多瘤病毒增强活化子3和红细胞生成素产生肝细胞受体A2在脑胶质母细胞瘤中的作用

目的探讨多瘤病毒增强活化子3(PEA3)、红细胞生成素产生肝细胞受体A2(EPHA2)在脑胶质母细胞瘤中的作用。方法构建人脑星形胶质母细胞瘤U87细胞基因转染模型,将细胞系分为5组:空白组、PEA3干扰组、PEA3干扰空载组、EPHA2干扰组、EPHA2干扰空载组。通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验检测细胞增殖率,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果CCK-8检测细胞增殖结果显示,PEA3干扰组和EPHA2干扰组的细胞增殖率均明显低于空白组[(59.7±1.3)%、(59.5±0.7)%比(67.8±1.3)%](P<0.01或P<0.001),PEA3干扰空载组和EPHA2干扰空载组的细胞增殖率与空白组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。细胞划痕实验结果显示,PEA3干扰组和EPHA2干扰组的划痕愈合率低于空白组[(31.7±1.1)%、(23.0±2.6)%比(42.8±8.8)%],差异均有统计学意义(均P<0.05),PEA3干扰空载组和EPHA2干扰空载组划痕愈合率与空白组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。Transwell检测细胞侵袭能力结果显示,PEA3干扰组和EPHA2干扰组的侵袭细胞数明显少于空白组[(643±20)、(542±165)个比(1225±70)个](均P<0.001),而空白组与PEA3干扰空载组和EPHA2干扰空载组侵袭细胞数比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论干扰PEA3基因和EPHA2基因能明显降低脑胶质母细胞瘤细胞的增殖、迁移、侵袭能力。

促红细胞生成素产生肝细胞受体-配体系统在胚胎着床和发育中的作用

促红细胞生成素产生肝细胞受体(erythropoietin-producing hepatocellular receptor,Eph受体)是受体酪氨酸激酶家族成员之一,通过与配体Ephrin结合发挥生物功能。Eph-Ephrin系统有16个受体成员和8个配体成员,均为膜蛋白结构,受体配体结合后发生细胞双向信号传递,调节胚胎对子宫内膜的粘附和侵入,引导胚胎血管重塑,促进胚胎多个系统发育。本文综述了Eph-Ephrin系统在胚胎着床和发育中的作用。

促红细胞生成素产生肝细胞受体A2(EphA2)SAM结构域对激酶结构域的脂质体结合能力与激酶活性的调控研究

促红细胞生成素产生肝细胞受体(Eph receptor)是受体酪氨酸激酶(RTK)家族中最大的亚家族,其介导的双向信号传导对细胞的形态、黏附、运动、增殖、生存及分化都有重要的调控作用。EphA2是Eph受体家族中一个被广泛研究的重要亚型,在白内障和乳腺癌等病理发生过程中发挥了重要作用。既往研究发现:EphA2受体的激酶结构域可结合细胞膜,其激酶活性受磷脂膜的调控,但是相邻的SAM结构域对激酶结构域与脂膜的相互作用以及激酶活性的影响尚不清楚。在此项研究中,通过与磷酸酶PTP1B1-301活性片段共表达的方式,表达、纯化了EphA2受体的胞内段激酶-SAM串联结构域,通过比较胞内段激酶-SAM串联结构域与单独激酶结构域的脂质体结合能力,以及测定对应的激酶活性,发现:EphA2受体胞内段的SAM结构域使其激酶结构域与脂质体(4 mg/mL)的结合能力增强约6倍(P<0.001);磷酸化后的EphA2胞内段激酶-SAM串联结构域结合脂质体(4 mg/mL)的能力比非磷酸化的胞内段激酶-SAM串联结构域提高2.5倍(P<0.05);而结合脂质体后,激酶结构域的激酶活性也被进一步提高,从而形成正反馈。综上所述,本研究的发现提示:EphA2胞内段的酪氨酸激酶结构域与相邻的SAM结构域可形成一个完整的结构功能单位,其激酶活性和脂质体结合能力与单独的激酶结构域相比都形成了明显的差异,我们的这一发现对进一步理解Eph受体家族其他亚型的激酶结构域的活性调控提供了参考与思路。

