基于促红细胞生成素基因表达及血液生理生化指标探究湖羊在青海高海拔地区的适应性

本试验旨在研究湖羊进入青海高海拔地区后血液中促红细胞生成素(EPO)基因表达及血液生理生化指标发生的适应性变化。选择中海拔地区(甘肃省,海拔高度为1 500 m)及高海拔地区(青海省,海拔高度为3 200 m)的舍饲8月龄、体重[(32.11±1.86) kg]相近的湖羊后备母羊各90只,两地各自随机分为3组,每组30只羊,测定不同海拔地区湖羊血液中EPO基因的相对表达量及血液生理生化指标。结果表明:EPO基因在高海拔地区湖羊血液中的相对表达量显著高于中海拔地区湖羊(P<0.05);高海拔地区湖羊血液红细胞数量(RBC)、血红蛋白浓度(HGB)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)较中海拔地区湖羊依次增加了36.23%、45.94%、58.34%、23.65%(P<0.05),白细胞数量(WBC)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、血小板数量(PLT)、血小板平均体积(MPV)较中海拔地区湖羊依次降低了27.33%、11.68%、18.27%、6.20%(P<0.05);高海拔地区湖羊血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性和葡萄糖(Glu)含量较中海拔地区湖羊依次增加了10.71%、16.80%、62.72%(P<0.05),血清总胆固醇(TC)含量较中海拔地区湖羊降低了33.22%(P<0.05);高海拔地区湖羊血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量依次是中海拔地区湖羊的5.99、2.35、4.10、1.49倍(P<0.05)。综上所述,养殖在青海高海拔地区的湖羊血液中EPO基因的表达、血液生理生化指标均表现出了适应性变化,表明湖羊具有适应高海拔环境的潜力。

人基因重组促红细胞生成素治疗早产儿贫血的53例临床分析

目的 观察人基因重组促红细胞生成素（ESPO）对早产儿贫血的治疗效果。方法 将53例早产儿贫血患儿随机分为ESPO治疗组（31例）和对照组（22例），治疗组予以ESPO 200 IU/kg·b.w.皮下注射，每周2次。结果 8周后两组间外周血血红蛋白、红细胞、红细胞压积、治疗有效率出现显著性差异(P<0.01)，治疗组上述指标均显著高于对照组，且无明显副作用。结论 ESPO治疗早产儿贫血安全有效。

基因重组促红细胞生成素对血透患者一氧化氮、内皮素影响的研究

目的:探讨基因重组促红细胞生成素(rHuEpo)对维持性血透患者血管活性物质一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)的影响。方法:将长期规律性血透尿毒症患者80例分为血液透析应用rHuEpo者(HDepo组n=43例),血液透析不应用rHuEpo者(HD组n=37例),根据血压情况两组再分为HDepo高血压亚组(HDepo-1组,n=23)、HDepo血压正常亚组(HDepo-2组,n=20)和HD高血压亚组(HD-1组,n=19)、HD血压正常亚组(HD-2组,n=18)。另选尿毒症未透析患者20例(NHD组)、原发性高血压患者20例、健康对照组34例(CON组)。HDepo组患者均接受rHuEpo治疗3个月以上,用比色法测定血NO水平、用放射免疫法测定血ET-1水平。结果:尿毒症未透析患者血清NO、ET-1水平明显高于正常对照组,P<0.001;尿毒症透析患者血清NO、ET-1浓度较正常对照组高,P<0.001,但经透析治疗的尿毒症患者与尿毒症未透析者比较,血清NO水平较未透析者低、血清ET-1水平较未透析者高,P<0.05;HDepo组经rHuEpo治疗3月后,血NO浓度降低,血ET-1浓度增高,与用药前及对照组比较,P<0.05。且用rHuEpo治疗后,HDepo组收缩压、舒张压、平均动脉压均较HD组高,P<0.001,血压增高与血NO浓度的降低、血ET-1浓度增高有相关性。结论:rHuEpo可使尿毒症透析患者血NO浓度降低、血ET-1浓度增高。

