促肾上腺皮质激素释放激素受体1基因多态与抗抑郁药物疗效的关联研究

目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素受体1(corticotropin-releasing hormone receptor1,CRHR1)基因多态性与选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(Selective Serotonin Reuptake Inhibitors,SSRIs)、5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(Serotonin and Norepinephrine Reuptake Inhibitors,SNRIs)抗抑郁疗效差异的相关性。方法对符合美国精神障碍诊断与统计手册第4版(Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders,Fourth Edi-tion,DSM-Ⅳ)抑郁症诊断标准的271例抑郁症患者予以单一新型抗抑郁药(SSRIs或SNRIs)常规剂量治疗至少6周,以治疗前后17项汉密尔顿抑郁量表(Hamilton Depression Scale,HAMD)总分减分率作为评估疗效的指标。采用TaqMan探针法检测CRHR1基因上4个单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)的基因型,比较有效组(HAMD-17减分率≥50%)和无效组(HAMD-17减分率<50%)之间4个位点基因型及多位点组成单倍型的不同。结果治疗4周末:CRHR1基因rs17689966位点A等位基因及AA基因型携带者在治疗无效组的频率均显著高于有效组(88.0%vs.77.0%,P=0.004;75.8%vs.59.0%,P=0.004)。有3种单倍型在有效组和无效组之间的分布差异有统计学意义,分别是T-A/T-G(rs242924-rs17689966:86.6%vs.74.7%,P=0.002;8.1%vs.15.5%,P=0.018),G-T-G(rs4458044-rs rs242924-rs17689966:8.2%vs.15.5%,P=0.019)。治疗6周末:CRHR1基因4个SNPs的基因型、等位基因频率及单倍型分析在不同疗效患者组间分布差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论CRHR1基因多态性可能与SSRIs、SNRIs类药物的早期疗效相关。

促肾上腺皮质激素释放激素受体1拮抗剂CP154526对大鼠海马神经元凋亡的影响

目的观察促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)受体1拮抗剂CP154526对海马神经元凋亡的影响。方法原代培养大鼠海马神经元,噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,然后分为4组:正常对照组(Con)、CRH刺激组(CRH)、CRH和CP154526共同刺激组(CRH+CP)、CP154526刺激组(CP)。TUNEL、流式细胞术AnnexinⅤ-PI法检测神经元凋亡率;Western blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3表达水平。结果 10-8mol·L-1的CRH作用于海马神经元后,细胞存活率下降(P<0.05);50 mmol·L-1的CP154526可明显提升神经元存活率(P<0.05)。与正常对照组相比,CRH刺激后神经元凋亡率增加,Bax/Bcl-2比值增高,caspase-3表达增加;加用CP154526可明显降低神经元凋亡率、Bax/Bcl-2比值及caspase-3表达水平;而单独应用CP154526对凋亡没有明显影响。结论一定浓度的CRH可诱导海马神经元细胞凋亡,其受体1拮抗剂CP154526可有效减轻细胞凋亡,发挥神经保护作用。

促肾上腺皮质激素释放激素受体1基因多态性与抑郁症的相关性研究

目的:探讨抑郁症与促肾上腺皮质激素释放激素受体1(CRHR1)基因rs242939多态性的关系。方法:采用基于Taqman-MGB的荧光定量PCR方法,检测206例抑郁症患者以及195例正常对照者的CRHR1基因rs242939位点单核苷酸多态性,分析该等位基因、基因型频率是否与抑郁症关联。结果:在正常对照组的rs242939位点的A等位基因和基因型纯合子AA的频率较抑郁症患者组高,具有显著性差异,提示rs242939位点的多态性与抑郁症的发病相关联,纯合子AA基因型对于抑郁症的发病可能起到一定的保护作用。将抑郁症分为复发性和单次发作进行分层分析,显示二组在CRHR1基因的单个SNPs的等位基因和基因型分布没有统计学上的差异。结论:CRHR1基因与抑郁症相关联。