促红细胞生成素产生肝细胞受体在肝纤维化、肝癌发病机制中的作用

促红细胞生成素产生肝细胞(Eph)受体是受体酪氨酸激酶家族中最大的亚族,参与机体胚胎发育、血管生成、轴突导向等生理过程。近来有研究显示,Eph受体过量表达于肝纤维化及肝癌组织中,并在肝癌的生长、侵袭、转移中发挥重要作用。探讨了Eph受体在肝纤维化及肝细胞癌中的作用机制,提示Eph受体可能是肝纤维化、肝癌发生发展过程中的重要分子。

促红细胞生成素受体在肝癌组织中的表达及意义

目的检测促红细胞生成素受体(EPOR)在肝癌组织中的表达,探讨其与微血管密度(MVD)及肝癌临床病理特征的关系。方法应用RT-PCR方法检测30份肝癌组织、10份癌旁组织、10份正常组织中EPOR mRNA表达量,并检测MVD,分析EPOR与MVD及肝癌临床病理特征的关系。结果肝癌组织中EPOR mRNA高表达;EPOR与MVD呈显著正相关(r=0.71,P<0.01);EPOR mRNA表达量在有包膜侵犯、病理组织学低分化及有转移肝癌组织中的阳性表达强度明显高于癌旁组织及正常组织(P均<0.05)。结论 EPOR在肝癌组织中表达显著升高,其可能作为新的血管生成调节因子参与肝癌血管生成,EPOR高表达与肝癌复发、转移及预后密切相关。

促红细胞生成素受体在肝细胞癌组织中表达及对肿瘤血管生成的影响

采用免疫组化法检测60例肝细胞癌(HCC)组织、10例正常肝组织中促红细胞生成素受体(EPOR)的表达水平,并计数微血管密度(MVD)。结果HCC组织中EPOR表达明显高于正常肝组织(P<0·01),且与HCC组织学分级具有相关性(r=0·483,P<0·05);HCC组织中EPOR阳性者MVD明显高于阴性者。提示EPOR与HCC的血管生成有关,可促进HCC的发生、发展。

不同炎症因子对人牙周膜成纤维细胞促红细胞生成素肝细胞激酶受体和配体的影响

目的观察不同炎症因子对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)促红细胞生成素肝细胞激酶受体(Eph)和ephrin配体的影响。方法采用10ng/ml肿瘤坏死因子α(TNF-α)或10ng/ml白细胞介素1β(IL-1β)刺激人牙周膜成纤维细胞,分别在0、1、2、6、12、24h时,检测hPDLFsEph受体及ephrin配体在mRNA和蛋白水平的表达变化。结果TNF-α和IL-1β均可引起hPDLFsEph受体和ephrin配体发生时间依赖性变化。两组中ephrinA2表达量24h内均呈明显上升趋势(P均<0.05),TNF-α组的ephrinA2 mRNA 1h时即出现明显高表达,24h时TNF-α组的表达量明显高于IL-1β组(P<0.05)。EphB4在短时间高表达后,呈时间依赖性下降趋势。结论TNF-α和IL-1β均可引起hPDLFs EphB4和ephrinA2的表达变化,两者引起的表达变化趋势一致,但TNF-α的作用更显著。

促红细胞生成素肝细胞激酶受体及配体对骨改建的调控作用

在骨改建过程中,破骨细胞和成骨细胞相互作用以维持骨吸收和骨形成的平衡。研究表明促红细胞生成素肝细胞激酶受体及其配体介导的双向信号传导可调控成骨-破骨细胞间的耦联作用,本文主要综述Eph家族蛋白的分子结构、信号转导机制,及其调控骨改建、牙槽骨改建等。

