促肝细胞再生磷酸酶-3基因对大肠癌细胞侵袭和失巢凋亡的调控

目的探讨促肝细胞再生磷酸酶(phosphatase of regenerating liver cell-3,PRL-3)基因对大肠癌细胞侵袭的影响及可能机制。方法应用PRL-3基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理人大肠癌HCT116细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测PRL-3 mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力,采用琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞失巢凋亡情况。结果转染组癌细胞PRL-3 mRNA和蛋白水平明显被抑制,且与时间和浓度相关。与对照组比较,转染组细胞所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少,且呈时间和浓度依赖性。琼脂糖凝胶电泳和TUNEL结果显示,转染组细胞出现明显的凋亡现象:凋亡指数增加,出现明显的DNA条带。结论PRL-3基因siRNA转染可明显抑制大肠癌细胞的锚着不依赖性增殖和恶性侵袭,其机制可能与诱导失巢凋亡有关。

促肝细胞再生磷酸酶-3在鼻腔鼻窦鳞癌中的表达及与预后的关系研究

目的研究促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)在鼻腔鼻窦鳞癌中的表达及与临床病理特征的关系。方法采用回顾性研究,收集54例鼻腔鼻窦鳞癌患者(鼻腔鼻窦鳞癌组)、36例鼻息肉患者(鼻息肉组)及30例正常人(对照组)鼻腔黏膜组织标本。采用免疫组织化学染色法对其PRL-3蛋白表达阳性率进行检测,并用实时荧光定量PCR法对PRL-3 mRNA相对表达量进行检测,同时分析PRL-3与鼻腔鼻窦鳞癌患者临床病理特征的相关性。结果鼻腔鼻窦鳞癌组PRL-3蛋白表达阳性率较对照组、鼻息肉组明显升高(P <0. 05)。与对照组、鼻息肉组相比,PRL-3mRNA在鼻腔鼻窦鳞癌组中的表达明显上调(P <0. 05)。不同性别、年龄的鼻腔鼻窦鳞癌患者PRL-3蛋白表达阳性率的比较,并无显著差异(P> 0. 05);低分化、病理分期为Ⅲ~Ⅳ期、伴有淋巴结转移的鼻腔鼻窦鳞癌患者PRL-3蛋白表达阳性率明显高于高分化、病理分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移者(P <0. 05)。结论 PRL-3高表达于鼻腔鼻窦鳞癌患者,且与肿瘤分化程度、病理分期及是否伴有淋巴结转移密切相关,提示其有望成为评估鼻腔鼻窦鳞癌患者预后的独立预测因子。

3种姜黄素类似物对重组人促肝细胞再生磷酸酶-3活性的影响

目的研究3种姜黄素类似物对重组人促肝细胞再生磷酸酶PRL-3酶活性的影响。方法利用基因工程技术获得重组人PRL-3酶;通过测定PRL-3酶水解底物DiFMUP中磷酸基团生成DiFMU的荧光强度,探讨姜黄素类似物对重组人促肝细胞再生磷酸酶PRL-3活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。结果姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素能明显抑制PRL-3酶活性,其IC50值分别为11.80(7.65～15.32,95%CI),19.92(16.18～23.69,95%CI)和26.19(21.18～31.14,95%CI)μmol/L。结论姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素是较强的重组人促肝细胞再生磷酸酶PRL-3的抑制剂。

促肝细胞再生磷酸酶-3及整合素β1在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨促肝细胞再生磷酸酶-3(phosphatase of regenerating liver-3,PRL-3)及整合素β1(integrinβ1,Intβ1)在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法和实时荧光定量PCR检测食管癌组织、癌旁组织和正常组织中PRL-3和Intβ1的表达水平。结果在蛋白水平和基因水平检测均发现癌组织中PRL-3和Intβ1的表达高于癌旁组织(P<0.05)和正常组织。结论 PRL-3和Intβ1在食管鳞状细胞癌组织中表达增高,可能作为肿瘤标志物来监控食管鳞状细胞癌的发生、发展、浸润和转移。

7种黄酮类化合物对重组人促肝细胞再生磷酸酶-3活性的影响

目的：观察8种黄酮类化合物对重组人促肝细胞再生磷酸酶PRL-3酶活性的影响。方法：构建人PRL-3 cDNA重组质粒pCold Ⅱ-his-prl-3，15℃条件下在ArcticExpressTM（DE3）RP表达菌中用IPTG诱导表达可溶性目的蛋白，初步用Histag抗体和PRL-3抗体进行Westernblot鉴定，经镍柱纯化，用胰酶酶切后，

