促黄体激素释放激素及其受体的研究进展

对促黄体激素释放激素及其受体的结构、分布、功能以及研究现状进行了阐述,归纳了促黄体激素释放激素的主要功能。促黄体激素释放激素及其类似物LHRH激动剂和拮抗剂临床上主要用于闭经的治疗、不孕症的诱发排卵治疗、子宫内膜异位症及妇科肿瘤等治疗。促黄体激素释放激素的结构和分布特点对于进一步研究促黄体激素释放激素及其类似物抑制肿瘤、导向传递药物治疗癌症方面有重要的意义。

促黄体激素释放激素及其靶向毒素

促黄体激素释放激素受体可以作为某些恶性肿瘤细胞的靶标。促黄体激素释放激素(LHRH)的结合位点在人乳腺癌、卵巢和子宫内膜肿瘤以及前列腺癌细胞的中均有较高表述,而在人的正常组织中少有表达,因此成为一种有效的恶性肿瘤特异性受体。LHRH重组毒素能有效抑制接种LHRH受体阳性肿瘤的裸鼠肿瘤生长。本文对LHRH及其受体和靶向毒素的研究进展作了较全面的综述。

促黄体激素释放激素修饰的甲氨蝶呤体内释放研究

目的研究促黄体激素释放激素修饰的甲氨蝶呤(LHRH-MTX)在模型动物体内释放MTX情况。方法建立HPLC的分析方法,经尾静脉注射给药,测定荷瘤裸鼠血液和组织中的药物浓度;与MTX制剂比较,评价LHRH-MTX在体内释放MTX情况。结果建立的HPLC分析方法回收率高于85%,日间和日内精密度(RSD)均小于10%,符合生物样品分析要求;静脉注射给药后,经统计学分析,与MTX制剂相比,LHRH-MTX释放的MTX在血浆、肝脏、肾脏的浓度有明显下降(P<0.05),而在肿瘤组织有明显提高(P<0.05)。结论所建立的HPLC用于LHRH-MTX体内释放研究结果良好,LHRH-MTX释药后MTX在体内的组织分布有明显的改变,在肿瘤部位有明显的浓集。

促黄体激素释放激素激动剂治疗术后卵巢巧克力囊肿的复发

本文报道了用促黄体激素释放激素激动剂(LHRH—A)治疗保守性及半根治术后卵巢巧克力囊肿复发14例,其有效率为92.86％,治愈率为85.71％,复发率是33.3％,用药后FSH、LH、E_2均下降,副作用比丹那唑轻,该药为不愿再次手术的病人提供一个可取的新途径。

中和抗体对促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A暴露水平的影响

目的研究恒河猴注射促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A(GP38)后体内中和抗体的产生及其对药物暴露水平的影响。方法恒河猴24只随机分成4组(即对照组、低、中、高剂量组),每组6只,♀♂各半,分别给予生理盐水、50、100、300μg.kg-1GP38;采用ELISA法测定GP38及抗体滴度,中和抗体的测定采用IC50法间接测定。结果恒河猴给药2 wk后产生抗体,具有中和GP38活性的作用;GP38首次静脉注射50、100、300μg.kg-1时,毒代动力学参数Cmax分别为(866±88)、(1466±113)、(5436±733)μg.L-1,AUC0-t分别为(322±33)、(587±93)、(2201±307)μg.h.L-1,MRT分别为(0.27±0.02)、(0.31±0.02)、(0.40±0.08)h;相同剂量反复给药,第7次(d 14)给药后的毒代动力学参数Cmax分别为(352±136)、(589±372)、(1013±642)μg.L-1,AUC0-t分别为(139±55、322±222)、(962±743)μg.h.L-1,MRT分别为(0.26±0.03)、(0.39±0.08)、(0.68±0.45)h;试验动物毒性反应在给药1～3 wk较严重,之后毒性反应逐渐减弱。结论恒河猴反复静脉注射GP38,能够产生中和抗体,降低药物的体内暴露水平。

