心肌缺血再灌注对肝脏CYP酶系统的影响

目的：CYP酶活性可为不同病理生理因素所调节。近年已有文献表明肝脏缺血再灌注对肝CYP酶系统的影响，而心肌缺血再灌注情况下，肝脏药物代谢酶的改变如何，少有报道。本文拟以临床上与药物代谢相关的主要CYP——CYP3A、2El、2B1／2作为靶标，研究心肌缺血再灌注时肝脏CYP酶活性及mRNA水平的改变。方法：雄性SD大鼠随机分成5组：假手术组，心肌缺血40min组，心肌缺血／再灌注15min组、60min组和180min组。于上述不同时间点取肝组织，RT-PCR法测定CYP2B1／2、2El、3A1 mRNA的表达；并同时制备肝脏微粒体，以红霉素、苯胺、戊氧基9-羟基异吩噻唑为底物，分别检测CYP3A、2El、2B1／2水平。结果：与假手术组比较，CYP3AlmRNA于再灌注15min即开始下降，在15min至180min期间降低范围为45．1％～63．2％（P〈0．05；P〈0．01）；CYP2ElmRNA则在60min～180min改变明显，降低45．3％～49．7％（P〈0．05；P〈0．01）；CYP2B1／2 mRNA表达无明显变化。CYP3A、2El活力在再灌注60min前有下降趋势，但与假手术组相比无显著性差异，二者于再灌注180min明显降低，分别下降34.0％、26.4％（P〈0.05）；心肌缺血再灌注对CYP2B1／2无明显影响。结论：心肌缺血再灌注损伤所导致肝脏药物代谢酶表达及活性的降低呈现亚型依赖性和时间依赖性特征，其中，以CYP3A亚型下降最为明显。该实验结果具有较明显的临床意义。

吲哚-3-原醇对肝星状细胞凋亡及细胞周期的影响

目的：研究吲哚-3-原醇（13C）对肝星状细胞（HSC）凋亡及细胞周期的影响及其机制。方法：培养永生化肝星状细胞株HSC-T6，不同浓度13C（25、50、100μmol／L）处理细胞48h后，四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞存活率；碘化丙啶（PI）染色测细胞周期；FITC-AnnexinV／PI荧光染色，流式细胞术观测细胞凋亡；荧光实时定量PCR法检测细胞凋亡相关蛋白FasL、bax、bcl-2、caspase-3及细胞周期调节蛋白CyclinD1、CDK4的mRNA表达；Western blot方法检测细胞磷酸化及非磷酸化p38信号分子的表达。结果：①MTT法显示，100mol／L及以下浓度的13C处理HSC-T6后，细胞的存活率在90％以上；②凋亡分析显示，对照组细胞没有发生凋亡，25～100mol／L13C组细胞的凋亡率分别为37．6％、64．2％和79．4％；③细胞周期结果显示，对照组细胞的S期为（58．7±4．7）％，25～100mol／L 13C使细胞的S期分别降低到（34．0±3．0）％、（26．3±3．3）％及（24．9±5．3）％，而G0／G1期细胞从（31．8±3．4）％（OM）升高到（54．6±3．0）％（100M），差异有显著性（P〈0．01）；④13C能剂量依赖性升高细胞Bax／Bcl-2及caspase-3的mRNA水平（P〈0．05），对Fas的mRNA表达无影响。同时能降低Cyclin D1和CDK4的mRNA水平（P〈0．05）；⑤13C能减少细胞内p38的磷酸化水平，呈剂量依赖性，对非磷酸化p38无影响。结论：13C可诱导体外活化的HSC凋亡，其机制与阻滞细胞周期进展、抑制p38信号途径及增加凋亡相关诱导因子的表达有关。