3种姜黄素类似物对重组人促肝细胞再生磷酸酶-3活性的影响

目的研究3种姜黄素类似物对重组人促肝细胞再生磷酸酶PRL-3酶活性的影响。方法利用基因工程技术获得重组人PRL-3酶；通过测定PRL-3酶水解底物DiFMUP中磷酸基团生成DiFMU的荧光强度，探讨姜黄素类似物对重组人促肝细胞再生磷酸酶PRL-3活性的抑制作用，并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。

食管鳞状细胞癌促肝细胞再生磷酸酶-3和整合素β1 mRNA联合表达的定量分析及意义

目的研究食管鳞状细胞癌中促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)和整合素β1(Intβ1)mRNA的表达水平及差异,分析其表达与临床病理特征的关系,探讨其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测食管癌组织,癌旁组织和正常组织中PRL-3和Intβ1 mRNA的表达水平,分析其表达的差异;研究其表达水平与性别、年龄、肿瘤直径、TNM分期、肿瘤组织分化程度、淋巴结转移、浸润深度等临床病理特征的关系及两者的相关性。结果 PRL-3、Intβ1 mRNA的表达癌组织中均高于癌旁组织(P<0.05),正常组织中表达最低。PRL-3及Intβ1 mRNA在肿瘤患者中的相对表达水平均与肿瘤组织分化程度、TNM分期、有无淋巴结转移、浸润深度有关,与患者年龄、性别无关;PRL-3 mRNA相对表达水平还与肿瘤直径有关,Intβ1 mRNA与肿瘤直径无关。结论 PRL-3和Intβ1在食管鳞状细胞癌组织中表达增高,其联合检测结果可作为参考指标来了解食管鳞状细胞癌的发生发展、浸润、转移和预后。

结直肠癌肝转移患者白细胞介素-18、促肝再生磷酸酶蛋白3表达与PI3K及AKT蛋白的关系

目的探讨结直肠癌肝转移患者癌组织中白细胞介素-18(IL-18)、促肝再生磷酸酶蛋白3(PRL-3)表达与临床病理特征及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝苏氨酸蛋白激酶B(AKT)蛋白水平的关系。方法选取2019年10月至2021年10月于上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院行同期切除术的85例结直肠癌肝转移患者(肝转移组)的癌组织样本及癌旁正常组织(距肿瘤切缘4 cm),以及同期65例未发生肝转移结直肠癌患者(未肝转移组)的癌组织为研究对象。免疫组织化学S-P法检测不同组织中IL-18、PRL-3阳性表达率,Western blot检测癌组织中PI3K、p-AKT相对表达水平,分析IL-18、PRL-3与患者临床病理的关系及其与PI3K、p-AKT表达的相关性。结果与未肝转移组比较,肝转移组TNM分期IV期、低分化程度比例较高(P<0.05)。肝转移患者癌组织中IL-18、PRL-3、PI3K、p-AKT蛋白阳性表达率高于其癌旁正常组织和未肝转移患者癌组织,且未肝转移患者癌组织中IL-18、PRL-3、PI3K、p-AKT蛋白阳性表达率高于肝转移患者癌旁正常组织(P<0.05)。相关性分析示,肝转移患者癌组织中IL-18、PRL-3表达与PI3K、p-AKT均呈正相关(P<0.05);未转移癌组织中IL-18表达与PI3K、p-AKT均呈正相关(P<0.05),PRL-3表达与p-AKT均呈正相关(P<0.05),且IL-18与PRL-3呈显著正相关(P<0.05)。结论IL-18、PRL-3可能通过激活PI3K/AKT信号通路从而参与结直肠癌肝转移过程。

RNA干扰沉默促肝细胞再生磷酸酶-3基因对结直肠癌细胞基质金属蛋白酶2和9表达的影响

目的探讨促肝细胞再生磷酸酶-3（PRL-3）基因对结直肠癌细胞侵袭的影响和可能机制。方法应用PRL-3基因小干扰RNA（siRNA）转染处理结直肠癌细胞系HCT116后，分别采用实时定量PCR和Western印迹检测PRL-3基因和基质金属蛋白酶家族（MMP）-2、MMP-9的mRNA和蛋白水平：分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力：其次，将转染48h的细胞接种裸鼠，观察其在体内生长情况。结果体外实验结果显示，PRL-3siRNA可有效抑制结直肠癌细胞集落生长和侵袭能力，且与浓度相关（P〈0．05，P〈0．01））；转染组细胞MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白水平明显下调（P〈0．05）。体内实验结果显示，对照组裸鼠组织癌细胞侵袭横纹肌和血管，而转染组未见这些现象。结论采用PRL-3siRNA转染可抑制结直肠癌细胞侵袭，其机制可能与下调MMP表达有关。

