B型肉毒毒素保护性抗原Hc在大肠杆菌中的可溶性高表达

目的:通过序列优化及表达条件改进,在大肠杆菌中高效可溶性表达B型肉毒毒素保护性抗原Hc(Bont/B-Hc)。方法:对Bont/B-Hc基因片段优化,用大肠杆菌常用密码子替换稀有密码子,并将(G+C)含量由76.2%降至56.3%;人工合成多条具有重叠互补序列的寡核苷酸片段,采用重叠延伸PCR方法获得了Bont/B-Hc的全长基因,并构建了原核可溶性表达载体;将经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导Bont/B-Hc的表达并进行纯化及Western印迹鉴定。结果和结论:目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了可溶性高表达,占菌体裂解液上清总蛋白的26.7%,表达量达到30mg/L,是目前国内外已知表达的最高水平;经Ni柱一步纯化后,目的蛋白纯度可达到80.3%,为肉毒毒素中和抗体的制备及亚单位疫苗的研究奠定了基础。