促黄体激素释放激素类似物在肿瘤疾病中的应用

前列腺癌是男性癌症患者中最常见的疾病之一,对晚期前列腺癌症的治疗方法常见的是雄激素阻断疗法,而促黄体激素释放激素的发现为雄激素阻断疗法开辟了新的道路。本文综述了各类促黄体激素释放激素类似物在抗肿瘤方面的应用,并讨论其作用机制。

注射大剂量促黄体激素释放激素类似物后受孕大鼠垂体促性腺激素细胞的形态计量学分析

本文用特异的抗鼠促黄体激素(抗LH)血清,以PAP免疫组织化学法显示促性腺激素细胞(LH细胞),并用形态计量学方法研究注射大剂量促黄体激素释放激素类似物(LHRH-A)后,受孕大鼠促性腺激素细胞的数量、体积和核质比参数的变化。察表明注射大剂量LHRH-A后24小时,促性腺激素细胞的数目减少,细胞变小,核质比增大。每mm^(3)垂体组织中的细胞数由(4.254±0.21)×10^(4)个减少到(2.49±0.14)×10^(4)个;细胞体积由1295±35μm^(3)减到895±31μm^(3);核质比由0.144±0.005加大到0.229±0.010。注射后48小时,这些变化已经开始恢复。注射后168小时各参数均恢复。我们认为,注射大剂量LHRH-A后,受孕大鼠促性腺激素细胞的变化是由于外源性大剂量LHRH-A刺激促性腺激素细胞,使其释放大量LH,大剂量LHRH-A对促性腺激素细胞的影响是可恢复的。

注射大剂量促黄体激素释放激素类似物后受孕大鼠垂体促性腺激素细胞的免疫组织化学变化

本文用特异的抗鼠促黄体激素(抗LH)、抗鼠卵泡刺激素(抗FSH)和抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)血清,以PAP免疫组织化学方法,观察注射大剂量促黄体激素释放激素类似物(LHRH-A)后受孕大鼠垂体促性腺激素细胞的变化。注射后24 h,促性腺激素细胞的免疫组织化学反应明显减弱;注射后48 h,促性腺激素细胞的免疫组织化学反应开始恢复;注射后168 h,其恢复过程仍在进行。计数对照组和实验组不同免疫反应强度的LH细胞数和它们占LH细胞总数的百分数,并用统计学方法检验,发现其结果与上述一致。大剂量LHRH-A能刺激受孕大鼠垂体促性腺激素细胞释放大量LH,从而抑制卵巢合成孕酮的功能,并导致终止妊娠。本文支持这种看法,而且认为,这种对促性腺激素细胞分泌活动的影响是可以恢复的。

促黄体激素释放激素类似物治疗前列腺肿瘤的临床应用

目的探讨促黄体激素释放激素类似物治疗前列腺肿瘤的效果。方法随机将60例前列腺肿瘤患者分为2组,每组30例。观察组患者先接受雄激素阻断治疗,皮下注射促黄体激素释放激素类似物,使前列腺特异抗原（PSA）〈0.2 ng/m L,并且持续3~4个月,进入间歇期。当血清PSA〉0.2 ng/m L,重新进行治疗。对照组患者采用持续性雄激素阻断治疗。若患者发展成为激素非依赖性前列腺癌（AIPC）,则停止治疗。全程随访,观察有无不良反应发生。结果观察组患者平均随访时间为（32.7±4.9）个月,与对照组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。观察组发展成为AIPC的患者占40.0%,与对照组相比,差异具有统计学意义（P〈0.05）。观察组中位进展时间明显长于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论使用促黄体激素释放激素类似物间歇治疗前列腺肿瘤效果更好,可延长发展成AIPC时间,减少AIPC发生率,不良反应发生率更低。