短发夹RNA沉默促肝细胞再生磷酸酶-3基因表达对乳腺癌MCF-7细胞生长和侵袭能力的影响

目的构建以促肝细胞再生磷酸酶-3（PRL-3）为靶基因的短发夹状小干扰RNA（short hairpin RNA,shRNA）表达载体,并探讨PRL-3-shRNA表达载体对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。方法 构建PRL-3基因特异性shRNA表达载体,使用脂质体法将PRL-3-shRNA表达载体转染入MCF-7细胞。采用Real-ti me PCR和Western blot分别检测转染后MCF-7细胞中PRL-3基因mRNA和蛋白的表达;运用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法检测转染后MCF-7细胞的增殖水平,用流式细胞仪检测细胞凋亡的情况;采用Transwell小室法检测细胞侵袭力变化。计量资料采用单因素方差分析或重复测量方差分析。结果 酶切鉴定和测序分析证实PRL-3-shRNA表达载体成功构建。转染成功后,shRNA-1~3组PRL-3基因mRNA表达分别为（0.31±0.27）、（0.15±0.14）和（0.31±0.03）,与空白组和阴性组（1.00±0.00、0.98±0.18）相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。PRL-3-shRNA-2组PRL-3蛋白的表达量明显低于阴性组和空白组（0.50±0.02比0.91±0.03和0.89±0.02,P〈0.05）;PRL-3-shRNA-2转染入MCF-7细胞后能明显降低其增殖水平（P〈0.05）;PRL-3-shRNA-2组凋亡率明显高于空白组和阴性组[（8.37±1.85）%比（1.60±1.58）%和（0.16±0.05）%,P〈0.05];Transwell小室侵袭实验显示,PRL-3-shRNA-2组穿膜细胞数明显低于阴性组和空白组（P〈0.05）。结论 沉默PRL-3基因表达可抑制MCF-7细胞的增殖,促进凋亡。

RNAi沉默促肝细胞再生磷酸酶-3基因抑制肝癌细胞侵袭

促肝细胞再生磷酸酶（PRL）-3基因是PRLs家族重要成员之一，与某些肿瘤侵袭转移有关。最近研究发现，PRL3基因在肝癌细胞中高表达，但目前尚不清楚PRL-3基因在肝癌细胞侵袭转移中的可能作用和机制。本研究借助于RNA干扰（RNAi）技术，以合成PRL-3基因小干扰RNA（siRNA）转染处理肝癌细胞Hep3B，从体内外观察了对癌细胞侵袭的影响，并从基质金属蛋白酶（MMP）角度探讨了可能的机制。

促肝细胞再生磷酸酶-3基因在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的检测促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)mRNA在结直肠癌(CRC)中的表达,探讨其与CRC发生发展以及侵袭转移的关系。方法半定量PCR测定46例CRC组织及其对应正常黏膜、6例结直肠腺瘤(CRA)及其对应正常黏膜以及18例淋巴结和肝转移灶中PRL-3mRNA相对表达水平,并分析其表达水平与临床病理学指标的关系。单链多态性分析法(PCR-SSCP)检测基因突变情况。结果46例CRC中PRL-3基因表达量较相应正常黏膜组织高,差异有统计学意义(1.6±0.7比0.4±0.1,P<0.01);6例结直肠腺瘤组织与对应的正常黏膜中PRL-3mRNA表达量差异无统计学意义(0.6±0.3比0.5±0.2,P>0.05);12例淋巴结转移灶和6例肝转移灶PRL-3基因表达量分别为2.1±0.8和3.3±1.0,显著高于原发癌肿、正常黏膜、阴性淋巴结组织中的表达(P<0.01)。PRL-3基因表达水平与CRCDukes分期、浸润深度、淋巴结和远处转移有关(P<0.05),与性别、肿瘤大小、分化程度无关(P>0.05)。PCR-SSCP分析发现,6例肝转移灶中有1例出现异常泳动条带。结论PRL-3基因在CRC的发生发展和侵袭转移中起重要作用,其作用可能是通过基因表达上调和基因突变共同实现的。