妊娠期小鼠血浆促肾上腺皮质激素释放激素水平变化研究

为了探讨促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)在小鼠妊娠期间血浆中的浓度变化及其与小鼠妊娠持续时间的关系,选取自然交配的见栓雌鼠,自见栓当天开始,通过面颊采血分离、收集血浆,采用酶联免疫吸附试验测定CRH含量。通过对孕鼠妊娠期间、分娩当天及分娩后24 h血浆CRH水平的分析,发现正常妊娠孕鼠血浆中CRH水平在妊娠早期即升高,妊娠13.5 d起血浆CRH水平[(21.6±3.90)pg/mL]呈进行性升高,妊娠晚期升高显著,至分娩时达最高水平,分娩后24 h CRH基本恢复至正常值;早产孕鼠13.5 d时血浆含量高于正常妊娠的小鼠,而难产孕鼠的CRH则明显低于正常妊娠小鼠;孕鼠13.5 d血浆中CRH的含量与妊娠持续时间呈负相关。说明小鼠血浆中CRH水平可作为判定妊娠持续时间的一个标志,用于预测孕鼠的分娩时间,为小鼠的剖宫产生物净化提供理论基础。

半夏泻心汤对功能性消化不良大鼠抑郁状态及促肾上腺皮质激素释放因子相关通路的影响

目的:观察半夏泻心汤对功能性消化不良(FD)大鼠抑郁样行为、下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)及其受体CRF-R1、CRF-R2的影响。方法:48只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组、半夏泻心汤低、中、高剂量组,共六组,每组各8只。空白组正常饲养,其余五组采用不规则喂养+夹尾激惹刺激法造模,造模成功后半夏泻心汤低、中、高各剂量组分别给予0.62、1.24、2.48 g/ml剂量灌胃,氟西汀组给予2 mg/kg氟西汀,空白组及模型组均给予同等容积的蒸馏水,各组连续灌胃14 d。干预结束后采用糖水偏好实验和旷场实验测试各组抑郁样行为;HE染色观察大鼠胃窦组织基本形态;RT-qPCR和Western blot检测大鼠下丘脑中CRF、CRF-R1和CRF-R2 mRNA和蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠体重、糖水偏好度、旷场实验移动总距离和直立次数均明显下降(P<0.05);下丘脑中CRF、CRF-R1 mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.01),CRF-R2 mRNA和蛋白的表达均明显降低(P<0.01)。与模型组比较,半夏泻心汤各剂量组大鼠的体重、糖水偏好度、旷场实验移动总距离和直立次数均明显增加(P<0.05);半夏泻心汤各剂量组FD大鼠下丘脑中CRF、CRF-R1 mRNA的表达量均明显降低(P<0.01),CRF-R2 mRNA的表达明显升高;半夏泻心汤高剂量组FD大鼠下丘脑中CRF蛋白表达均明显降低(P<0.01),半夏泻心汤各剂量组FD大鼠下丘脑中CRF-R1蛋白表达明显降低(P<0.01),CRF-R2蛋白表达升高(P<0.05)。结论:半夏泻心汤可通过调控CRF通路,恢复CRF-R1和CRF-R2的平衡状态,发挥抗抑郁的作用。

促肾上腺皮质激素释放激素参与痛觉与痒觉信息调控的机制

促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)是应激的始动因子。以往的观察发现,急性应激可镇痛、抑痒,慢性应激则常常促痛、促痒,而这其中的机制还未被完全阐明。本文将通过文献回顾,分析CRH参与痛觉与痒觉信息调控的机制,为后续的研究提供思路和借鉴。