促黄体激素释放激素-甲氨蝶呤的合成及抗肿瘤活性

目的:合成促黄体激素释放激素-甲氨蝶呤(LH-RH-MTX)并研究其抗肿瘤活性。方法:将APA与[D-Lys6]LH-RH共价连接合成LH-RH-MTX;用半制备型反相HPLC进行纯化与定量,用ESI-MS进行结构确证;应用MTT法检测其对人卵巢癌SKOV-3细胞的抗肿瘤活性。结果:LH-RH-MTX的纯度为98.00%,产率为61.96%;ESI-MS分析得产物分子量为1 268.15。MTT实验结果表明LH-RH-MTX对人卵巢癌SKOV-3细胞具有明显的抗肿瘤活性。结论:LH-RH-MTX可与表达有LH-RH受体的肿瘤细胞特异性结合并发挥作用,作用优于游离MTX。

促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A与胃癌细胞受体结合竞争的研究

目的探讨重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A(LHRH-PE40)在胃癌细胞及正常细胞是否存在相应受体表达及存在竞争性抑制。方法将胃癌细胞系BGC-823及正常人肾细胞系293制备成细胞膜,利用125I标记的LHRH-PE40与两种细胞膜进行放射性配基分析, 以及与LHRH竞争结合分析。结果人肾细胞系293未见配基-受体特异性结合;而人胃癌细胞系 BGC-823的结合竞争符合特异性配基-受体结合、竞争。BGC-823细胞亲和力:Kd=(37．82±1．42) nmol／L,容量Bmax=475．00±17．86 pmol／mg。结论 LHRH是胃癌免疫治疗的有效靶点,LHRH- PE40对过度表达LHRH受体的胃癌均具有特异有效的抗肿瘤活性。

抗促黄体激素释放激素受体单克隆抗体对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨抗促黄体激素释放激素受体(luteinizing hormone-releasing hormone receptor,LHRHR)单克隆抗体4F3B10对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖及凋亡的影响。方法利用半定量RT-PCR分析Ishikawa细胞中LHRHR基因m RNA的转录水平,以β2-M基因为内参标准,通过光密度定量扫描比较确定LHRHR基因量。采用CCK-8法检测4F3B10对Ishikawa细胞增殖的影响;利用Annexin V-FITC/PI双染,在流式细胞仪上检测4F3B10对Ishikawa细胞凋亡的影响。结果 Ishikawa细胞中LHRHR的基因量约为内参的67.23%。4F3B10对Ishikawa细胞的增殖具有抑制作用,且呈剂量依赖性;经半数抑制浓度的4F3B10作用Ishikawa细胞48 h后,细胞凋亡率较未经4F3B10作用的细胞显著升高(P<0.05)。结论 4F3B10可有效抑制Ishikawa细胞增殖,并可诱导其凋亡。

重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白Ⅰ期人体耐受性临床研究

目的:考察人体对冻干重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白(lyophilizedrecombinant human luteinizing hormone releasing hormone-exotoxin of pseudomonas aeruginosa fusion protein,简称LHRH-PE40)的耐受性、最大耐受剂量(MTD)和药代动力学特点,以及人体对LHRH-PE40产生抗体的规律,并初步观察LHRH-PE40的抗肿瘤活性。方法:LHRH-PE40经静脉输注给药。单次给药试验共10例患者接受单剂LHRH-PE40治疗,剂量范围为220～1 110μg.m-2。每日给药试验14例患者接受LHRH-PE40输注每日1次,连用14 d,剂量范围120～600μg.m-2;隔日给药试验共7例患者接受LHRH-PE40输注隔日1次,共14次,剂量为600和700μg.m-2。结果:每日给药方法的MTD为400μg.m-2,剂量限制性毒性为乏力、食欲下降和肾功能损害。肾功能损害为一过性和可逆的。隔日给药方法的MTD为600μg.m-2。在MTD剂量时,LHRH-PE40的一般不良反应包括乏力、食欲下降、疼痛、发热、头疼头晕、过敏反应、恶心/呕吐、胃黏膜炎、手足麻木和心悸,大多为1/2度。对肝功能影响较小,对血液学无抑制作用。机体存在对LHRH-PE40的基础抗体,滴度23～25,治疗后抗体滴度可上升至210～212。1例卵巢癌患者CA125下降了620 U.mL-1。结论:在MTD剂量时,LHRH-PE40的不良反应温和可控。对卵巢癌可能有一定的抗肿瘤活性,值得进一步研究。Ib和Ⅱ期研究中应考察抗体对疗效和药代动力学的影响。

