胞外信号相关蛋白激酶1/2信号通路与人参皂苷Rg1抗新生鼠缺氧缺血性脑损伤后神经元凋亡

目的探讨人参皂苷Rg 1在新生鼠缺氧缺血性脑损伤（hypoxia ischemia brain damage,HIBD）中的抗凋亡作用,分析可能的信号通路机制。方法 10日龄SPF级SD大鼠48只,体质量17~21 g,随机分为4组（n=12）,假手术组、模型组（HI组）、模型＋人参皂甙Rg 1组（HI＋Rg 1组）、模型＋人参皂甙Rg 1＋U 0126干预组（HI＋Rg 1＋U 0126组）。HI组、HI＋Rg 1组及HI＋Rg 1＋U 0126组大鼠采用结扎单侧颈总动脉并低氧通气方法制备HIBD模型;假手术组仅分离右侧颈总动脉。HI＋Rg 1＋U 0126组于造模前1 h右侧脑室注射5μL含U 0126（25μg/kg）的PBS,其余3组同法注射5μL PBS。HI＋Rg 1组及HI＋Rg 1＋U 0126组于术后即刻腹腔内注射0.1 m L含Rg 1（40 mg/kg）的生理盐水;HI组和假手术组注射0.1 m L生理盐水。术后4、24 h处死各组大鼠,取右侧半球皮层和海马脑组织,采用Western blot及免疫组织化学染色检测胞外信号相关蛋白激酶1/2（extracellular signalrelated protein kinase 1/2,Erk 1/2）及磷酸化Erk 1/2（phospho-Erk 1/2,p-Erk 1/2）、缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α）和活化的半胱天冬氨酸酶3（cleaved Caspase-3,CC 3）蛋白表达;TUNEL法检测原位神经元凋亡情况。结果 Western blot检测示,各时间点各组均有Erk 1/2、p-Erk 1/2、HIF-1α、CC 3蛋白表达;术后4、24 h,HI组HIF-1α、CC 3蛋白表达均较假手术组明显增加（P〈0.05）;术后4 h,HI组p-Erk 1/2蛋白表达较假手术组明显增加（P〈0.05）;术后4、24 h,HI＋Rg 1组p-Erk 1/2及HIF-1α蛋白表达较HI组明显上调（P〈0.05）,CC 3蛋白表达则明显下调（P〈0.05）;术后4、24 h,HI＋Rg 1＋U 0126组p-Erk 1/2及HIF-1α蛋白表达较HI＋Rg 1组明显下调（P〈0.05）,CC 3蛋白表达则明显上调（P〈0.05）。各时间点各组间Erk 1/2蛋白表达比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。免疫组织化学染色可见HIF-1α蛋白、CC 3蛋白定位主要集中在细胞核及细胞质,Erk 1/2、p-Erk 1/2蛋白定位主要集中在细胞质,蛋白表达强度与Western blot结果一致。TUNEL染色示术后4、24 h,HI组神经元凋亡指数较假手术组明显上升（P〈0.05）;术后24 h,HI＋Rg 1组神经元凋亡指数较HI组及HI＋Rg 1＋U 0126组明显降低（P〈0.05）。结论Rg 1通过Erk 1/2信号通路增强并稳定HIBD诱导的HIF-1α表达,从而抑制Caspase-3活化,减轻新生鼠HIBD后神经元凋亡。

mTOR信号传导通路相关蛋白与肿瘤治疗

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白基因位于1p36.2上,其mRNA翻译后的蛋白质有2549个氨基酸残基,其分子结构复杂,分子质量为289kDa。mTOR是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,通过调节细胞周期、蛋白质合成、细胞能量代谢等多种通路发挥重要的生理功能,在细胞增殖、生长、分化过程中起着中心调控点的作用。此外,mT0R在肿瘤的形成、发展、转移过程中也起着重要作用。在一些肿瘤中可见mTOR通路的持续活动的现象。到目前为止,mTOR抑制药作为靶向性抗肿瘤药物被有效地应用于肾癌及肝癌等治疗。因此,mTOR信号通路的深入研究对肿瘤的靶向治疗具有重要意义。

大豆异黄酮对AD大鼠海马CaM-CaMPK信号转导通路相关蛋白的影响

目的通过观察大豆异黄酮对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马钙调蛋白(CaM)-钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMPK)信号转导通路相关蛋白的影响,探讨大豆异黄酮治疗AD作用机制。方法采用Aβ双侧海马注射建立AD大鼠模型,分组后给予不同剂量大豆异黄酮,Morris水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力的变化,ELISA法测定大鼠海马组织CaM、CaMPK含量,免疫组化SP法观察大鼠海马组织Ras蛋白的表达。结果大豆异黄酮可改善AD大鼠的学习记忆能力(P<0.01),显著降低AD大鼠海马组织CaM、CaMPK的含量(P<0.01),显著降低AD大鼠海马组织Ras蛋白的表达(P<0.01)。结论大豆异黄酮可能通过降低AD大鼠海马CaM-CaMPK信号转导通路相关蛋白的表达起到治疗AD的作用。