慢性失眠障碍与促肾上腺皮质激素释放激素和皮质醇的相关性研究

目的:探讨成年人慢性失眠障碍(CID)与促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)和皮质醇(CORT)的相关性及其临床意义。方法:选取2021年8月至2022年2月云南省精神病医院收治的慢性失眠障碍患者50例作为观察组,同时期健康人群50例作为对照组,测定并比较2组间CRH、CORT、汉密尔顿抑郁量表-17(HAMD-17)、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)、匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)的差异,同时对50例观察组进行多导睡眠监测(PSG),比较观察组治疗前后PSG的变化,从而分析慢性失眠障碍与CRH、CORT的相关性。结果:观察组治疗前与对照组CRH、CORT水平及量表评分比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗前与治疗8周末CRH、CORT比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗前与治疗8周末PSG睡眠参数比较,总睡眠时间、睡眠效率、睡眠潜伏期、快速眼动(REM)时间、N1时间、N3时间及觉醒时间比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗前CRH、CORT与PSG睡眠参数中的部分指标有相关性。结论:CID患者CRH、CORT水平高于健康人群,失眠症状改善后,CRH及CORT接近正常水平。CID失眠症状的严重程度与CRH和CORT的增高有明显相关性。因此,下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的外周血CRH和CORT水平或许可以作为反映失眠症状严重程度的生物学指标。

早年心理创伤与促肾上腺皮质激素释放激素受体1型基因多态性对视觉空间记忆的影响

目的探讨早年创伤与促肾上腺皮质激素释放激素受体1型(CRHR1)基因多态性对工作记忆的影响。方法根据暴露于唐山大地震的情况将受试者分为婴儿期暴露组(n=176)、胎儿期暴露组(n=172)、对照组(n=187);胎儿期暴露组又分为孕早期(1~3个月,n=50)、孕中期(4~6个月,n=59)、孕晚期(7~9个月,n=63)。采用简易视觉空间记忆测验(BVMT-R)和霍普金斯词汇学习测验(HVLT-R)分析3组人群的工作记忆情况;提取受试者外周血中的DNA,采用荧光定量PCR方法分析CRHR1 rs242924和rs7209436基因多态性,采用两因素析因设计资料的方差分析方法分析影响工作记忆的因素(地震应激和基因分型)是否具有交互作用。结果胎儿期暴露组、婴儿期暴露组BVMT-R总分较对照组明显下降;CRHR1基因型分为A/T基因携带者和C基因携带者2组,C基因型携带者在婴儿期、胎儿期暴露组中的BVMT-R总分比对照组均明显降低[(22.5±8.1)分比(28.9±5.7)分,t=-4.231,P<0.01;(23.0±8.5)分比(28.9±5.7)分,t=-3.201,P<0.05];对照组C基因携带者的BVMT-R总分比A/T基因携带者升高[(28.9±5.7)分比(25.8±7.3)分,t=-2.215,P<0.05]。地震暴露组和基因型两因素交互作用于BVMT-R总分(F=4.028,P<0.05)。结论胎儿期和婴儿期遭受地震创伤对视觉空间记忆存在持续性的潜在影响;早年地震创伤与CRHR1易感基因型的交互作用可能是视觉空间记忆受损的主要原因。

应激大鼠下丘脑5一羟色胺1A受体活性与促肾上腺皮质激素释放因子表达的关系

目的：观察连续单一应激（SPS）前阻断大鼠5-羟色胺1A（5-HTlA）受体下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）表达的改变，初步探讨5-HTlA受体活性与CRF表达的关系。方法：将健康雄性Wistar大鼠分为对照组、模型组和阻断组，模型组和阻断组给予SPS。阻断组在给予SPS应激前使用5-HTlA受体阻断剂WAYl00635进行干预。采用免疫组织化学和逆转录聚合酶链式反应（Rrr_PcR）方法检测下丘脑CRF蛋白和mRNA的表达。结果：对照组、模型组和阻断组免疫阳性细胞吸光度分别为6．94±0．61、22．36±1．55和16．86±1．65，mRNA相对表达分别为0．72±0．07、2．08±0．06和1．16±0．1t，模型组高于对照组，阻断组低于模型组。结论：5-HTlA受体活性与下丘脑CRF表达有关。

