双环醇抗病毒与保护肝细胞作用的动态观察和分析

目的:探讨双环醇抗病毒机制,为进一步研究和开发双环醇打下理论基础。方法:通过2.2.15细胞与双环醇混合培养,观察血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清门冬氨酸氨基转移酶(AST)用药后与HBsAg,HBeAg,乙型肝炎病毒中DNA(HBV-DNA)之间的动态变化,定量逆转录PCR(RT-PCR)观察STAT-1变化;临床实验中,患者口服双环醇,每2周观察血清HBV-DNA与ALT,AST动态变化。结果:细胞模型实验中,随着双环醇与2.2.15细胞混合培养时间延长,HBsAg,HBV-DNA滴度逐渐降低,而培养上清ALT,AST无明显变化,细胞内稳定高水平表达STAT-1的mRNA;临床实验发现,以干扰素α为对照,患者血清ALT,AST可以随着HBV-DNA水平降低而下降,但未发现患者血清ALT,AST有一过性升高。结论:双环醇在发挥肝细胞保护作用的同时,还可能通过非细胞溶解性机制清除乙型肝炎病毒。

龙柴方提取液及其含药血清对CCL_4诱导肝细胞损伤保护作用的研究

目的:探讨龙柴方提取液及其含药血清对CCL4诱导肝细胞损伤保护作用。方法:培养L-02型肝细胞,12h后用四氯化碳(CCL4)体外诱导肝细胞损伤,分为正常模型对照组、7组不同浓度龙柴方药液组和正常对照组,继续培养12h,MTT检测各组细胞存活力;同时,诱导肝细胞损伤模型制成后,分为CCL4模型组、正常血清对照组、龙柴方血清组、益肝灵血清组,继续培养12h,MTT检测细胞各组存活力。结果:CCL4模型组及各药液组细胞OD值均低于正常对照组(P<0.01),除龙柴方最高浓度组低于模型组外(P>0.05),其余6药液组细胞OD值均高于CCL4模型组;龙柴方血清组及益肝灵血清组细胞OD值明显高于CCL4模型组和正常血清组(P<0.05),以龙柴方血清组效果为优。结论:龙柴方提取液具有抗肝细胞损伤和促进肝细胞生长的药理作用。

一氧化氮和cGMP参与神经降压素的肝细胞保护作用

本工作在原代培养的小鼠肝细胞上观察了一氧化氮（NO）、cGMP和CAMP的变化与神经降压素肝细胞保护作用之间的关系。结果如下：向培养液中加入酪氨酚（20mmol／L）12h后，GOT和GPT漏出明显增加；在加醋氢酚之前给予神经降压素（10-7mol／L）则使转氨酶漏出明显减轻。给予NO合成酶阻断剂L－NAME可完全阻断神经降压素的保护作用。神经降压素使肝细胞内cGMP含量显著增加，但对cAMP含量无明显影响。结果表明，神经降压素的肝细胞保护作用是由NO介导的，且与cGMP有一定关系。

白细胞介素-1β对醋氨酚诱导的小鼠肝损伤具有保护作用

在酪氨酸诱导的小鼠肝损伤模型上观察到50000U／kg的白细胞介素-1β（IL－1β），分别提前1，6和12h腹腔注射，可不同程度地降低GPT和GOT漏出，其中以提前12h的效果最强，而在给予醋氨酸之后1h再注射此素则无效。在提前12h这一时间点观察不同剂量（1000，30000，50000U/kg）IL－1β作用的结果表明，IL－1β抑制酪氨酚诱导的转氨酶漏出呈一定的剂量-效应关系，这三个剂量还可不同程度地降低小鼠死亡率。IL-1β受体拮抗剂可阻断IL－1β的保护作用。对IL－1β肝细胞保护作用机制的初步分析表明，IL-1β可增加正常肝细胞还原型谷胱甘肽（GSH）含量并阻止醋氨酸诱导的GSH含量的降低和氧化型谷优甘肽（GSSG）的增加，此外还可降低酪氨酚诱导的肝脏丙二醛（Malondiadehyde，MDA）含量的增加。结果表明，IL-1β可预防酪氨酸诱导的肝损伤，可能由IL－1β受体所介导，可能与增加谷胱甘肽合成和降低肝脏脂质过氧化有关。

