Wnt-β-catenin信号通路特异性分子靶向药物研究进展

Wnt-β-链蛋白（β-catenin）信号通路具有调节细胞增殖、凋亡、组织修复等作用,该通路信号的异常与许多疾病相关包括纤维化、癌症等[1-2]。该通路关键环节均可成为临床治疗靶点,目前,干预该通路的靶向治疗剂取得了一定成果,部分治疗剂已进入临床试验阶段,但开发出安全、有效的治疗药物的任务还很艰巨。目前,经典WNT信号通路的特异性分子靶向药物大致有5类：β-catenin-T淋巴细胞因子（TCF）拮抗剂,

氯氧喹通过下调Rho/Rho激酶信号通路抑制乳腺癌细胞转移

目的:通过观察氯氧喹对乳腺癌细胞系细胞骨架的聚合状态及其对Rho/Rho激酶信号通路相关靶点蛋白磷酸化的作用,明确氯氧喹治疗乳腺癌的作用机制。方法:以不同浓度氯氧喹处理乳腺癌Bcap37和MDA-MB--453细胞系,划痕试验检测细胞迁移,Transwell试验检测细胞侵袭,罗丹明标记鬼笔环肽染色法观察F肌动蛋白的聚解状态,免疫荧光法观察α微管蛋白的表达,蛋白质印迹法检测Rho/Rho激酶信号通路关键蛋白磷酸化水平。结果:氯氧喹可剂量依赖性地抑制细胞迁移和侵袭;Bcap37和MDA-MB-453细胞经氯氧喹处理后其细胞形态发生改变,细胞体积减少;F肌动蛋白和α微管蛋白染色形态不规则,荧光染色聚集成团,且呈现剂量依赖性;氯氧喹可下调Rho/Rho激酶信号通路中肌动蛋白解聚因子Cofilin、磷酸化蛋白激酶(Limk)、Rho关联卷曲蛋白激酶2(Rock2)磷酸化表达(均P<0.01)。结论:氯氧喹可抑制乳腺癌细胞骨架聚合从而抑制细胞迁移,该作用可能与抑制Rho/Rho激酶信号通路相关。

葛根素通过JNK信号通路调控自噬对大鼠创伤性脑损伤后的保护作用

目的初步探讨葛根素治疗对大鼠创伤性脑损伤的自噬影响以及分子机制。方法将75只成年sD大鼠按随机数字表法分为假手术组（S组）、创伤性脑损伤组（TBI组）、创伤性脑损伤＋葛根素治疗组（TBI＋Pue组）、创伤性脑损伤＋JNK选择性拮抗剂组（TBI＋SP组）以及创伤性脑损伤＋JNK激动剂＋葛根素组（TBI＋Pue＋An组）。Feeney法构建大鼠创伤性脑损伤模型。分别于模型制备后1、3、7d进行脑水含量测定以及神经功能缺陷评分。模型制备后第7天通过Westernblot法检测自噬标志蛋白LC3B和Beclin1以及JNK的磷酸化水平。结果与S组比较，其余四组在大鼠创伤模型制备后各个时间点的脑水含量与神经功能缺陷评分均明显升高（P〈0．05）；与TBI组比较，TBI＋Pne组和TBI＋sP组在各个时间点的脑水含量明显降低（P〈0．05），在模型制备后的第3天和第7天神经功能缺陷评分明显降低（P〈0．05）；而与TBI＋Pue组比较，TBI＋Pue＋An组脑水含量在模型制备后各个时间点均增加（P〈0．05），神经功能缺陷评分在模型制备后第3天和第7天均增加（P〈0．05）。与S组比较，在模型制备后第7天TBI组LC3II、Beclinl的表达明显增加（P〈0．05）；与TBI组比较，TBI＋Pue组、TBI＋sP组均明显抑制LC3II以及Beclinl的表达（P〈0．05）；而与TBI＋Pue组比较，TBI＋Pue＋An组LC3II和Beclinl表达均明显增加。与S组比较，TBI组P．JNK1／JNK1明显增加（P〈0．05）；与TBI组比较，TBI＋Pue组、TBI＋sP组的P-JNK1／JNK1明显减少（P〈0．05）；与TBI＋Pue组比较，TBI＋Pue＋An组的P-JNK1／JNK1明显增加（P〈0．05）。结论葛根素可通过抑制自噬发挥对创伤性脑损伤的保护作用，JNK通路可能是葛根素调控自噬的分子学机制。

PD98059和LY294002对乏氧放射胰腺癌ASPC-1细胞的影响

目的:观察MAPK、PI3K信号传导通路抑制剂PD98059(PD)、LY294002(LY)对乏氧照射胰腺癌细胞系ASPC-1细胞周期、VEGF和EGFR蛋白表达及细胞存活的影响。方法:AS-PC-1细胞分成常氧组、乏氧组、PD乏氧组、LY乏氧组和PD+LY乏氧组及各自照射组;PD98059终浓度为25μmol/L,LY294002终浓度为20μmol/L。乏氧组乏氧时间为24h,照射组接受4Gy单次照射,乏氧照射组在乏氧情况下进行照射。用Westernblot法、流式细胞术以及成克隆分析法对ASPC-1细胞进行检测。结果:常氧情况下ASPC-1细胞VEGF、EGFR蛋白均有表达,ASPC-1细胞乏氧培养后VEGF、EGFR蛋白表达量增加,应用PD98059或(和)LY294002后乏氧VEGF、EGFR蛋白的表达量较单纯乏氧组降低,LY乏氧组或PD+LY乏氧组VEGF表达蛋白量较PD乏氧组减少。乏氧组细胞克隆形成率较常氧组降低,LY乏氧组细胞克隆形成率较PD乏氧组降低,但差异无统计学意义,F=3·51,P=0·053。照射组间细胞克隆形成率差异均有统计学意义,F=123·21,P=0·0005,LY乏氧照射组细胞克隆形成率低于PD乏氧照射组,PD+LY乏氧照射组的细胞克隆形成率低于单独应用组。结论:MAPK、PI3K传导通路抑制剂PD98059、LY294002可降低乏氧后ASPC-1细胞VEGF、EGFR蛋白表达及乏氧照射后细胞克隆形成率,ASPC-1细胞乏氧后PI3K传导通路的激活可能起主要作用。