促肾上腺皮质激素释放因子受体1在人脑胶质瘤中表达及其临床意义

目的探讨促肾上腺皮质激素释放因子受体1(CRFR1)在人脑胶质瘤中表达及其临床意义。方法随机收集35例临床手术切除胶质瘤组织标本及培养人类胶质母细胞瘤株U87,进行CRFR1免疫组化染色,以5例泌乳素垂体腺瘤组织标本作为阳性对照。检测胶质瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)表达。同时,分析CRFR1表达与临床病理因素之间的相关性。结果 CRFR1着色于肿瘤细胞膜,在不同类型、级别的脑胶质瘤中均有着色,且随肿瘤病理级别增高而表达增高,差异有统计学意义(P<0.05);胶质母细胞瘤中存在U87、CRFR1和PCNA高表达;CRFR1表达与患者KPS评分及PCNA表达有关。结论 CRFR1在胶质瘤细胞发生、增殖及侵袭性生长过程中可能扮演了重要角色,对胶质瘤恶性生物学特性的作用机制需要进一步探讨。

慢性应激通过增加齿状回的促肾上腺皮质激素释放因子减轻阿尔茨海默病样大鼠空间学习记忆损伤

目的:观察慢性应激(CS)对阿尔茨海默病(AD)样学习记忆损伤模型大鼠海马齿状回(DG)的促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)及其1型受体(CRFR1)的影响,并探讨CRFR1在CS引起的AD样模型大鼠空间学习和记忆能力改变中的作用。方法:雄性Wistar大鼠随机分为对照(CON)组、AD模型(AD)组和AD给予CS(AD+CS)组,每组7只。用侧脑室单次注射链脲佐菌素联合长期腹腔注射D-半乳糖(每天1次,共6周)的方法制备AD样学习记忆损伤模型大鼠;AD+CS组大鼠在D-半乳糖注射的后4周,每天随机给予一种应激原刺激。Morris水迷宫评估大鼠的空间学习和记忆能力;免疫组织化学染色观察海马Aβ_(1-42)的表达;ELISA检测DG区CRF的水平;Western blot法观察DG区CRFR1表达。之后,AD大鼠DG区注射CRFR1阻断剂R121919,观察其对CS条件下的AD样模型大鼠空间学习和记忆能力的影响。结果:与CON组比较,AD样模型大鼠的空间学习和记忆能力显著下降,且海马区Aβ_(1-42)沉积增多;而给予CS可缓解AD样模型大鼠的空间学习记忆障碍,减少海马Aβ_(1-42)沉积。与CON组比较,AD组大鼠DG区CRF水平和CRFR1表达均显著降低(P<0.05),而AD+CS大鼠DG区的CRF水平和CRFR1表达均显著高于AD组(P<0.05)。大鼠DG区微量注射R121919显著损伤CS条件下AD大鼠的空间学习和记忆能力(P<0.05)。结论:CS增加AD样模型大鼠DG区CRF水平,后者通过激活CRFR1减轻AD样模型大鼠的空间学习和记忆功能损伤。

促肾上腺皮质激素释放因子及相关肽对动物采食调控的研究进展

促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)是一种由下丘脑分泌的神经肽。早期,CRF被认为是介导应激反应的标志性脑肽,当其被注入啮齿动物的大脑时会引起应激反应。在急性应激情况下,动物大脑中的CRF信号通路被激活,进而影响其采食行为。由此可见,CRF及相关肽可能具有调控动物采食的作用。CRF及相关肽分布广泛,既存在于中枢,也存在于胃肠道等外周组织器官中。本文主要综述了中枢和外周CRF及相关肽调控动物采食的研究进展,为进一步研究和改善应激动物采食行为提供参考。