促红细胞生成素肝细胞激酶受体及其膜结合配体对牙槽骨改建作用的研究进展

促红细胞生成素肝细胞激酶受体及其膜结合配体(ephrin/Eph)是除核因子κB受体活化因子配体/核因子κB受体活化因子/骨保护素(RANKL/RANK/OPG)外与骨改建相关的新的信号通路。在牙槽骨改建过程中ephrin/Eph相关因子不仅与骨细胞之间的相互作用相关,同时还受牙周膜细胞的影响。与正常骨组织相比,牙槽骨组织改建过程中相关因子表达存在明显差异,这说明了ephrin/Eph相关因子对骨改建过程的调控具有复杂性和重要性。本文就ephrin/Eph通路在骨细胞与牙周膜成纤维细胞中的相互作用进而参与牙槽骨改建的研究进展进行综述。

促红细胞生成素产生肝细胞受体A2基因沉默对人卵巢癌细胞生物学性状的影响

目的探讨促红细胞生成素产生肝细胞受体A2(EphA2)基因沉默对人卵巢癌HeyA8-MDR细胞生长、迁移和侵袭的影响。方法利用质粒和脂质体介导转染法,经稳定筛选后,采用Western blot检测细胞EphA2蛋白表达情况,应用CCK-8和Transwell小室侵袭实验,观察EphA2基因沉默对卵巢癌HeyA8-MDR细胞生物学性状的影响。采用SPSS21.0软件进行统计分析。结果与HeyA8-MDR(阴性对照组)、HeyA8-MDR+空白对照组进行比较,HeyA8-MDR+实验组EphA2蛋白表达水平显著降低(P<0.01),细胞增殖能力、迁移和侵袭能力均受到抑制(P<0.05)。结论EphA2基因沉默可抑制卵巢癌HeyA8-MDR细胞生长、迁移和侵袭,为卵巢癌的治疗提供了新思路。

促红细胞生成素肝细胞激酶受体及其膜结合配体相关因子在口腔疾病中的表达及作用机制的研究进展

促红细胞生成素肝细胞激酶受体及其膜结合配体(Eph/ephrin)可以通过细胞与细胞间短距离的信号传导,参与调节生长发育,促进疾病发生发展的各个过程。研究Eph/ephrin与口腔相关疾病的机制可以为口腔疾病的治疗提供新的思路。近年来,针对Eph/ephrin通路调控口腔相关疾病,尤其是在牙周疾病防治、正畸骨改建以及口腔肿瘤的生物学治疗领域的研究逐渐深入,本文即对这3个方面的研究进展进行综述。

促红细胞生成素诱导肝细胞受体A2在胃癌作用机制和治疗中的研究进展

目的对促红细胞生成素诱导肝细胞受体A2(EphA2)在胃癌疾病进程、治疗中的作用进行总结,为胃癌的治疗提供新的思路.方法以"促红细胞生成素诱导肝细胞受体A2、胃癌、血管内皮生长因子受体"为中文关键词,以"erythro-poietin-producing hepatocyte receptor A2(EphA2)、gastric cancer、epidermal growth factor receptor(VEGF)"为英文关键词,检索中国知网以及PubMed数据库2000-02-2023-08相关文献共132篇.纳入标准:(1)EphA2的基本结构、致瘤作用及调节机制;(2)EphA2在胃癌中的研究进展.排除标准:(1)内容不相关的文章;(2)相似或重复的内容.最终共纳入文献66篇.结果肿瘤中的EphA2信号转导通路复杂,大致可分为典型信号通路和非典型信号通路,EphA2在胃癌高表达,EphA2参与胃癌细胞增殖、胃癌的上皮-间质转化和胃癌血管生成过程,EphA2在促进血管生成方面与血管内皮生长因子受体具有协同作用,通常可以通过降低EphA2的表达、促进EphA2的降解,以及阻断EphA2的激活等途径来抑制EphA2的促肿瘤作用.结论EphA2在胃癌中的作用复杂,随着研究的深入,EphA2和血管内皮生长因子受体的双靶点阻断,在胃癌的治疗中可能有更大的作用.