抑制促肝再生磷酸酶-3对大肠癌细胞迁移能力的影响

目的:观察促肝再生磷酸酶-3(phosphatase of regeneration liver-3,PRL-3)抑制剂原钒酸钠(sodium orthovanadate,SoV)对大肠癌细胞株Colo-320迁移能力的影响.方法:应用Westernblot方法检测PRL-3在7株大肠癌细胞中的表达,筛选表达最强的1株做下一步抑制实验.选择PRL-3拮抗剂SoV,通过细胞划痕实验观察其在0.5μmol/L浓度下对癌细胞运动能力的影响,高倍倒置显微镜下计算细胞迁移距离.细胞爬片原位杂交观察SoV对PRL-3mRNA的表达.结果:PRL-3表达最强的结肠癌细胞株为Colo-320.细胞划痕实验显示,SoV作用48h细胞仅迁移相当于4-7个细胞的距离,400×倍镜下精确测量20个细胞在0-48h迁移距离,计算对照组细胞迁移速度为39.12±10.11μm/h,SoV为12.84±6.78μm/h,差异非常显著(P<0.00001).SoV作用细胞48h后原位杂交结果未见PRL-3mRNA阳性表达.结论:SoV能显著抑制Colo-320细胞迁移能力,其机制可能与抑制PRL-3酶活性以及基因转录有关.

肝再生磷酸酶-3上调转化生长因子-beta促进结肠癌LoVo细胞侵袭的机制研究

目的探讨转化生长因子-beta(TGF-beta)通路在肝再生磷酸酶-3(PRL-3)促进结肠癌细胞侵袭和转移中的作用机制。方法酶联免疫吸附试验ELISA检测实验组与对照组结肠癌细胞TGF-beta水平表达差异,Transwell侵袭小室法检测Lo Vo细胞侵袭能力变化,Western blot检测相关通路蛋白水平变化。结果 ELISA实验检测结肠癌细胞转染PRL-3后,稳定表达PRL-3的Lo Vo细胞(Lo Vo-P)与对照组(Lo Vo-C)相比,TGF-beta表达明显升高(114±11 pg/m L比56±8 pg/m L,P<0.01)。Transwell侵袭实验提示不同浓度的TGF-beta中和抗体(1、10、100 ng/m L)作用Lo Vo-P后其侵袭能力逐渐降低,对照组穿膜细胞数为142.7±11.3个,实验组分别为96.1±8.2、67.3±9.4、48.6±6.4个(P<0.05)。蛋白印记实验提示PI3K/AKT信号通路参与了其诱导侵袭的过程,使用PI3K抑制剂LY294002(10 mg/m L)后,Lo Vo-P的AKT磷酸化蛋白的表达水平降低2.5倍(P<0.05)。结论 PRL-3能诱导结肠癌Lo Vo细胞分泌TGF-beta,激活PI3K/AKT信号通路进而促进结肠癌Lo Vo细胞侵袭。

肝再生磷酸酶-3抗体联合培美曲塞促进人肺腺癌细胞系A549的凋亡

目的探讨肝再生磷酸酶-3(PRL-3)抗体和培美曲塞(Pem)单用及联用对人肺腺癌细胞系A549增殖、迁移和凋亡的影响。方法不同浓度PRL-3抗体处理A549细胞;CCK-8法测细胞增殖抑制率;Transwell小室法检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western bolt检测PRL-3、磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果1)与对照组相比,PRL-3抗体随浓度增加,对A549细胞增殖的抑制作用增加(P<0.05);2)联合用药组对A549细胞增殖和迁移能力的抑制作用优于单药组(P<0.05);3)联合用药组A549细胞凋亡率34.63%±1.65%高于PRL-3抗体组17.24%±1.15%和培美曲塞组15.32%±1.82%(P<0.05);4)与单药组相比,联合用药组PRL-3、P-ERK及VEGF蛋白表达下降更显著(P<0.05)。结论PRL-3抗体联合培美曲塞可抑制A549细胞增殖、迁移并诱导凋亡,效果优于单药。其作用机制可能与抑制PRL-3、P-ERK和VEGF蛋白表达相关。

肝再生磷酸酶-3在肝内胆管癌中的表达及其在肝内胆管癌侵袭转移中的作用

背景与目的探讨肝再生磷酸酶-3（PRL-3）在肝内胆管癌中的表达及其与肝内胆管癌侵袭转移及预后的关系,并进一步研究PRL-3在侵袭转移过程中的作用。 方法应用免疫组化方法检测102例肝内胆管癌原发灶及相应癌旁组织和62例淋巴结转移灶中PRL-3表达，分析其表达水平与临床病理资料的关系及其对肝内胆管癌预后的影响。并用PRL-3基因小干扰RNA（small interferingRNA，siRNA）转染处理肝内胆管癌HCCC-9810细胞力，分别采用实时定量RT-PCR和Western Blot检测干扰后PRL-3基因mRNA和蛋白水平，