人促肾上腺皮质激素释放因子Ⅰ型受体EC1片段在原核系统中的可溶性表达

目的:研究人促肾上腺皮质激素释放因子Ⅰ型受体(hCRFR1)EC1区蛋白片段在原核表达系统中可溶性表达的影响因素。方法:以pcDNA3.1-hCRFR1全长质粒为模板,PCR扩增EC1区分别编码118和88个氨基酸残基(分别对应融合蛋白GST-EC1118和GST-EC188)的片段,将其插入pGEX-4T2载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导目标蛋白表达;采用GSTrap FF亲和纯化柱对目标蛋白进行纯化,并用Western印迹证实。结果:与GST-EC1118相比,GST-EC188可溶性表达增加,为下一步hCRFR1相关研究的开展奠定了基础。结论:hCRFR1的EC1区M1～N19及N108～V118两个片段影响该区域在原核系统中表达的可溶性,推测可能与富含疏水性氨基酸有关。

促肾上腺皮质激素释放激素受体在应激反应中的作用研究

促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)是应激反应中的关键调节因子,协调应激过程中内分泌、自主神经、免疫和行为反应。CRH的作用是由其受体所介导的。目前已知的CRH受体有CRH-R1、CRH-R2、CRH-R3 3种。应激时,CRH主要通过CRH-R1、CRH-R2产生一系列生理、病理效应。近年来通过对转基因动物、选择性CRH受体拮抗剂和特异性CRH受体激动剂等的应用,对CRH受体在应激中作用有了更深的了解,也进一步揭示了应激机制。

解郁1号对抑郁大鼠血浆促肾上腺皮质激素释放因子和皮质醇含量的影响

目的探讨以调理脾胃法组成的中药复方解郁1号对抑郁大鼠血浆促肾上腺皮质激素释放因子、皮质醇含量的影响。方法SD大鼠40只,按随机表随机分为正常组、模型组、阿米替林组、解郁1号12,6 g/(kg.d)剂量组,每组各8只。除正常组外,各组接受21 d长期慢性刺激,在造模同时即开始给药。各组动物末次造模结束后,采用旷场实验进行行为学评分;采用放射免疫法测定促肾上腺皮质激素释放因子、皮质醇含量。结果实验大鼠38只进入结果分析。①各组大鼠血浆皮质醇含量的变化:模型组与正常组比较,血浆皮质醇水平明显升高(P<0.01)。中药高、低剂量组、西药组,与模型组相比,明显降低,具有显著差异性(P<0.01),但三组之间相比较,均没有统计学意义(P(0.05)。②各组大鼠血浆促肾上腺皮质激素释放因子含量的变化:模型组大鼠血浆的促肾上腺皮质激素释放因子含量高于正常组(P<0.01);与模型组比较,中、西药治疗组促肾上腺皮质激素释放因子含量多明显降低(P<0.01);中、西药治疗组之间促肾上腺皮质激素释放因子含量比较未见显著性变化(P(0.05)。结论解郁1号具有抗抑郁作用,其作用机制可能通过调节下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA),来调节血浆内促肾上腺皮质激素释放因子、皮质醇水平,达到抗抑郁目的。

人胎盘促肾上腺皮质激素释放激素自身受体激活效应

目的了解剖宫产应激过程中人胎盘促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)及其受体CRH-R 1的差异表达。方法分别采用免疫组织化学技术L sAB法和原位杂交技术,观察先兆临产前人足月妊娠剖宫产正常胎盘CRH及其受体CRH-R 1的表达。结果8例正常妊娠胎盘组织切片4种靶目标CRH、CRH mRNA、CRH-R 1、CRH-R 1 mRNA表现为阳性或强阳性表达,而CRH-R 1、CRH-R 1 mRNA表达强度又分别强于CRH、CRH mRNA(P<0.01),CRH-R 1阳性表达的灰度值高于CRH(P<0.05)。结论人正常足月妊娠胎盘组织细胞在剖宫产应激过程中升高的CRH可能会刺激自身受体CRH-R 1表达,人正常足月妊娠胎盘组织细胞可能存在CRH自身受体激活效应。