雄激素依赖性前列腺癌细胞中雄激素受体上调EphA3表达

目的探讨雄激素依赖性前列腺癌细胞中促红细胞生成素产生肝细胞A型受体(EphA)3表达和雄激素受体(AR)信号通路的关联。方法首先通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹实验(Western blot)分别检测前列腺癌细胞LNCa P和22Rv1中EphA3和AR的mRNA及蛋白水平,然后用双氢睾酮(DHT)刺激48 h,测定细胞EphA3、AR和前列腺特异抗原(PSA)表达水平的变化。同时,将成功构建的荧光素酶报告基因重组质粒EphA3-Luc(-789^+146)与AR表达质粒pc DNA3.1(+)-AR或AR特异性小分子干扰RNA(si AR)共转染22Rv1细胞,分析AR对EphA3转录活动的影响。结果 EphA3在前列腺基质细胞WPMY-1中表达水平极低,但在前列腺癌细胞LNCa P和22Rv1中则明显升高,与AR表达模式相似。10 nmol/L DHT不仅明显上调22Rv1细胞中AR、PSA和EphA3表达水平,也显著升高LNCa P细胞中相关基因和蛋白水平。而且细胞内不同AR表达水平会显著影响EphA3启动子活性。结论 AR通过提高EphA3启动子活性上调EphA3表达水平。

促红细胞生成素产生肝细胞受体A2在儿童脑胶质瘤中的表达及其意义

目的探讨促红细胞生成素产生肝细胞受体A2（EphA2）在儿童脑胶质瘤中的表达水平及其意义。方法收集2009年1月至2013年3月在郑州大学第五附属医院住院的具有明确病理分级的儿童胶质瘤标本78例为胶质瘤组，其中低级别组36例（Ⅰ-Ⅱ级）、高级别组42例（Ⅲ～Ⅳ级），另收集脑外伤行内减压去除的儿童脑组织标本33例为对照组。分别采用反转录（RT）-PCR、Westernblot和免疫组织化学法测定胶质瘤组和对照组中EphA2mRNA及蛋白表达水平。结果1．RT—PCR和Westernblot显示，EphA2mRNA在对照组脑组织中不表达，而在胶质瘤组中均呈高表达，差异有统计学意义（F=36．271，P〈0．05）；EphA2蛋白在高级别儿童胶质瘤组表达水平显著高于低级别儿童胶质瘤组，差异有统计学意义（F=42．839，P〈0．05）。2．免疫组织化学法显示，EphA2在对照组脑组织中呈阴性表达，在低级别胶质瘤组中的阳性表达为88．57％，在高级别胶质瘤组中的阳性表达为100．00％，且胶质瘤的级别越高，EphA2的阳性表达分布越强，差异有统计学意义（Z=4．962，P〈0．05）。结论EphA2在儿童脑胶质瘤中呈高表达，且与胶质瘤的病理分级相关，可能参与儿童脑胶质瘤的发生和进展。

血管内皮生长因子对静脉分子指纹产生促红细胞生成素的肝癌细胞B4受体表达的调控及其抑制移植静脉内膜增生的机制

目的探讨自体静脉移植后血管内皮生长因子（VEGF）对产生促红细胞生成素的肝癌细胞B4受体（EphB4）表达的调控及其抑制移植静脉内膜增生的机制。方法建立小鼠自体颈静脉移植重建颈总动脉的模型，采用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）方法，检测术后不同时间点VEGF和EphB4mRNA水平；利用小干扰RNA（siRNA）阻断内源性VEGF的产生，比较处理组与非处理组内膜增生情况；以VEGF刺激鼠静脉内皮细胞观察EphB4表达；分别用VEGF传导通路的阻断剂预处理细胞，再以VEGF刺激细胞，检测EphB4表达。结果阻断移植静脉VEGF的表达后，EphB4表达显著减少（处理组0．52±0．14比非处理组2．10±0．79，P〈0．05），且内膜增生程度明显高于未处理组[处理组（29．8±2．09）μm比非处理组（14．7±0．05）μm，P〈0．05]。VEGF下调EphlM呈时间及剂量依赖性。VEGF通过VEGF受体2（VEGF-R2）及其下游信号传导通路细胞外调节激酶（ERK）1／2抑制EphB4表达。结论VEGF可能通过负性调控EphB4的表达而抑制移植静脉内膜增生，此调节作用通过VEGF-R2-ERKl／2途径实现。