IL-1β对离体培养的醋氨酚损伤的小鼠肝细胞的保护作用及其机制的初步探讨

ＩＬ－１β对醋氨酚（ＡＡＰ）引起小鼠在体肝脏的损伤具有保护作用，本工作旨在观察ＩＬ－１β抗肝损伤效应是直接作用于肝细胞发挥的还是通过其它途径间接发挥的，探讨ＩＬ－１β抗肝损伤作用的传递机制。方法向无血清培养２４小时的原代肝细胞加人２０ｍＭｏｌ／Ｌ的ＡＡＰ，在加醋氨酚前６０ｍｉｎ和ｓｏｗｉｎ，向不同组分别加人ＩＬ－１β和／或Ｌ－ＮＡＭＥ（Ｎ－ｎｉｔｒｏ－Ｌ－ａｒｇｉｎｉｎｅｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ）。加ＡＡＰ后继续培养一段时间，测培养液中ＡＬＴ和ＡＳＴ的活性及肝细胞内ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ的含量。结果ＩＬ－１β可完全抑制醋氨酚引起的肝细胞培养液中ＡＬＴ、ＡＳＴ的升高，不能逆转醋氨酚引起的肝细胞内ｃＡＭＰ含量的降低，但与正常组相比，ＩＬ－１β可提高正常肝细胞内ＣＧＭＰ的含量（Ｐ＜０．０５）和醋氨酚损伤组的肝细胞内ｃＧＭＰ的含量（Ｐ＜０．０１）。加人ＮＯ合酶抑制剂Ｌ－ＮＡＭＥ可抑制ＩＬ－１肝细胞保护作用。结论ＩＬ－１β对肝细胞有直接的保护作用，其可能是一种有效的肝保护剂。这种保护可能与ＩＬ－１β引起的肝细胞内ＮＯ、ｃＧＭＰ改变有关。

解酒口服液对酒精性肝损伤肝细胞保护作用的激光共聚焦显微镜分析

目的：探讨酒精性肝损伤肝细胞形态与功能变化的特征，以及中药对酒精性肝损伤的防护作用机理。方法：首次采用激光共聚焦扫描显微分析技术，对灌胃二锅头白酒复制的大鼠酒精性肝损伤模型进行了肝细胞形态、肝细胞内ＤＮＡ 与ＲＮＡ 含量变化分析。结果：灌胃白酒可导致严重的肝细胞代谢及形态异常，细胞内ＤＮＡ 和ＲＮＡ 代谢性损害，细胞平均周长、面积均显著大于正常状态，呈现为肝细胞肿胀，甚至肝细胞死亡。解酒口服液对酒精所致的上述形态与功能改变有显著的良好影响。

神经降压素的肝细胞保护作用与Ca^（2＋）的关系

观察了神经降压素（ＮＴ）的肝细胞保护作用与Ｃａ２＋的关系。结果显示，醋氨酚使肝细胞Ｃａ２＋内流和肝脏钙含量增加，但对于线粒体Ｃａ２＋摄取及其钙含量无明显影响，表明细胞可能出现胞质Ｃａ２＋超载。若在醋氨酚之前给予ＮＴ则使肝细胞Ｃａ２＋内流明显减少，肝脏Ｃａ２＋含量有降低趋势，但线粒体钙含量显著增加。这些结果提示，ＮＴ通过减少Ｃａ２＋内流，增强线粒体贮存Ｃａ２＋的能力，部分缓解醋氨酚所致胞质Ｃａ２＋超载从而减轻细胞损伤。

