慢病毒介导shRNA特异性沉默促肝细胞再生磷酸酶1基因表达抑制舌癌细胞迁移侵袭能力

目的:探讨特异性沉默促肝细胞再生磷酸酶1(phosphatase of regenerating liver cell-1,PRL-1)基因表达对舌癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法:设计、合成5条针对PRL-1基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)干扰序列,构建于慢病毒载体质粒中,PCR电泳及基因测序验证。转染293T细胞,Western blot筛选最佳干扰序列,包装产生慢病毒。转染TCA8113细胞,筛选、建立稳定转染细胞株;real-time PCR检测PRL-1基因沉默效率;划痕实验和Transwell实验分别比较慢病毒转染细胞(KD组)、空病毒转染细胞(NC组)及TCA8113细胞(CON组)迁移、侵袭能力变化。结果:PCR电泳及基因测序证实5条sh RNA序列定向插入慢病毒载体质粒中。Western blot筛选出PRL-1-sh RNA-1基因沉默效率最高,包装获得慢病毒滴度为7×108 TU/ml。通过转染、筛选,建立了TCA8113细胞稳定转染细胞株;real-time PCR测得PRL-1基因m RNA表达明显下降(F=809.120,P=0.000);PRL-1基因沉默后细胞迁移能力降低,穿过人工基底膜的细胞数KD组(25.5±0.4)明显少于NC组(81.5±2.0)和CON组(88.5±2.3)(F=1 092.970,P=0.000)。结论:沉默PRL-1基因表达能有效抑制舌癌细胞迁移、侵袭能力。

促肝细胞再生磷酸酶1基因对舌癌细胞侵袭的影响

目的:探讨促肝细胞再生磷酸酶1(phosphatase of regenerating liver cell-1,PRL-1)对舌癌细胞侵袭能力的影响及其可能的机制。方法:应用si RNA-PRL-1慢病毒载体转染处理舌癌TCA8113细胞株后,分别采用荧光定量PCR和蛋白质印迹检测PRL-1基因和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)m RNA和蛋白水平;采用Transwell小室模型实验检测癌细胞的侵袭能力。结果:si RNA-PRL-1慢病毒转染组癌细胞PRL-1在RNA(0.425 0±0.010 0)和蛋白(2.720 0±0.110 0)水平明显下调(P=0.000,P=0.000),同时MMP-2及MMP-9在RNA(0.562 2±0.180 0,0.617 1±0.100 0)及蛋白(0.592 4±0.010 0,0.476 2±0.020 0)表达水平降低(P=0.024,P=0.010,P=0.000,P=0.000);Transwell实验si RNA-PRL-1慢病毒转染组细胞通过数(64.33±4.04)明显减少(P=0.000)。结论:si RNA-PRL-1转染可抑制舌癌细胞侵袭,其机制可能与PRL-1基因下调MMP-2及MMP-9的表达有关。

结直肠癌肝转移患者白细胞介素-18、促肝再生磷酸酶蛋白3表达与PI3K及AKT蛋白的关系

目的探讨结直肠癌肝转移患者癌组织中白细胞介素-18(IL-18)、促肝再生磷酸酶蛋白3(PRL-3)表达与临床病理特征及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝苏氨酸蛋白激酶B(AKT)蛋白水平的关系。方法选取2019年10月至2021年10月于上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院行同期切除术的85例结直肠癌肝转移患者(肝转移组)的癌组织样本及癌旁正常组织(距肿瘤切缘4 cm),以及同期65例未发生肝转移结直肠癌患者(未肝转移组)的癌组织为研究对象。免疫组织化学S-P法检测不同组织中IL-18、PRL-3阳性表达率,Western blot检测癌组织中PI3K、p-AKT相对表达水平,分析IL-18、PRL-3与患者临床病理的关系及其与PI3K、p-AKT表达的相关性。结果与未肝转移组比较,肝转移组TNM分期IV期、低分化程度比例较高(P<0.05)。肝转移患者癌组织中IL-18、PRL-3、PI3K、p-AKT蛋白阳性表达率高于其癌旁正常组织和未肝转移患者癌组织,且未肝转移患者癌组织中IL-18、PRL-3、PI3K、p-AKT蛋白阳性表达率高于肝转移患者癌旁正常组织(P<0.05)。相关性分析示,肝转移患者癌组织中IL-18、PRL-3表达与PI3K、p-AKT均呈正相关(P<0.05);未转移癌组织中IL-18表达与PI3K、p-AKT均呈正相关(P<0.05),PRL-3表达与p-AKT均呈正相关(P<0.05),且IL-18与PRL-3呈显著正相关(P<0.05)。结论IL-18、PRL-3可能通过激活PI3K/AKT信号通路从而参与结直肠癌肝转移过程。