低氧环境下EphrinB2/EphB4调控MC3T3⁃E1细胞成骨分化的实验研究

目的探讨低氧环境下促红细胞生成素肝细胞激酶受体配体B2/促红细胞生成素肝细胞激酶受体B4(erythropoietin producing hepatocyte kinase receptor ligand B2/erythropoietin producing hepatocyte kinase receptor B4,EphrinB2/EphB4)对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响,为低氧调控成骨细胞分化提供实验依据。方法设置对照组与氯化钴诱导的低氧组,对MC3T3-E1细胞进行分组培养,应用qRT-PCR检测细胞成骨标志物碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、runt相关转录因子2(runt related transcription factor 2,RUNX2)、I型胶原(collogen-1,COL I)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的mRNA表达变化,ALP染色检测细胞成骨诱导7 d后ALP活性。同时通过qRT-PCR与Western blot检测两组MC3T3-E1细胞缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、EphrinB2、EphB4的mRNA和蛋白表达。然后增设氯化钴+EphB4磷酸化抑制剂组(加入EphB4磷酸化抑制剂NVP-BHG712)阻止EphrinB2与EphB4结合,通过qRT-PCR与Western blot检测三组成骨标志物ALP、RUNX2、COL I、OCN的mRNA与蛋白表达,ALP染色、茜素红染色检测细胞成骨诱导后ALP活性及矿化情况。结果与对照组相比,在氯化钴诱导的体外细胞低氧环境下,MC3T3-E1成骨标志物ALP、RUNX2、COL 1、OCN mRNA表达增加,ALP活性增强,矿化增强(P<0.05)。同时,在氯化钴诱导的低氧环境下,HIF-1α、EphrinB2、EphB4的mRNA和蛋白水平表达增加(P<0.05)。使用NVP-BHG712阻止EphrinB2和EphB4的结合后,细胞的成骨标志物表达下降,ALP活性及矿化能力降低(P<0.05)。结论低氧环境可通过EphrinB2/EphB4信号通路促进MC3T3-E1细胞的成骨分化,增加成骨标志物的表达及组织矿化。

Eph家族受体在机体生理和病理过程中作用机制的研究进展

促红细胞生成素肝细胞激酶(Erythropoietin-producing hepatocellular, Eph)受体家族作为目前已知最大的酪氨酸激酶受体家族,通过受体–配体结合,介导人类从胚胎发育到成人组织稳态诸多生物学功能的调节,参与机体各种免疫反应。研究发现,Eph受体在包括神经系统发育、细胞迁移、血管形成等许多生理发育过程中起重要作用,在调节免疫反应、肿瘤、炎症、损伤修复等病理过程中也发挥着重要功能。进一步深入的研究Eph家族受体的生物学功能能够更好的对临床疾病进行预防、诊断和治疗,了解调控Eph表达的转录和转录后机制在生物学上具有深远的意义。本篇综述通过从Eph受体家族参与神经发育调节、血管形成、介导免疫反应等方面探讨其在机体生理和病理中的作用机制,总结其在不同机体反应中的作用规律,对临床疾病的诊断、治疗等进一步提供新思路。

过表达ephrinB2调控犬牙周膜干细胞的成骨能力

目的观察促红细胞生成素肝细胞激酶受体B4/促红细胞生成素肝细胞激酶受体配体B2(EphB4/ephrinB2)信号通路中过表达ephrinB2在比格犬来源的牙周膜干细胞(cPDLSCs)中成骨分化的能力。方法采用Beagle犬前磨牙及磨牙中分离PDLSCs,用EfnB2-GFP-Bsd载体和空载体(GFP-Bsd)转染细胞后进行成骨诱导分化,Western blot检测转染后ephrinB2蛋白表达水平,行CCK-8实验、茜素红S染色实验、碱性磷酸酶染色实验(ALP)、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测EfnB2-cPDLSCs组、空载体对照组(Vector-cPDLSCs)的成骨分化效果。结果CCK-8显示:EfnB2-cPDLSCs组和Vector-cPDLSCs组在细胞增殖上没有差异。茜素红染色实验和ALP染色实验证实:EfnB2-cPDLSCs组较Vector-cPDLSCs显示更高的ALP活性和矿化能力。RT-PCR显示:EfnB2-cPDLSCs组成牙本质/成骨标志物的表达高于Vector-cPDLSCs组。结论通过过表达犬牙周膜细胞中的ephrinB2可提高其成骨分化的能力。