人肾脏促红细胞生成素cDNA基因的克隆

目的:克隆促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)c DNA基因,为重组EPO的制备奠定基础。方法:从人肾脏中提取总RNA,采用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法扩增EPO c DNA基因后,将其插入到克隆载体p JET 1.2中,DNA测序法鉴定基因序列。结果:对克隆到的EPO c DNA基因进行DNA测序分析鉴定,其结果与Gene Bank中序列完全一致。结论:成功从人肾脏中克隆扩增了EPO c DNA基因,为重组EPO的制备奠定了基础。

防治促红细胞生成素不良反应的体会

人基因重组促红细胞生成素(r-HuEPO)是一种刺激红细胞生成的糖蛋白,它主要在肾脏产生,促进造血干细胞分化成原始红细胞,促进幼红细胞分裂成熟,促进网织红细胞成熟和释放,最终促进血红蛋白的合成。因此,可有效地纠正终末期肾衰竭病人的贫血,在广泛应用的同时,它的许多不良反应也凸现出来。现将我院十余年来的应用体会总结如下。

促红细胞生成素对老年血液透析患者血管活性介质的影响

目的 探讨基因重组促红细胞生成素 (r Hu EPO)对老年维持性血液透析患者血管活性介质的影响。方法 39例基础血压正常的血透患者 ,其中 2 1例静脉 1次注射 r Hu EPO 30 0 0 U(EPO组 ) ,1 8例作为对照 (NS组 )静脉注射生理盐水。均于注射后 1、3、6、9、1 2、1 8、2 4、30、44 h放射免疫法等检测血中血管活性介质。 1 2例 EPO组患者应用 r Hu EPO60 0 0 U/ w,持续 8w后再检血中血管活性介质。结果 与 NS组相比 ,EPO组儿茶酚胺 (CA)明显升高 ;血中内皮素、肾素、醛固酮和血管紧张素 I、II两组均无明显变化。结论 r Hu EPO可引起老年血透患者血中 CA增多。

促红细胞生成素加大剂量铁剂防治早产儿贫血临床观察

2002年2月至2004年12月,我们应用基因重组促红细胞生成素(rhEPO)加大剂量铁剂防治早产儿贫血32例.现报告如下.

重组人类基因促红细胞生成素对早产儿视网膜病变影响的分析

目的探讨重组人类基因促红细胞生成素(rhu-EPO)的应用对早产儿视网膜病变(ROP)的影响。方法对2005年3月至2008年6月期间收住福建医科大学附属漳州市医院新生儿科的早产儿(体重≤1500g)病例资料进行分析,应用rhu-EPO治疗的94例为治疗组,未应用rhu-EPO的65例为对照组,生后6周或纠正胎龄35周时行眼底检查,根据ROP国际分期标准进行ROP诊断和分期,同时对多种相关因素进行统计分析。结果治疗组严重ROP的患病率高于对照组(P<0.05);单因素分析显示rhu-EPO治疗≥10剂,发生严重ROP的风险高于rhu-EPO治疗剂数<10剂(r=6.429,P<0.001),开始治疗时间≥14d发生严重ROP风险明显高于<14d(r=46.000,P<0.001);多因素Logistic分析显示rhu-EPO治疗剂数≥10剂发生严重ROP风险高(r=9.348,P<0.001)。结论应用rhu-EPO是早产儿ROP的一个独立危险因素。

重组人类基因促红细胞生成素在治疗早产儿脑损伤中的应用

本研究将78例脑损伤早产儿根据随机数字表分为两组,其中对照组予以常规治疗,观察组予以重组人类基因促红细胞生成素治疗。对比两组治疗前后的NBNA、MDI、PDI评分,NSE、S-100B、BUN、Cr、SGPT、TBIL的水平变化,发现两组纠正胎龄40周时的NBNA评分较治疗前明显改善,且观察组的改善程度较对照组明显(p<0.05)。两组在纠正胎龄3个月及6个月的MDI及PDI得分差异有统计学意义,观察组的改善程度较对照组明显,差异有统计学意义(p<0.05)。两组治疗后的NSE和S-100B水平较治疗前降低,且观察组比对照组降低明显(p<0.05)。两组治疗前后血清BUN、Cr、SGPT、TBIL水平差异无统计学意义(p>0.05)。提示rhEPO对受损脑细胞有保护作用,可在一定程度上促进神经系统的修复,在改善早产儿脑损伤预后方面有着积极的作用。