肠易激综合症患者结肠组织中促肾上腺皮质激素释放因子受体表达的研究

目的检测肠易激综合症(IBS)患者结肠组织中促肾上腺皮质激素释放因子受体(CRFR)1及CRFR2的表达,探讨其与IBS发病的关系,从而为靶向治疗IBS提供依据。方法分别采集15例腹泻型IBS(D-IBS)患者、15例便秘型IBS(C-IBS)患者和10例正常健康人结肠组织标本,采用Elivision(TM)PLUS/HRP免疫组化染色方法和Western blot测定CRFR1、CRFR2在各组结肠组织中的蛋白表达。结果实验结果显示,正常对照组CRFR1和CRFR2免疫组化染色以浅黄色为主,分布范围局限,平均光密度值分别为(0.254±0.099)和(0.201±0.030);D-IBS组中CRFR1以深或棕黄色为主,分布范围较为广泛,平均光密度值为(0.384±0.048),显著高于C-IBS组(0.144±0.077)及正常对照组(P<0.01);C-IBS组中CRFR2染色以深或棕黄色为主,分布范围较为广泛,平均光密度值为(0.322±0.022),显著高于D-IBS组(0.162±0.023)(P<0.01)及正常对照组(P<0.05)。Western blot结果显示,D-IBS组CRFR1蛋白表达明显高于C-IBS组和正常对照组;C-IBS组CRFR2表达高于D-IBS组和正常对照组。结论不同亚型IBS患者其CRFR表达的亚型亦不同,提示不同亚型IBS的发生可能与患者结肠组织中CRFR1、CRFR2的表达水平有关。

促肾上腺皮质激素释放因子受体2在溃疡性结肠炎中的表达

目的观察促肾上腺皮质激素释放因子受体2(CRFR2)在溃疡性结肠炎(UC)中的表达情况,及其与细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、核因子-κB(NF-κB)p65和白细胞介素-6(IL-6)的关系,探讨其在UC中的作用。方法免疫组织化学法检测UC活动组30例、缓解组30例和30例正常对照组的结肠黏膜中CRFR2、ICAM-1、NF-κB p65的表达情况,ELISA方法检测各组血清中IL-6水平。结果 CRFR2在UC活动组肠黏膜组织中的表达明显高于缓解组和对照组(P<0.05),而在UC缓解组和对照组之间的表达差异无统计学意义(P>0.05)。CRFR2在肠黏膜组织中的表达与NF-κB p65、ICAM-1的表达及血清中IL-6水平具有明显相关性(P<0.05)。结论活动期UC患者的CRFR2的表达明显升高,提示其在UC发病中可能起促炎作用。

促肾上腺皮质激素释放因子Ⅰ型受体:抗抑郁药物的新靶标

抑郁和焦虑患者常伴随应激激素调节失常,这与下丘脑神经肽促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)和精氨酸加压素分泌过多密切相关。CRF主要通过激动促肾上腺皮质激素释放因子Ⅰ型(CRF1)受体诱导抑郁或焦虑样症状,众多研究表明CRF1受体是新型抗抑郁药的潜在靶标。目前已研发出很多基于此靶标的非肽类小分子化合物,但只有一部分进入临床试验,包括NBI-30775/R121919和NBI-34041等。值得注意的是,此类化合物显效与动物的应激水平和自身焦虑程度有关,即CRF1受体拮抗剂可在不影响下丘脑-垂体-肾上腺轴基础活性情况下对抗CRF介导的病理性应激反应,从而提示其副作用可能较低。总之,小分子CRF1受体拮抗剂可能成为治疗应激相关精神疾病的新方法。本文重点综述CRF1受体作为新靶标在抑郁症治疗中的潜在应用。