大剂量促黄体素释放激素九肽类似物对受孕大鼠黄体影响的组织学和组织化学观察

本文应用大剂量LRH-A给受孕9d大鼠做腹部皮下注射,观察大鼠黄体的组织学和组织化学变化。给药后24h,观察到黄体退化。油红O染色标本的黄体细胞质内,出现大脂滴,数量很多;3β-HSD酶和SDH酶活性明显下降;少数黄体细胞AcP酶活性增强。48h后,上述变化更加明显,G-6-PD酶活性也有下降。20α-HSD酶活性在对照组与实验组,均为阴性。黄体的毛细血管内皮细胞AlP酶活性,在给药后24h明显升高。提示大剂量LRH-A促使黄体退化,孕酮的合成和分泌功能降低,是造成大鼠在受孕9d全部中止妊娠的主要原因。

促黄体激素释放激素-TAT-p53融合蛋白制备及其对肿瘤细胞增殖作用的影响

目的制备促黄体激素释放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH)-TAT-p53融合蛋白,探讨其抗肿瘤作用。方法以重组质粒pET28a-p53为模板,经PCR扩增目的基因,双酶切,克隆至原核表达载体p ET20b中,构建重组表达质粒p ET20b-LHRH-TAT-p53,并在E. coli中IPTG诱导表达,经金属螯合层析、DEAE弱阴离子交换层析纯化目的蛋白。取对数生长期的HeLa、BGC及MDCK细胞进行细胞活性试验,检测pET28a-p53蛋白活性。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pET20b-LHRH-TAT-p53构建正确;融合蛋白相对分子质量约54 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白55%;HeLa及BGC细胞加入纯化复性的重组蛋白后,细胞变圆、色暗、折光性变差,甚至裂解死亡,细胞死亡数增加,而MDCK细胞无变化;一定浓度范围内(25~120μg/m L)蛋白对HeLa及BGC细胞有明显的抑制作用。结论成功制备了LHRH-TAT-p53融合蛋白,该蛋白具有生物活性,对肿瘤细胞有杀伤作用。本研究为下一步制备靶向LHRH的肿瘤治疗药物提供了参考。

探讨促黄体生成素释放激素类似物治疗前列腺肿瘤的效果观察

目的:观察前列腺肿瘤患者采取促黄体生成素释放激素类似物治疗效果分析。方法:选取前列腺肿瘤诊断患者45例,对照组22例试验组23例。对照组采用手术去势加用雄激素受体拮抗剂口服治疗,试验组在对照组基础上采用雄激素受体拮抗剂联合皮下注射促黄体生成素释放激素类似物治疗。完成治疗后3年随访。对比两组患者治疗时间、中位进展时间、激素非依赖性前列腺癌发生率及不良反应率。结果:试验组中位进展时间明显长于对照组,试验组激素非依赖性前列腺癌发生率为4. 35%,不良反应发生率为13. 04%,而对照组分别为40. 91%、45. 46%,差异有统计学意义(P <0. 001)。结论:前列腺肿瘤患者采取促黄体生成素释放激素类似物治疗,可降低激素非依赖性前列腺癌发生率及不良反应率。

促黄体生成激素释放激素拮抗类似物的分离纯化研究

目的采用高效液相色谱(HPLC)法分离纯化促黄体生成激素释放激素(LHRH)拮抗类似物。方法制备型色谱柱为Dynamax-300A型C18柱(250mm×4.14mm,5μm),分析型色谱柱为Nucleosil型C18柱(250mm×5mm,5μm);流动相A为含0.1%三氟醋酸和3%乙腈的水溶液(pH=2),流动相B为含70%乙腈的水溶液;流速为40mL/min(用于分离)和1.2mL/min(用于分析);检测波长为220nm。结果LHRH拮抗类似物纯品的产率可达22%～52%,纯度高达97%～99%,分离度大于1.5。结论HPLC法分离纯化的LHRH拮抗类似物纯品产率大,纯度高,且该法操作简便、快捷。

