRAb的GD血清能促进HepG2细胞增殖,且HepG2细胞凋亡较对照组增高明显,以中晚期凋亡为著。结论 TRAb能诱导人肝癌细胞HepG2细胞凋亡,参与肝细胞损伤的发生。

碘过量对仔鼠垂体促甲状腺激素细胞的形态学影响

目的探讨碘过量时60日龄大鼠仔鼠垂体TSH细胞的形态学变化。方法将断乳1个月的Wistar大鼠,雌雄各半随机分为NI组、10HI组、50HI组和100HI。饲养3个月的雌雄鼠1:1合笼交配产生仔鼠,断乳后的仔鼠喂养同上述大鼠。测定60日龄仔鼠的血清甲状腺激素水平及垂体TSH细胞的体密度和强阳性细胞百分比。结果与NI组比较,50HI组、100HI组60日龄仔鼠的体密度和强阳性细胞百分比明显增高,而10HI组无明显改变;50HI组、100HI组的血清甲状腺素高于NI组。结论碘过量可导致仔鼠TSH细胞体积增大,强阳性细胞数据多并呈剂量依赖性,可能是由于T4升高抑制TSH细胞释放TSH,使TSH颗粒贮积在细胞内造成的。

鸡胚胎腺垂体促甲状腺激素细胞的发生及其变化

应用免疫组织化学方法,对第3.5～20.5 d鸡胚腺垂体促甲状腺激素亚单位(TSH撸┫赴姆⑸⑹亢托翁植急浠媛山辛搜芯俊=峁允荆杭ε叻⒂牡?0.5 d,有少量TSH呦赴植加谙俅固迩耙叮赴派常伲舜螅患ε叻⒂牡?4.5 d以后,TSH呦赴灾黾樱≒ < 0.05),细胞体积增大,胞浆增多,细胞着色浓,分布于腺垂体前叶边缘区,少量分布于后叶背侧。研究结果证明,鸡胚腺垂体TSH呦赴⑸谂咛シ⒂闹衅冢幌赴脑鲋撤只谭⑸诩ε叻⒂闹泻笃冢籘SH的合成和分泌功能在胚胎发育的后期最旺盛。TSH呦赴植加谙俅固迩耙逗秃笠侗巢唷?

人促甲状腺激素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

以进口纯人促甲状腺激素（ｈ—ＴＳＨ）作免疫原，经用Ｇａｌｆｒｅ等杂交瘤制备法，分别制备成１３Ｂ４、１３Ｃ４、８Ｈ１０、３Ｅ４四株具有抗ｈ—ＴＳＨ特异性，与促黄体素、促卵泡素、绒毛膜促性腺素无明显交叉反应。具有稳定分泌功能的杂交细胞株。经亚型鉴定均为ＩｇＧ１。液相中与１２５Ｉ—ｈＴＳＨ的最大结合率依次为１３Ｂ４、３Ｅ４、８Ｈ１０和１３Ｃ４，分别为６１％、５９％、５６％和３４％。表位分析表明，４株单抗主要针对两个不同表位。在此基础上已成功地建立ｈ—ＴＳＨ固相免放和酶免吸附超敏测定法。

促甲状腺激素受体可在微血管内皮细胞表达

目的:检测促甲状腺激素受体(TSHR)在小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)的表达。方法:取对数生长期bEnd.3细胞,采用RT-PCR和Western Boltting方法检测bEnd.3细胞TSHR mRNA和蛋白表达水平。结果:bEnd.3细胞总RNA浓度为2.9186μg/μl,A260/A280为1.97。TSHR mRNA的扩增效率为96.41%±0.82%,溶解曲线呈单峰,相对表达量为0.64±0.14(相对睾丸组织)。电泳结果显示bEnd.3细胞能清晰表达TSHR mRNA。Western Blotting显示bEnd.3细胞可以检测到TSHR的α和β亚基蛋白表达,β亚基相对表达量为0.46±0.05(相对β-actin)。结论:小鼠脑微血管内皮细胞可表达TSHR,该结果有助于临床研究TSH对血管内皮细胞功能的影响。

促甲状腺素释放激素对小鼠脾细胞产生细胞因子的影响

观察促甲状腺素释放激素（ＴＲＨ）在体内和体外对小鼠脾细胞产生ＩＦＮ和ＩＬ－２的影响。结果表明，正常小鼠每天腹腔注射ＴＲＨ０．２μｇ／只，共１０ｄ，其脾细胞受ＣｏｎＡ刺激产生的ＩＦＮ和ＩＬ－２产量无显著增高（Ｐ＞０．０５）；对氢化可的松处理的免疫抑制小鼠，加用以上剂量ＴＲＨ后，其脾细胞产生ＩＦＮ和ＩＬ－２的能力明显提高（Ｐ＜０．０１）。在体外用ＴＲＨ孵育小鼠脾细胞，其浓度在０．００３９～１（１０－１０ｍｏｌ／Ｌ）时可显著提高ＣｏｎＡ诱生的脾细胞ＩＦＮ和ＩＬ－２的产量，且产量与ＴＲＨ的浓度呈正相关；但高于此浓度时，其产量与ＴＲＨ浓度呈负相关，呈现与剂量相关的双相调节作用。提示ＴＲＨ的免疫调节机理之一是通过影响这些细胞因子的产生。