敲低EphB1基因对过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞氧化损伤的影响

目的:探讨敲低EphB1基因对过氧化氢(H 2O 2)诱导的大鼠心肌H9c2细胞氧化损伤的影响,为EphB1基因治疗心血管疾病提供依据。方法:体外培养大鼠心肌H9c2细胞,分为空白组(不做任何处理)、H 2O 2组(H 2O 2细胞损伤)、阴性对照组(转染siRNA control)和转染si-EphB1组(转染si-EphB1后H 2O 2细胞损伤)。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组H9c2细胞中EphB1基因表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测各组H9c2细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,DCFH-DA探针法检测各组细胞内活性氧(ROS)水平,分光光度计法检测各组细胞中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果:与空白组比较,H 2O 2组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05),阴性对照组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平无明显变化(P>0.05);与H 2O 2组比较,转染si-EphB1组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。与空白组比较,H 2O 2组细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),ROS和MDA水平升高(P<0.05),SOD水平降低(P<0.05),而阴性对照组细胞存活率、凋亡率、ROS、MDA和SOD水平差异无统计学意义(P>0.05);与H 2O 2组比较,转染si-EphB1组细胞存活率升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),ROS和MDA水平降低(P<0.05),SOD水平升高(P<0.05)。结论:敲低EphB1基因能够抑制H 2O 2诱导的大鼠心肌细胞氧化损伤,起到心肌保护作用,其机制与提高心肌细胞存活率、抑制细胞凋亡、改善抗氧化酶活性和提高细胞内氧化应激产物清除能力有关。

青海省汉族PIH患者血浆EPO水平及EPO基因3'端低氧增强子区T3541G单核苷酸多态性观察

目的观察青海省汉族妊娠高血压(PIH)患者促红细胞生成素(EPO)基因3'端低氧增强子上T3541G单核苷酸多态性。方法 124例PIH患者为观察组,112例正常孕妇为对照组。抽取两组外周静脉血,采用ELISA法检测两组血浆EPO。采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应方法对两组EPO SNP/T3541G进行基因型分型并测序验证。结果观察组和对照组血浆EPO水平分别为(454.113±35.097)、(396.316±50.262)pg/mL,二者比较,P<0.05。观察组EPO T3541位点基因型频率野生型(TT)、杂合子型(TG)和突变纯合子型(GG)分别为9.7%、74.2%、16.1%、对照组分别为42.9%、46.4%、10.7%,两组比较,P均<0.05。观察组EPO T3541位点等位基因频率T、G分别为46.8.%、53.2%,对照组分别为66.1%、33.9%,两组比较,P均<0.05)。EPO基因SNP/T3541G多态性与PIH呈正相关(OR为0.451,95%CI:0.311~0.655),T等位基因为PIH的保护基因(OR为0.708,95%CI:0.602~0.833),G等位基因为PIH的危险因素(OR为1.569,95%CI:1.263~1.949)。结论青海省汉族PIH患者血浆EPO水平高于健康孕妇。EPO基因SNP/T3541G多态性与PIH有关。

论基因兴奋剂的类型和预防

当前的世界反兴奋剂工作取得了长足的进步,传统的兴奋剂,如刺激剂、合成代谢类激素内固醇等都逃不出被检测出来的命运,也正是因为这些传统的兴奋剂得到了有效的控制,一些运动员转而寻求其他方法来提高运动成绩,基因兴奋剂就是其中可能的选择之一。世界反兴奋剂组织(WADA)定义基因兴奋剂为非治疗目的使用提高运动能力的基因、遗传构件和(或)细胞。近年来,基因疗法取得长足的发展,如用来治疗贫血的促红细胞生成素基因(EPO),治疗重症肌无力的胰岛素样生长因子(IGF-1)基因等,这些技术同样可能被作为基因兴奋剂而滥用。因此,尽快制定法律法规、研究检测基因兴奋剂的方法、保护运动员的健康和比赛的公正性是十分必要和紧迫的。就兴奋剂的发展史、可能的几种基因兴奋剂、防止滥用等进行了阐述。