多药耐药与肝细胞保护的研究进展

正常细胞表达多药耐药转运蛋白,从而表现出多药耐药的特性。细胞保护是指在不利因素下细胞对自身的保护能力。细胞保护除了需要增加有利因素外,减少细胞内的有害因素也是一个有效手段,多药耐药就是其中一个重要的因素。引起多药耐药的ABC转运蛋白在正常细胞中存在广泛的表达,尤其是排泄器官如肝、肾、肠道等,表明其作为防止药物渗透的屏障及在药物消除机制中的重要作用;肝细胞主要表达ABC(ATP-binding cassette)转运蛋白超家族中的P-糖蛋白(P-gp)及多药耐药相关蛋白(MRP)1,2,3,6。本文通过对相关研究进展的分析,从多个方面阐述了多药耐药与细胞保护,尤其是肝细胞保护的关系,从而为疾病的预防和治疗提供新的思路。

氧化苦参碱对四氯化碳损伤大鼠肝细胞的保护作用

目的 :研究氧化苦参碱对肝细胞的保护作用。方法 :采用原代肝细胞培养的方法 ,选用CCl430mmol/L制备肝损伤模型 ,同时加以不同浓度的氧化苦参碱以保护肝细胞 ,培养 12h后以MTT法测细胞存活率 ,并测定培养基中AST、ALT、LDH。结果 :氧化苦参碱对肝细胞的保护呈剂量依赖性 ,氧化苦参碱组细胞存活率明显高于CCl4损伤组 (98.3% /3.2 % ,P <0 .0 5 ) ;其AST、ALT、LDH较CCl4损伤组明显降低 (依次为 6 .13± 0 .4 4 /896 .87±13.2 3、2 1.5± 0 .76 /15 0 2 .13± 35 .80、19.5± 0 .6 8/2 87.38± 5 .79,均P <0 .0 5 )。结论 :氧化苦参碱对CCl4损伤的肝细胞具较好的保护作用 ,存在最佳剂量性关系。

芦丁对肝细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制

目的:探讨芦丁对肝癌HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用,并阐明其作用机制。方法:培养人肝癌HepG2细胞,取处于对数生长期的HepG2细胞分为对照组、叔丁基过氧化氢(TBHP)组(给予400μmol·L^-1TBHP)和0.25、0.50、1.00μmolL^-1芦丁组(给予0.25、0.50和1.00μmol·L^-1芦丁+400μmol·L^-1 TBHP)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组HepG2细胞活性和各组肝癌HepG2细胞存活率,比色法检测各组肝癌HepG2细胞中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用二氯荧光素乙酰乙酸盐(DCFH-DA)荧光染色法检测各组肝癌HepG2细胞中活性氧(ROS)水平,Western blotting法检测各组肝癌HepG2细胞中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化AktB(p-Akt)、核转录因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)和p53蛋白表达水平。结果:MTT检测,芦丁摩尔浓度≤1μmol·L^-1时,肝癌HepG2细胞的存活率均>90%,不显示细胞毒性;当芦丁摩尔浓度>1μmol·L^-1时,肝癌HepG2细胞存活率逐渐降低,均<90%,显示细胞毒性。与对照组比较,TBHP组HepG2细胞存活率明显降低(P<0.01);与TBHP组比较,不同浓度芦丁组HepG2细胞存活率明显升高(P<0.01)。比色法检测,与对照组比较,TBHP组肝癌HepG2细胞中MDA水平明显升高(P<0.01),GSH水平和SOD活性明显降低(P<0.01);与TBHP组比较,不同浓度芦丁组肝癌HepG2细胞中MDA水平明显降低(P<0.01),GSH水平和SOD活性明显升高(P<0.01)。DCFH-DA染色,与对照组比较,TBHP组肝癌HepG2细胞中ROS水平明显升高;与TBHP组比较,不同浓度芦丁组肝癌HepG2细胞中ROS水平降低。Western blotting法检测,与对照组比较,TBHP组肝癌HepG2细胞中PI3K、p-PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达水平降低(P<0.05),NF-κB、p-NF-κB和p53蛋白表达水平升高(P<0.05);与TBHP组比较,不同浓度芦丁组肝癌HepG2细胞中PI3K、p-PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达水平升高(P<0.05),NF-κB、p-NF-κB和p53蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:芦丁对肝癌HepG2细胞损伤具有保护作用,其机制可能与调控PI3K/Akt和NF-κB两条信号通路有关联。