促甲状腺激素与脂肪细胞因子、糖尿病关系的研究进展

超重和肥胖是糖尿病的重要危险因素,肥胖与2型糖尿病(T2DM)发病以及心血管病变发生的风险增加显著相关。近年来研究表明促甲状腺激素的受体(TSHR)是脂肪细胞分化的重要的调节因子,脂肪组织中TSHR的异常表达与肥胖相关。目前TSHR在脂肪细胞的信号网络及其下游通路中的作用仍未研究清楚,且国内外有关T2DM人群促甲状腺激素(TSH)与脂肪细胞因子关系的研究也少有报道。本文就TSH与肥胖、脂肪细胞因子、T2DM关系的研究进展作一综述。

碘缺乏与碘过量对仔鼠垂体促甲状腺激素细胞的影响

目的探讨碘缺乏与碘过量对20d龄仔鼠垂体TSH细胞的形态学影响。方法将断乳1个月的Wistar大鼠,雌雄各半随机分为5组:NI组、10HI组、50HI组、100HI及LI组。饲养3个月的雌雄大鼠1∶1合笼交配产生仔鼠,断乳后的仔鼠喂养同上述大鼠。测定20d龄仔鼠垂体TSH细胞的体密度和面数密度。结果100HI组仔鼠垂体TSH细胞的体密度明显高于NI组,LI组垂体TSH细胞的体密度和面数密度均明显高于NI组。结论碘缺乏对垂体TSH细胞的影响大于碘过量对TSH细胞所造成的影响。

不同浓度碘对大鼠仔鼠垂体促甲状腺激素细胞的影响

目的探讨不同浓度碘对60日龄仔鼠垂体TSH细胞的影响。方法将断乳1个月的Wistar大鼠仔鼠,雌雄各半随机分为5组:NI组、10HI组、50HI组、100HI及LI组。饲养3个月的雌雄大鼠1∶1合笼交配产生仔鼠,断乳后的仔鼠喂养同上述大鼠。测定60日龄仔鼠垂体TSH细胞的体密度、强阳性细胞百分数及甲状腺的相对重量、血清甲状腺激素水平。结果50HI、100HI组仔鼠垂体TSH细胞的体密度、强阳性细胞百分数及血清T4明显高于NI组,LI组垂体TSH细胞的体密度明显高于NI组、血清T4明显低于NI组,各碘过量组甲状腺的相对重量与NI组相比没有差别,LI组仔鼠甲状腺的相对重量明显高于NI组。结论碘缺乏对甲状腺、垂体TSH细胞的影响要强于碘过量对甲状腺、垂体TSH细胞所造成的影响。

超声联合血清TSH、FGF-19检测在甲状腺癌术前N分期中的应用价值

目的探讨超声联合血清促甲状腺激素(TSH)、成纤维细胞生长因子19(FGF-19)检测在甲状腺癌术前N分期中的应用价值。方法回顾分析2021年10月至2022年10月在深圳市宝安区人民医院实施甲状腺切除手术的100例患者临床资料,根据术后淋巴结节活检病理结果将其分为pN0期、pN1a期和pN1b期,采用Kappa检验分析超声评估N分期和病理评估的一致性;采用单因素及多因素分析甲状腺癌术前N分期的影响因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析超声联合血清TSH、FGF-19检测对甲状腺癌术前N分期诊断的价值。结果术前超声评估N分期与病理N分期呈中等一致性(Kappa=0.52,P<0.05)。单因素分析提示超声结节数量、纵横比、形态、边缘情况及血清TSH、FGF-19水平与术前N分期相关(χ^(2)分别=15.76、4.83、29.19、28.93,t分别=8.17、12.21,P均<0.05),多因素分析显示超声征象(结节数量、纵横比、形态、边缘情况)及血清TSH、FGF-19水平均为甲状腺癌术前N分期的独立影响因素(OR分别=1.04、1.30、1.05、1.29、1.18、1.62,P均<0.05)。ROC分析显示超声联合血清TSH、FGF-19检测诊断术前N分期的曲线下面积(AUC)为0.87,灵敏度为81.08%,特异度为93.65%,其中AUC、特异度均明显高于单一诊断(Z分别=5.64、8.24、4.52,χ^(2)分别=7.50、13.18、10.79,P均<0.05)。结论术前超声联合血清TSH、FGF-19对甲状腺癌术前N分期的诊断具有一定价值,三者联合可提高诊断特异度,为淋巴结转移的早期诊断提供可靠信息。