重组人促性腺激素-铜绿假单胞菌外毒素A蛋白的可溶性表达、纯化和对肿瘤细胞的抑制活性

以人促性腺激素-铜绿假单胞菌外毒素A衍生物(GnRH-PE39KDEL)为研究对象,根据大肠杆菌密码子偏好性优化,通过基因合成的方法获得重组蛋白核酸序列,连接至pET-24b载体中,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)及BL21(DE3)plyS中进行诱导表达。结果显示,在含有2 mg/mL葡萄糖的LB培养基中37℃培养至OD600约为0.6 h,加入0.2 mmol/L IPTG在30℃诱导2 h后,重组蛋白可以实现可溶性高表达。工程菌经超声波破碎、高速离心后,经镍柱纯化和脱盐后得到重组蛋白,蛋白纯度达到95%以上,蛋白最终得率在2.6 mg/g菌体。重组蛋白经IC50检测,可以较好地抑制肿瘤细胞株的生长。

潜在性高催乳素血症对促性腺激素水平的影响

对125例基础血清催乳素(PRL)正常但无排卵的患者,行促黄体生成激素释放激素(LHRH)负荷试验,分为潜在性高催乳素血症组(A组,34例)和非潜在性高催乳素血症组(B组,91例)。试验前A组血清黄体生成素(LH)/促卵泡素(FSH)为1.7±0.4,B组为0.8±0.5,两组比较,P<0.05;LHRH负荷试验后A组血清LH值为(72.4±21.6)IU/L,B组为(39.5±16.3)IU/L,两组比较,P<0.05。A组LHRH负荷试验前后血清PRL与FSH关系:试验前r=-0.245,t=-2.232,P<0.05;试验后r=-0.283,t=-2.606,P<0.05。A组试验前后血清PRL与FSH均呈负相关。认为潜在性高催乳素血症(OHP)包含着高LH排卵障碍,OHP与多囊卵巢综合征(PCOS)有关。微量PRL升高可抑制FSH分泌。

外源激素对花鲈(Lateolabrax japonicus)血清IGF-1含量及肝脏IGF-1和IGFBP-1 mRNA表达的影响

对花鲈(Lateolabrax japonicas)成鱼腹腔注射促黄体激素释放激素类似物(LHRH-A3)和人体绒毛膜促性腺激素(HCG),利用放射性免疫激素测定方法(RIA)检测了花鲈血清中类胰岛素生长因子(Insulin-like growth factor 1,IGF-1)在注射后6、12、24、48 h内的变化情况,同时还利用荧光实时定量PCR技术检测了花鲈肝脏中IGF-1和类胰岛素生长因子结合蛋白1(Insulin-like growth factor-binding protein 1,IGFBP-1)mRNA的相对表达量的变化情况。结果表明,注射LHRH-A3的花鲈血清中IGF-1的含量在24 h后出现了明显的降低(P<0.05),而花鲈肝脏中IGF-1 mRNA的相对表达量在注射6 h后较对照组明显升高(P<0.05),而肝脏中IGFBP-1 mRNA的相对表达量则呈现下降趋势。注射HCG的花鲈血清中IGF-1的含量在注射后12 h出现了明显降低(P<0.05),24 h后血清中IGF-1含量持续降低。肝脏中IGF-1 mRNA的相对表达量在注射后的24 h内均保持稳定,而在处理后的48 h出现了显著上升(P<0.05)。肝脏中IGFBP-1 mRNA的相对表达量在注射后12h检测到显著升高(P<0.05)。研究结果表明,LHRH-A3和HCG均可以通过直接或间接的刺激作用来触发花鲈IGF系统的应答反应,但是其中具体机制尚不明了。