促肝细胞再生磷酸酶-3及整合素β1在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨促肝细胞再生磷酸酶-3(phosphatase of regenerating liver-3,PRL-3)及整合素β1(integrinβ1,Intβ1)在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法和实时荧光定量PCR检测食管癌组织、癌旁组织和正常组织中PRL-3和Intβ1的表达水平。结果在蛋白水平和基因水平检测均发现癌组织中PRL-3和Intβ1的表达高于癌旁组织(P<0.05)和正常组织。结论 PRL-3和Intβ1在食管鳞状细胞癌组织中表达增高,可能作为肿瘤标志物来监控食管鳞状细胞癌的发生、发展、浸润和转移。

食管鳞状细胞癌促肝细胞再生磷酸酶-3和整合素β1 mRNA联合表达的定量分析及意义

目的研究食管鳞状细胞癌中促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)和整合素β1(Intβ1)mRNA的表达水平及差异,分析其表达与临床病理特征的关系,探讨其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测食管癌组织,癌旁组织和正常组织中PRL-3和Intβ1 mRNA的表达水平,分析其表达的差异;研究其表达水平与性别、年龄、肿瘤直径、TNM分期、肿瘤组织分化程度、淋巴结转移、浸润深度等临床病理特征的关系及两者的相关性。结果 PRL-3、Intβ1 mRNA的表达癌组织中均高于癌旁组织(P<0.05),正常组织中表达最低。PRL-3及Intβ1 mRNA在肿瘤患者中的相对表达水平均与肿瘤组织分化程度、TNM分期、有无淋巴结转移、浸润深度有关,与患者年龄、性别无关;PRL-3 mRNA相对表达水平还与肿瘤直径有关,Intβ1 mRNA与肿瘤直径无关。结论 PRL-3和Intβ1在食管鳞状细胞癌组织中表达增高,其联合检测结果可作为参考指标来了解食管鳞状细胞癌的发生发展、浸润、转移和预后。

促肝细胞再生磷酸酶-3基因对大肠癌细胞侵袭和失巢凋亡的调控

目的探讨促肝细胞再生磷酸酶(phosphatase of regenerating liver cell-3,PRL-3)基因对大肠癌细胞侵袭的影响及可能机制。方法应用PRL-3基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理人大肠癌HCT116细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测PRL-3 mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力,采用琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞失巢凋亡情况。结果转染组癌细胞PRL-3 mRNA和蛋白水平明显被抑制,且与时间和浓度相关。与对照组比较,转染组细胞所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少,且呈时间和浓度依赖性。琼脂糖凝胶电泳和TUNEL结果显示,转染组细胞出现明显的凋亡现象:凋亡指数增加,出现明显的DNA条带。结论PRL-3基因siRNA转染可明显抑制大肠癌细胞的锚着不依赖性增殖和恶性侵袭,其机制可能与诱导失巢凋亡有关。

3种姜黄素类似物对重组人促肝细胞再生磷酸酶-3活性的影响

目的研究3种姜黄素类似物对重组人促肝细胞再生磷酸酶PRL-3酶活性的影响。方法利用基因工程技术获得重组人PRL-3酶;通过测定PRL-3酶水解底物DiFMUP中磷酸基团生成DiFMU的荧光强度,探讨姜黄素类似物对重组人促肝细胞再生磷酸酶PRL-3活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。结果姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素能明显抑制PRL-3酶活性,其IC50值分别为11.80(7.65～15.32,95%CI),19.92(16.18～23.69,95%CI)和26.19(21.18～31.14,95%CI)μmol/L。结论姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素是较强的重组人促肝细胞再生磷酸酶PRL-3的抑制剂。