茺蔚子中木脂素类化学成分及肝细胞保护作用研究

研究益母草Leonurus japonicus Houtt.果实茺蔚子中木脂素类化学成分及其肝细胞保护活性和作用机制。采用大孔吸附树脂、硅胶、HW-40F凝胶柱色谱及半制备液相色谱等对茺蔚子正丁醇提取部位进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定化合物结构。本文从茺蔚子正丁醇提取部位分离鉴定了8个木脂素类化合物,分别为(+)-异落叶松脂醇-9′-O-β-D-葡萄糖苷(1)、(-)-异落叶松脂醇-9′-O-β-D-葡萄糖苷(2)、马先蒿木脂素(3)、(-)-异落叶松脂醇-4-O-β-D-葡萄糖苷(4)、异落叶松脂素(5)、phyllanglaucin B(6)、(-)-7 R,8 S-7′,8′-二羟基-二氢脱氢松柏醇-9-O-β-D-葡萄糖苷(7)、(+)-7 S,8 R-7′,8′-二羟基-二氢脱氢松柏醇-9-O-β-D-葡萄糖苷(8),化合物1~8均为首次从茺蔚子中分离得到。其次,采用MTT法考察化合物对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的HL-7702肝细胞损伤的保护作用,结果表明化合物1和3可显著提高APAP诱导肝细胞损伤的存活率;进而,采用Hoechst 33342荧光染色法和Western blot法观察活性最好的化合物3对细胞凋亡以及Bcl-2和Bax蛋白表达水平的影响。结果显示,与模型组相比,化合物3可使细胞核致密浓染现象变少,凋亡小体减少,同时明显促进Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达,并升高Bcl-2/Bax比值,表明化合物3的作用机制与调节Bcl-2和Bax蛋白表达量,抑制细胞凋亡有关。

茺蔚子中苷类成分及其肝细胞保护作用研究

目的 研究茺蔚子Leonuri Fructus化学成分及其肝细胞保护作用。方法 对茺蔚子正丁醇提取物采用大孔吸附树脂、HW-40F凝胶以及半制备液相色谱进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用对乙酰氨基酚(APAP)所致HL-7702细胞损伤模型评价其肝细胞保护作用。结果 从中分离得到7个苷类,分别鉴定为β-苯乙醇葡萄糖苷(1)、darendoside B(2)、肉苁蓉苷E(3)、肉苁蓉苷G(4)、熊果苷(5)、2-O-β-葡萄糖基-5-甲氧基-苯甲酸甲酯(6)、对羟基苯甲酰基熊果苷(7)。其中化合物4、5具有肝细胞保护作用,其EC_(50)值分别为(35.71±6.26)、(6.66±0.79)μmol/L。结论 化合物2、4~7均为首次从该植物中分离得到,化合物4、5均具有显著的肝细胞保护作用。

川芎嗪对肝纤维化大鼠肝细胞线粒体脂质过氧化的保护作用

目的:观察川芎嗪对肝纤维化大鼠肝细胞线粒体脂质过氧化的保护作用。方法:50只大鼠随机分为正常组,模型组,川芎嗪低、中、高剂量组,采用50%CCl4和橄榄油进行肝纤维化造模,同时给予川芎嗪治疗。造模和治疗结束后,颈总动脉取血,观察川芎嗪对大鼠血清中碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的影响,同时分离肝细胞线粒体,观察川芎嗪对线粒体丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)、Na-K+-ATP酶(Na-K+-ATPase)和Ca2+-ATP酶(Ca2+-ATPase)的活性及线粒体膜流动性的影响。结果:模型组大鼠血清ALT、AST、ALP水平显著升高,线粒体中MDA含量升高,而SOD、Na-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶的活性降低,与正常组相比具有统计学意义,而川芎嗪可以有效的逆转以上各项指标,且具有剂量依赖性,其结果具有统计学意义。结论:川芎嗪可以减轻肝细胞线粒体的脂质过氧化,稳定线粒体膜的流动性,从而减轻肝纤维化的进程。