促红细胞生成素对脑损伤的保护作用

目的 探讨促红细胞生成素对早产儿脑损伤的保护作用.方法 将2014年1月-2014年12月在我院治疗的88例早产儿随机分为对照组（44例）和观察组（44例）,对照组患者采取常规三对症和三支持治疗,观察组患者在对照组基础上自患儿出生时予以重组人类基因促红细胞生成素进行治疗,并比较两组患儿的临床治疗效果.结果 出生时两组患儿神经行为测定评分比较差异无统计学意义（P〉0.05）,治疗后两组患儿神经行为测定评分差异具有统计学意义（P〈0.05）;观察组患儿社会行为、适应能力和精细动作评分均优于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）;观察组患儿神经系统影像异常发生率显著低于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）.结论 在常规治疗的基础上,对早产患儿采用重组人类促红细胞生成素,有助于改善患儿预后,减少脑损伤.

四环素对EPO基因表达的调控研究

目的探讨四环素调控系统对重组人促红细胞生成素基因表达的调控。方法将pTRE2hyg-EPO及Tet—On质粒转导人SD大鼠骨骼肌细胞，用RT-PCR、Western印迹实验及红系集落生成实验检测hEPO基因在大鼠骨骼肌内的表达和蛋白的活性，并观察四环素系统对EPO表达的调控作用。结果重组人EPO基因可以在大鼠骨骼肌原代细胞中表达，并受四环素调控系统的控制，并与诱导药物剂量成正比。生成的促红细胞生成素具有生物活性，可明显刺激骨髓红系细胞的生长。结论在细胞水平四环素调控系统可控制转导的EPO基因的表达，并且生成有生物活性的促红细胞生成素，达到基因治疗的要求。

生血宁治疗维持性腹膜透析患者的临床观察

目的比较生血宁片和多糖铁复合物胶囊(力蜚能)在治疗维持性腹膜透析患者肾性贫血中的治疗效果。方法选择维持性腹膜透析患者60例,随机分为力蜚能组和生血宁组,每组30例。分别于治疗前及治疗后每个月采血,检测患者血红蛋白、红细胞压积、C反应蛋白等指标。结果治疗前两组指标无明显差异,治疗3个月后两组患者的血红蛋白、红细胞压积指标均较治疗前显著上升,两组间无明显差异。两组基因重组人促红细胞生成素用量在治疗9个月后明显减少,两组间无明显差异。生血宁组发生消化道不良反应及引起血红蛋白过度升高的例数明显少于力蜚能组,差异有统计学意义。结论生血宁片同力蜚能一样能有效地纠正维持性腹膜透析患者的铁缺乏,降低患者基因重组人促红细胞生成素的用量;生血宁片比力蜚能胃肠道不良反应的发生概率更小,引起血红蛋白过度升高的发生概率更小。

rhEPO对早产儿脑损伤保护作用的临床观察

目的:评价早产儿应用重组人类基因促红细胞生成素(rhEPO)对于脑损伤保护的效果。方法:选取2018年9月至2020年9月期间东莞市大朗医院接诊的60例早产儿,依据随机数字表法分为对照组和观察组,每组30例。对照组接受常规治疗,观察组在常规治疗的基础上联合rhEPO治疗,比较两组早产儿的新生儿行为神经测定(NBNA)评分、Gesell发育量表评分、影像学异常发生率。结果:治疗后,两组早产儿NBNA评分均高于治疗前,且观察组治疗后NBNA评分高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组Gesell发育量表评分,包括大运动、适应能力、精细动作、社交行为和语言均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组神经系统影像学异常发生率低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:rhEPO对早产儿脑损伤保护作用显著,可以显著改善早产儿预后,降低脑损伤后遗症的发生率。

促红素对荷瘤小鼠血栓形成影响的实验研究

贫血是恶性肿瘤患者最常见的并发症之一，在接受放化疗的患者中，其发生率超过90％。基因重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin，r-HuEPO）近年来被成功地应用于改善癌症患者的贫血，然而其应用的安全性，特别是血栓形成的危险性如何值得关注和进一步研究。本研究通过荷瘤小鼠化疗相关性贫血模型的建立，评价r-HuEPO在治疗癌性贫血小鼠时是否增加血栓形成的危险性，为r-HuEPO的临床应用提供实验依据。