促肝细胞再生磷酸酶-3在鼻腔鼻窦鳞癌中的表达及与预后的关系研究

目的研究促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)在鼻腔鼻窦鳞癌中的表达及与临床病理特征的关系。方法采用回顾性研究,收集54例鼻腔鼻窦鳞癌患者(鼻腔鼻窦鳞癌组)、36例鼻息肉患者(鼻息肉组)及30例正常人(对照组)鼻腔黏膜组织标本。采用免疫组织化学染色法对其PRL-3蛋白表达阳性率进行检测,并用实时荧光定量PCR法对PRL-3 mRNA相对表达量进行检测,同时分析PRL-3与鼻腔鼻窦鳞癌患者临床病理特征的相关性。结果鼻腔鼻窦鳞癌组PRL-3蛋白表达阳性率较对照组、鼻息肉组明显升高(P <0. 05)。与对照组、鼻息肉组相比,PRL-3mRNA在鼻腔鼻窦鳞癌组中的表达明显上调(P <0. 05)。不同性别、年龄的鼻腔鼻窦鳞癌患者PRL-3蛋白表达阳性率的比较,并无显著差异(P> 0. 05);低分化、病理分期为Ⅲ~Ⅳ期、伴有淋巴结转移的鼻腔鼻窦鳞癌患者PRL-3蛋白表达阳性率明显高于高分化、病理分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移者(P <0. 05)。结论 PRL-3高表达于鼻腔鼻窦鳞癌患者,且与肿瘤分化程度、病理分期及是否伴有淋巴结转移密切相关,提示其有望成为评估鼻腔鼻窦鳞癌患者预后的独立预测因子。

乳腺导管浸润癌组织中促肝细胞再生磷酸酶蛋白的表达

目的:探讨乳腺导管浸润癌组织中促肝细胞再生磷酸酶(PRL-3)的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法:采用免疫组化SP法检测60例乳腺浸润性导管癌、6例乳腺正常组织、15例轻中度和20例重度不典型增生组织中PRL-3的表达及其与乳腺浸润性导管癌临床病理特征之间的关系。结果:PRL-3蛋白在乳腺正常组织、乳腺导管轻中度不典型增生、重度不典型增生和乳腺导管浸润癌组织中的阳性表达率分别为0、46.7%、80.0%和95.0%,4组间比较,差异有统计学意义(P=0.008);组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。乳腺浸润性导管癌中PRL-3蛋白与淋巴结转移和组织学分级有关(χ2=6.494,P=0.011和0.008)。结论:PRL-3蛋白可能与乳腺浸润性导管癌的发生发展及转移有关。

抑制促肝再生磷酸酶-3对大肠癌细胞迁移能力的影响

目的:观察促肝再生磷酸酶-3(phosphatase of regeneration liver-3,PRL-3)抑制剂原钒酸钠(sodium orthovanadate,SoV)对大肠癌细胞株Colo-320迁移能力的影响.方法:应用Westernblot方法检测PRL-3在7株大肠癌细胞中的表达,筛选表达最强的1株做下一步抑制实验.选择PRL-3拮抗剂SoV,通过细胞划痕实验观察其在0.5μmol/L浓度下对癌细胞运动能力的影响,高倍倒置显微镜下计算细胞迁移距离.细胞爬片原位杂交观察SoV对PRL-3mRNA的表达.结果:PRL-3表达最强的结肠癌细胞株为Colo-320.细胞划痕实验显示,SoV作用48h细胞仅迁移相当于4-7个细胞的距离,400×倍镜下精确测量20个细胞在0-48h迁移距离,计算对照组细胞迁移速度为39.12±10.11μm/h,SoV为12.84±6.78μm/h,差异非常显著(P<0.00001).SoV作用细胞48h后原位杂交结果未见PRL-3mRNA阳性表达.结论:SoV能显著抑制Colo-320细胞迁移能力,其机制可能与抑制PRL-3酶活性以及基因转录有关.

7种黄酮类化合物对重组人促肝细胞再生磷酸酶-3活性的影响

目的：观察8种黄酮类化合物对重组人促肝细胞再生磷酸酶PRL-3酶活性的影响。方法：构建人PRL-3 cDNA重组质粒pCold Ⅱ-his-prl-3，15℃条件下在ArcticExpressTM（DE3）RP表达菌中用IPTG诱导表达可溶性目的蛋白，初步用Histag抗体和PRL-3抗体进行Westernblot鉴定，经镍柱纯化，用胰酶酶切后，

3种姜黄素类似物对重组人促肝细胞再生磷酸酶-3活性的影响

目的研究3种姜黄素类似物对重组人促肝细胞再生磷酸酶PRL-3酶活性的影响。方法利用基因工程技术获得重组人PRL-3酶；通过测定PRL-3酶水解底物DiFMUP中磷酸基团生成DiFMU的荧光强度，探讨姜黄素类似物对重组人促肝细胞再生磷酸酶PRL-3活性的抑制作用，并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。