肝门阻断时经脐静脉输注肝细胞保护液减轻肝损伤的研究

目的探讨肝门阻断时经脐静脉输注肝细胞保护液减轻肝损伤的临床疗效。方法从行肝门阻断治疗的68例患者中按入院编号随机选取34例设为对照组,采用常规护肝治疗,将另外34例患者设为观察组,采用经脐静脉输注肝细胞保护液治疗。对比观察组和对照组患者治疗后肝功能状况。结果术后3 d,观察组患者ALT水平与对照组相比明显较低(P<0.05)。术后7 d观察组患者CHE水平明显与对照组相比明显较高,AST、ALT水平与对照组相比明显较低(P<0.05)。结论肝门阻断时采用经脐静脉输注肝细胞保护液能有效保护肝功能状况,减轻肝损伤,可大力推广应用。

维拉帕米和1，6二磷酸果糖对胆管结扎大鼠肝细胞保护作用

目的 观察维拉帕米和1，6二磷酸果糖对胆管结扎大鼠肝细胞的保护作用。方法 32只大鼠随机分成假手术组，模型对照组，维拉帕米治疗组和1，6二磷酸果糖治疗组。除假手术组外，蓁3组均做胆总管结扎，切断，并给予不同药物治疗7d，术后第8天取血做生化检查，取肝做光，电镜检查。结果 与假手术组比较，其余3组动物ALT，ALP，TB，DB明显升高（P<0.01)；3组的肝脏组织学亦有明显病理改变。用维拉帕米和1，6二磷酸果糖治疗后的生化指标与模型对照组比较明显改善，差别有显著性（P<0.01)；2组的肝脏组织学变化亦轻于模型对照组，1，6二磷酸果糖组与维拉帕米组比较，ALT和ALP两项无显著差别（P>0.05)，TB和DB两项差别显著（P<0.05)，1，6二磷酸果糖组的肝脏组织学变化轻于维拉帕米组。结论 1，6二磷酸果糖和维拉帕米对胆管结扎大鼠肝细胞均有保护作用，1，6二磷酸果糖稍强。

四逆散对非酒精性脂肪性肝炎大鼠的肝保护作用研究

目的:研究四逆散对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠的肝保护作用。方法:采用高脂饮食喂饲12周制备NASH大鼠模型。自第9周起,给予四逆散灌胃治疗共4周。检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、葡萄糖(GLU)和空腹胰岛素(INS)等指标。测量肝质量、计算肝指数,采用HE染色观察肝组织形态学变化。结果:高脂饲料喂养12周,大鼠血清TC、LDL和GLU水平、ALT和AST的活性及胰岛素抵抗指数(IR)均有升高,肝指数增高,肝细胞肿胀、胞浆内有大小不等、数量不一的的脂滴空泡,汇管区有炎细胞浸润。经四逆散治疗后,明显降低了血清TC、LDL、GLU、IR水平和ALT和AST活性,肝指数明显降低,肝组织内炎症和脂肪变均有明显的改善。结论:四逆散可通过纠正脂代谢紊乱、改善胰岛素抵抗、保护肝细胞等途径,对NASH发挥治疗作用。

天麻水煎剂对醋氨酚致肝损伤的保护作用

目的 验证天麻水煎剂是否具有肝保护作用。方法 腹腔注射天麻水煎剂对小白鼠肝脏进行保护 ,然后给小鼠腹腔注射醋氨酚 30 0mg/kg鼠重致肝损伤 ,再测定sGPT ,同时制作肝组织切片 ,以上结果分别与对照组或单纯损伤组相对比。结果 天麻水煎剂可以明显抑制醋氨酚引起的sGPT升高 ,同时保护组肝组织的病理损伤也明显减轻。