分子佐剂TBhsp和MT在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体制备中的作用

目的探讨结核分枝杆菌热休克蛋白(TBhsp)和结核分枝杆菌T细胞刺激表位(MT)在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体(mAb)制备过程中的佐剂作用。方法构建对照质粒pET28a-PRL-3和佐剂-PRL-3融合蛋白表达质粒pET28a-PRL-3-MT、pET28a-TBhsp-PRL-3和pET28a-TBhsp-PRL-3-MT,并纯化其表达蛋白,分别免疫BALB/c小鼠,ELISA检测并比较各组的抗血清效价,选取效价最高的小鼠,采用杂交瘤技术制备PRL-3 mAb,并进行类和亚类鉴定。结果成功构建了上述4种PRL-3相关的重组表达质粒,并表达纯化出相应的融合蛋白,其中PRL-3-MT融合蛋白免疫组抗体效价高于其他组;用该组小鼠进行细胞融合并筛选获得均为IgG类的10株分泌PRL-3 mAb的细胞株。结论 MT在PRL-3 mAb制备中可以发挥较为明显的免疫佐剂作用。

肝再生磷酸酶-3在非小细胞肺癌的表达及意义

目的研究肝再生磷酸酶-3(PRL-3)在非小细胞肺癌(NSCLC)的表达及意义。方法采用免疫组化法检测25例对照组和51例NSCLC患者PRL-3表达水平并进行分析比较。结果 PRL-3在对照组、肺癌组的阳性表达率分别为12.00%和74.51%(P<0.05);PRL-3的表达与非小细胞肺癌有无淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05),与年龄、性别、病理类型无关(P>0.05)。结论 PRL-3表达与非小细胞肺癌的发生发展有一定的关系,PRL-3检测可作为判定非小细胞肺癌浸润及转移程度的一个生物学指标。

髓源性抑制细胞在靶向肝再生磷酸酶-3小鼠乳腺肿瘤基因免疫中的表达

目的观察髓源性抑制细胞(MDSC)在靶向肝再生磷酸酶-3(PRL-3)小鼠乳腺肿瘤基因免疫中的表达,探讨MDSC的数量与肿瘤生长的关系。方法将40只雌性BALB/c小鼠分为5大组(8小组),空载对照组[pVAX1(-)组]、无佐剂组PRL-3组(K-PRL3组)、佐剂-PRL-3融合蛋白组(K-T-PRL3组和K-PRL3-MT组)及MDSC对照抗体删除组(K-T-PRL3+Ab control组和K-PRL3-MT+Ab control组),MDSC特异性抗体删除组(K-T-PRL3+Gr-1Ab组和K-PRL3-MT+Gr-1 Ab组),通过流式细胞术检测免疫表型CD45、Gr-1及CD11b,分析MDSC在各免疫组外周血、肿瘤、脾脏中的表达水平,观察MDSC与肿瘤生长的相关性。结果荷瘤后第28天K-PRL3组、K-T-PRL3组和K-PRL3-MT组肿瘤体积均小于pVAX1(-)组,差异均有统计学意义(均P<0.05);K-PRL3-MT组和K-T-PRL3组与K-PRL3组肿瘤体积比较,差异无统计学意义(P>0.05)。佐剂-PRL-3融合蛋白组小鼠外周血或肿瘤组织中MDSC表达均高于K-PRL3组,差异有统计学意义(P<0.05)。MDSC特异性抗体删除组(K-T-PRL3+Gr-1 Ab组和K-PRL3-MT+Gr-1 Ab组)与MDSC对照抗体删除组(K-T-PRL3+Ab control组和K-PRL3-MT+Ab control组)肿瘤体积大小比较,差异无统计学意义(P>0.05);MDSC特异性抗体删除组、MDSC对照抗体删除组肿瘤体积均大于无佐剂组PRL-3组和佐剂-PRL-3融合蛋白组,差异有统计学意义(P<0.01);MDSC特异性抗体删除组脾脏、外周血MDSC表达均低于对照抗体删除组,而肿瘤组织中MDSC表达与MDSC对照抗体删除组比较,差异无统计学意义(P>0.05),且均大于佐剂-PRL-3融合蛋白组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论在靶向PRL-3的小鼠乳腺肿瘤基因免疫中佐剂-PRL-3融合蛋白组肿瘤组织中MDSC与肿瘤生长相关,为进一步优化靶向PRL-3的抗肿瘤免疫治疗方案及MDSC相关作用研究提供理论依据。