大鼠肝再生过程中碱性磷酸酶活性变化及其超微细胞化学研究

目的 研究 2 / 3肝切除后大鼠肝再生过程中碱性磷酸酶 (AKP)活性的变化及其细胞定位。 方法 利用比色法对AKP活性进行定量分析 ;用酶的原位复性电泳技术分析再生肝中AKP的种类和活性变化 ;用电镜细胞化学方法研究酶定位。 结果 在肝部分切除后的肝再生期间 ,AKP出现两个活性高峰 (16h和 19h) ,在每个活性高峰后 ,AKP均有显著下降 ;获得 3种肝型AKP同工酶 (14 0、16 0和 180kD) ,其中 180kD的AKP只在肝再生过程中出现 ;随着肝再生的进展 ,AKP活性出现在细胞的不同部位。 结论 AKP在肝再生过程中起重要作用 ,可能参与细胞代谢、物质转运、DNA合成和细胞分化。

磷脂酸磷酸酶2域1A在不同转移能力肝癌细胞系中的表达

目的研究磷脂酸磷酸酶2域1A(PPAPDC1A)在7种不同转移能力的肝癌细胞系中表达的差异。方法以7种不同转移能力的肝癌细胞系(BEL-7402、Hep G2、MHCC-97L、SMMC-7721、HCCL-M6、BEL-7404、MHCC-97H细胞)为研究对象,通过实时荧光定量聚合酶链式反应和Western blot法分别检测其PPAPDC1A mRNA和蛋白的表达。结果在7种不同转移能力的肝癌细胞中,PPAPDC1A mRNA与PPAPDC1A蛋白的表达从低到高依次为BEL-7402细胞<Hep G2细胞<MHCC-97L细胞<SMMC-7721细胞<HCCL-M6细胞<BEL-7404细胞<MHCC-97H细胞;7种不同转移能力肝癌细胞中PPAPDC1A mRNA和PPAPDC1A蛋白的表达比较差异均有统计学意义(F=38.373、441.937,P<0.05)。其中Hep G2细胞中PPAPDC1A蛋白的表达显著高于BEL-7402细胞(P<0.05);MHCC-97L细胞中PPAPDC1A蛋白的表达显著高于Hep G2细胞(P<0.05);SMCC-7721、HCCL-M6细胞中PPAPDC1A蛋白的表达显著高于MHCC-97L细胞(P<0.05);HCCL-M6细胞中PPAPDC1A蛋白的表达显著高于SMCC-7721细胞(P<0.05);MHCC-97L、SMCC-7721、HCCL-M6、BEL-7404、MHCC-97H细胞中PPAPDC1A mRNA和PPAPDC1A蛋白的表达显著高于BEL-7402细胞(P<0.05);SMCC-7721、HCCL-M6、BEL-7404、MHCC-97H细胞中PPAPDC1A mRNA和PPAPDC1A蛋白的表达显著高于Hep G2细胞(P<0.05);BEL-7404、MHCC-97H细胞中PPAPDC1A mRNA和PPAPDC1A蛋白的表达显著高于MHCC-97L细胞(P<0.05);BEL-7404、MHCC-97H细胞中PPAPDC1A mRNA和PPAPDC1A蛋白的表达显著高于SMCC-7721细胞(P<0.05);BEL-7404、MHCC-97H细胞中PPAPDC1A mRNA和PPAPDC1A蛋白的表达显著高于HCCL-M6细胞(P<0.05);MHCC-97H细胞中PPAPDC1A mRNA和PPAPDC1A蛋白的表达显著高于BEL-7404细胞(P<0.05)。结论 PPAPDC1A可能促进肝细胞癌的侵袭与转移。