EphA2通过调控Grb2表达参与肝癌细胞侵袭的机制探讨

目的:检测促红细胞生成素肝细胞受体A2(EphA2)蛋白在肝细胞肝癌中的表达情况,探讨其参与调控肝癌细胞侵袭的可能内在机制。方法:培养人正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞株MHCC97H、Hep3B,通过siRNA干扰法下调肝癌细胞中EphA2、生长因子受体结合蛋白2(Grb2)的表达,分为三组:未处理组(未处理肝癌细胞)、对照组(加入对照siRNA)和siRNA干扰组(加入siRNA干扰EphA2或Grb2)。通过Western blot法检测不同处理前后细胞中EphA2、Grb2蛋白的表达情况,Transwell小室检测细胞侵袭性。多组比较、组间比较分别采用单因素方差分析和LSD-t检验。结果:体外侵袭实验结果显示MHCC97H、Hep3B、HL-7702穿透细胞的数量分别为:(401±3)/10 HPF、(111±4)/10 HPF、(31±3)/10 HPF,人正常肝细胞与人肝癌细胞相比差异具有统计学意义(P <0.05)。Eph A2、Grb2蛋白在人正常肝细胞与人肝癌细胞中的相对表达量相比,差异均有统计学意义(P <0.05)。siRNA法抑制细胞Eph A2表达后,Hep3B和MHCC97H细胞系未处理组、对照组、siRNA干扰组穿透的细胞数量分别为:(111±4)/10 HPF、(108±5)/10 HPF、(53±3)/10 HPF和(405±5)/10 HPF、(399±4)/10 HPF、(155±7)/10 HPF,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。检测Eph A2蛋白在Hep3B、MHCC97H细胞系未处理组、对照组、siRNA干扰组中的相对表达量,siRNA干扰组与对照组相比,差异有统计学意义(P <0.05)。siRNA抑制Grb2表达后,Hep3B和MHCC97H细胞系未处理组、对照组、siRNA干扰组穿透的细胞数量分别为:(109±3)/10 HPF、(107±4)/10 HPF、(56±4)/10 HPF和(403±4)/10 HPF、(402±4)/10 HPF、(163±5)/10 HPF,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(P <0.001)。检测Grb2蛋白在Hep3B和MHCC97H细胞未处理组、对照组、siRNA干扰组组中的相对表达量,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。siRNA抑制Eph A2表达后,检测Grb2蛋白在Hep3B、MHCC97H细胞未处理组、对照组、siRNA干扰组中的相对表达量,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。结论:Eph A2参与调控肝癌细胞侵袭的内在机制可能是通过调控Grb2蛋白的表达实现的,据此,我们得出Eph A2可作为治疗肝细胞肝癌的新靶点。

酪氨酸激酶受体家族EphA5在前置胎盘患者血清和胎盘组织中的表达及其临床诊断意义

目的探讨酪氨酸激酶受体家族中促红细胞生成素产生肝细胞受体(Eph)A5在前置胎盘患者血清和胎盘组织中的表达及其临床诊断意义。方法前置胎盘患者32例(前置胎盘组),其中完全型前置胎盘12例,不完全型11例,边缘型6例,低置胎盘3例;健康初产妇32例(对照组)。分别利用酶联免疫吸附试验和免疫印迹法测定两组产妇血清和胎盘组织中EphA5表达水平。结果前置胎盘组患者的血清EphA5含量及胎盘组织EphA5蛋白表达水平均明显低于正常对照组(P<0.05);而不同类型前置胎盘组患者血清EphA5含量、胎盘组织EphA5蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。前置胎盘组产妇胎盘组织EphA5蛋白表达水平与外周血EphA5含量呈正相关(P<0.05)。结论前置胎盘患者外周血EphA5含量水平降低,有可能成为前置胎盘早期诊断的重要指标。