血小板生成素基因注射促血小板生成作用的实验研究

本文研究了 ＴＰＯ 基因注射法对健康小鼠血小板的促生成效果。将带有 ＴＰＯ ｃＤＮＡ 的ｐｃＤＮＡ３ 质粒按６０μｇ／只剂量注射到昆明小鼠后肢内侧肌肉内，每天断尾采血，对白细胞和血小板计数。一定时间内采股骨骨髓推片，计数单位面积内的巨核细胞数。以同期未注射的小鼠作为对照组。结果显示，在基因注入后的第三天起即出现血小板和巨核细胞增多。在所观察的三周内，血小板有一可持续一周的高水平期，平均约为同期对照的１８４％ ，最高可达三倍以上。计数高峰后血小板计数在高于对照水平上呈波动状态。小鼠脾脏出现以巨细胞增生和内皮细胞活化为特点的组织学变化，提示ＴＰＯ

电脉冲介导的Tpo基因转移对正常及实验性血小板减少小鼠的促血小板生成作用

目的 应用电脉冲介导的重组人血小板生成素 (rhTpo)基因的体内转移 ,探讨其对正常及实验性血小板减少小鼠的促血小板生成作用。方法 应用基因重组技术 ,构建真核细胞高表达质粒pcDI Tpo ,将 2 0 0 μgpcDI Tpo质粒注入正常及实验性血小板减少小鼠的股四头肌内 ,随后给予 10 0V、1Hz、40ms电刺激 6次 ,用RT PCR及Westernblot方法观察rhTpo基因在正常小鼠骨骼肌内的表达 ,ELISA法测定小鼠血浆Tpo水平。用细胞计数板计数小鼠外周血血小板。结果 成功构建了真核细胞高表达质粒pcDI Tpo。将pcDI Tpo转染小鼠后 ,在小鼠的骨骼肌内有rhTpomRNA及蛋白的表达 ,血浆Tpo水平由 (2 5 0± 76 )ng L升高至 (1185± 2 6 4)ng L。正常小鼠的外周血血小板由 (2 5 9± 2 7)× 10 9 L最高升高至 (6 40± 31)× 10 9 L ;注射卡铂后 ,转pcDI Tpo组小鼠的血小板最低下降至 (138± 2 4)× 10 9 L ,比转pcDI空载体组 [(98± 19)× 10 9 L]和单纯注射卡铂组 [(92± 16 )× 10 9 L]最低值高 ,同时血小板恢复时间提前 ,第 14天已恢复至 (2 38± 2 6 )× 10 9 L。结论 应用电脉冲介导的基因转移方法 ,可使rhTpo基因在小鼠骨骼肌内有效地表达 。