蛋白酪氨酸磷酸酶受体D通过STAT3途径影响肝癌细胞PD-L1表达的机制研究

背景与目的:蛋白酪氨酸磷酸酶受体D(protein tyrosine phosphatase receptor type delta,PTPRD)和程序性死亡[蛋白]配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)在肝癌组织的异常表达与肿瘤侵袭和转移有关。信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription-3,STAT3)通路在癌症中起着关键作用,影响免疫系统的许多方面,STAT3异常激活与PTPRD和PD-L1的异常表达密切相关,然而PTPRD和PD-L1的相关性目前鲜见文献报道。探讨PTPRD和PD-L1在肝癌组织中的表达相关性,进一步在肝癌细胞中观察PTPRD是否可调控PD-L1。方法:采用免疫组织化学法分析2018年10月-2019年1月广西医科大学附属肿瘤医院肝二病区收治的原发性肝癌并经手术治疗的16例肝癌患者的肿瘤标本及其癌旁标本中PTPRD和PD-L的蛋白水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测同一标本PTPRD和PD-L1 mRNA的表达,分析两者的相关性。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测过表达或沉默PTPRD对PD-L1、STAT3和p-STAT3蛋白水平的影响。采用RTFQ-PCR检测PTPRD过表达对PD-L1转录水平的影响。结果:肝癌组织中PTPRD的表达显著低于癌旁组织(P<0.05),PD-L1表达显著高于癌旁组织(P<0.05),两者表达呈负相关性(r2=0.275 8,P=0.036 7);PTPRD过表达时,PD-L1、STAT3和p-STAT3蛋白的表达水平下降(P<0.05),PTPRD沉默时,PD-L1的表达增高。结论:PTPRD和PD-L1表达水平在肝癌中呈负相关,PTPRD可能通过STAT3信号通路调节PD-L1的表达。PTPRD有望成为肝癌免疫治疗新靶点。

髓源性抑制细胞在靶向肝再生磷酸酶-3小鼠乳腺肿瘤基因免疫中的表达

目的观察髓源性抑制细胞(MDSC)在靶向肝再生磷酸酶-3(PRL-3)小鼠乳腺肿瘤基因免疫中的表达,探讨MDSC的数量与肿瘤生长的关系。方法将40只雌性BALB/c小鼠分为5大组(8小组),空载对照组[pVAX1(-)组]、无佐剂组PRL-3组(K-PRL3组)、佐剂-PRL-3融合蛋白组(K-T-PRL3组和K-PRL3-MT组)及MDSC对照抗体删除组(K-T-PRL3+Ab control组和K-PRL3-MT+Ab control组),MDSC特异性抗体删除组(K-T-PRL3+Gr-1Ab组和K-PRL3-MT+Gr-1 Ab组),通过流式细胞术检测免疫表型CD45、Gr-1及CD11b,分析MDSC在各免疫组外周血、肿瘤、脾脏中的表达水平,观察MDSC与肿瘤生长的相关性。结果荷瘤后第28天K-PRL3组、K-T-PRL3组和K-PRL3-MT组肿瘤体积均小于pVAX1(-)组,差异均有统计学意义(均P<0.05);K-PRL3-MT组和K-T-PRL3组与K-PRL3组肿瘤体积比较,差异无统计学意义(P>0.05)。佐剂-PRL-3融合蛋白组小鼠外周血或肿瘤组织中MDSC表达均高于K-PRL3组,差异有统计学意义(P<0.05)。MDSC特异性抗体删除组(K-T-PRL3+Gr-1 Ab组和K-PRL3-MT+Gr-1 Ab组)与MDSC对照抗体删除组(K-T-PRL3+Ab control组和K-PRL3-MT+Ab control组)肿瘤体积大小比较,差异无统计学意义(P>0.05);MDSC特异性抗体删除组、MDSC对照抗体删除组肿瘤体积均大于无佐剂组PRL-3组和佐剂-PRL-3融合蛋白组,差异有统计学意义(P<0.01);MDSC特异性抗体删除组脾脏、外周血MDSC表达均低于对照抗体删除组,而肿瘤组织中MDSC表达与MDSC对照抗体删除组比较,差异无统计学意义(P>0.05),且均大于佐剂-PRL-3融合蛋白组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论在靶向PRL-3的小鼠乳腺肿瘤基因免疫中佐剂-PRL-3融合蛋白组肿瘤组织中MDSC与肿瘤生长相关,为进一步优化靶向PRL-3的抗肿瘤免疫治疗方案及MDSC相关作用研究提供理论依据。

分子佐剂TBhsp和MT在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体制备中的作用

目的探讨结核分枝杆菌热休克蛋白(TBhsp)和结核分枝杆菌T细胞刺激表位(MT)在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体(mAb)制备过程中的佐剂作用。方法构建对照质粒pET28a-PRL-3和佐剂-PRL-3融合蛋白表达质粒pET28a-PRL-3-MT、pET28a-TBhsp-PRL-3和pET28a-TBhsp-PRL-3-MT,并纯化其表达蛋白,分别免疫BALB/c小鼠,ELISA检测并比较各组的抗血清效价,选取效价最高的小鼠,采用杂交瘤技术制备PRL-3 mAb,并进行类和亚类鉴定。结果成功构建了上述4种PRL-3相关的重组表达质粒,并表达纯化出相应的融合蛋白,其中PRL-3-MT融合蛋白免疫组抗体效价高于其他组;用该组小鼠进行细胞融合并筛选获得均为IgG类的10株分泌PRL-3 mAb的细胞株。结论 MT在PRL-3 mAb制备中可以发挥较为明显的免疫佐剂作用。

肝再生磷酸酶-3在非小细胞肺癌的表达及意义

目的研究肝再生磷酸酶-3(PRL-3)在非小细胞肺癌(NSCLC)的表达及意义。方法采用免疫组化法检测25例对照组和51例NSCLC患者PRL-3表达水平并进行分析比较。结果 PRL-3在对照组、肺癌组的阳性表达率分别为12.00%和74.51%(P<0.05);PRL-3的表达与非小细胞肺癌有无淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05),与年龄、性别、病理类型无关(P>0.05)。结论 PRL-3表达与非小细胞肺癌的发生发展有一定的关系,PRL-3检测可作为判定非小细胞肺癌浸润及转移程度的一个生物学指标。

肝癌细胞蛋白磷酸酶2A催化亚基在过氧化氢和黄曲霉毒素B1诱导急慢性肝癌细胞损伤模型中的表达及其对肝癌细胞的影响

目的探讨过氧化氢和黄曲霉毒素B1诱导肝癌细胞急慢性损伤后蛋白磷酸酶2A催化亚基(PP2A)的表达情况。方法采用不同浓度的过氧化氢(0、50、100、200、400、800μmol/L)或黄曲霉毒素B1(0、1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L)诱导肝癌细胞(HepG2/Huh-7细胞)2、4、6、8和24、48 h后,倒置显微镜观察细胞形态,刃天青实验检测肝癌细胞活性,Western Blot检测去甲基化PP2A催化亚基C(PP2Ac)和总PP2Ac蛋白的表达情况。两组间比较用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析和析因设计资料两因素方差分析。结果HepG2/Huh-7细胞对过氧化氢和黄曲霉毒素B1诱导敏感,随着过氧化氢和AFB1浓度升高或孵育时间延长,细胞形态发生变化,数量减少。在2、4、6和8 h时间段,100μmol/L及以上浓度的过氧化氢诱导HepG2/Huh-7细胞后,随着过氧化氢浓度的升高,HepG2/Huh-7细胞活性逐渐下降,不同浓度过氧化氢与对照组(0μmol/L)比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。在4个不同时间段,两株细胞IC50用两因素方差分析比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。在24、48 h时间段,2.5μmol/L及以上浓度黄曲霉毒素B1诱导HepG2/Huh-7细胞后,随着浓度的升高,HepG2/Huh-7细胞活性逐渐下降,不同黄曲霉毒素B1浓度与对照组(0μmol/L)相比,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。在两个不同时间段,两株细胞IC50用两因素方差分析比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。用200μmol/L过氧化氢诱导HepG22 h后,总PP2Ac和去甲基化PP2Ac蛋白表达水平与对照组相比升高,差异均有统计学意义(t值分别为-5.553、-2.990,P值分别为0.005、0.040);400μmol/L过氧化氢诱导Huh-7细胞2 h后,总PP2Ac和去甲基化PP2Ac蛋白表达水平与对照组相比升高,差异均有统计学意义(t值分别为0.073、-5.149,P值分别为0.002、0.007)。用10μmol/L黄曲霉毒素B1诱导HepG2细胞2 h后,总PP2Ac和去甲基化PP2Ac蛋白表达水平与对照组相比升高,差异均有统计学意义(t值分别为-4.561、-5.788,P值分别为0.010、0.004);20μmol/L黄曲霉毒素B1诱导Huh-7细胞2 h后,总PP2Ac和去甲基化PP2Ac蛋白表达水平与对照组相比升高,差异均有统计学意义(t值分别为-5.120、-6.144,P值分别为0.007、0.004)。结论过氧化氢和黄曲霉毒素B1诱导肝癌细胞急慢性损伤后细胞形态发生变化,细胞活性降低,总PP2Ac和去甲基化PP2Ac蛋白表达升高。