APP17肽对DM大鼠海马神经元胰岛素和凋亡信号传导通路相关蛋白的影响

目的 观察糖尿病大鼠海马脑区胰岛素和凋亡信号传导通路中某些相关蛋白的表达及 APP17肽对其表达的影响。方法 链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病模型 ,并用 APP17肽治疗。用免疫沉淀和 Western- blot法分析海马中信号传导及部分凋亡相关蛋白 ;电镜观察大鼠脑组织超微结构。结果 DM大鼠 IGF- IRα、Akt/ PKB、CREB表达明显降低 ,APP17肽治疗后明显上调 (P <0 .0 5 ) ,GSK- 3β、PP- 1及凋亡相关蛋白 Bax、AIF表达增加 ,治疗后则明显降低 (P <0 .0 5 ) ;超微结构表明 APP17肽治疗后兴奋性突触小泡明显减少。结论 糖尿病大鼠海马脑区胰岛素和凋亡信号传导通路中某些重要蛋白表达异常 ,APP17肽部分纠正这些蛋白的异常表达 ,这可能是其保护

信号诱导增殖相关蛋白1和16、18型人乳头瘤病毒E6蛋白在宫颈癌中的表达及临床意义

目的:探讨信号诱导增殖相关蛋白1(SIPA1)和16、18型人乳头瘤病毒E6蛋白(HPV16/18E6)在宫颈癌中的表达及其与临床病理之间的关系。方法:Western blot检测宫颈癌C33A、HT3、SiHa、HeLa和CaSki细胞株中HPV16/18E6和SIPA1蛋白表达;免疫组织化学Envi-sion法检测正常宫颈组织(40例)和宫颈癌组织(174例)石蜡标本中HPV16/18E6和SIPA1蛋白;分析SIPA1和HPV16/18E6相互之间及其与宫颈癌盆腔淋巴结转移之间的关系。结果:宫颈癌细胞系中SIPA1与HPV16/18E6表达呈负相关。SIPA1在正常宫颈组织和宫颈癌组织中阳性率分别为87.5%和58.6%,差异有高度统计学意义(χ2=11.78,P=0.001);SIPA1蛋白在有和无盆腔淋巴结转移时阳性率分别为19.0%和71.2%,差异有高度统计学意义(χ2=21.45,P=0.000),且SIPA1阴性者发生淋巴结转移风险高于阳性者(OR=5.011,95%CI2.311～10.866,P<0.01)。HPV16/18E6在正常宫颈组织和宫颈癌组织中的阳性率分别为30.0%和79.3%,差异有高度统计学意义(χ2=37.72,P=0.000);HPV16/18E6在有和无淋巴结转移时阳性率分别为97.6%和73.5%,差异有高度统计学意义(χ2=11.31,P=0.001),HPV16/18E6阳性者淋巴结转移风险高于阴性者(OR=14.794,95%CI1.960～111.634,P<0.01)。宫颈癌组织中SIPA1与HPV16/18E6蛋白呈负相关(r=-0.249,P<0.001)。结论:SIPA1蛋白表达与HPV感染有关,HPV16/18E6有抑制SIPA1表达的作用,SIPA1在抑制宫颈癌的淋巴结转移中发挥着重要作用,可作为宫颈癌盆腔淋巴结转移的早期预测因子。

水苏碱调节Hippo-YAP信号通路对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用

目的探究水苏碱(stachydrine,STA)对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠的神经保护作用,并分析其作用机制。方法将新生SD大鼠随机分为假手术组、HIBD组、STA低剂量(5 mg/kg)组、STA中剂量(10 mg/kg)组、STA高剂量(20 mg/kg)组、维替泊芬(10 mg/kg)+STA高剂量(20 mg/kg)组,除假手术组外,其余大鼠构建HIBD大鼠模型。对各组大鼠进行神经功能缺损评分,采用Morris水迷宫实验进行认知功能评价,测定各组大鼠脑含水量和脑指数,HE染色、尼氏染色观察脑组织神经元损伤,TUNEL染色观察脑组织神经元细胞凋亡情况,Western blot法检测YES相关蛋白(YES associated protein,YAP)、p-YAP、哺乳动物STE20样蛋白激酶1(mammalian sterile 20-like kinase 1,MST1)、p-MST1、具有PDZ基序的转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ)蛋白表达。结果与假手术组比较,HIBD组海马组织损伤加重,尼氏小体减少(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著增加(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著降低(P<0.05);与HIBD组相比,STA低、中、高剂量组海马组织损伤改善,尼氏小体增加(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著降低(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著增加(P<0.05);与STA高剂量组相比,维替泊芬+STA高剂量组海马组织损伤加重,尼氏小体减少(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著增加(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著降低(P<0.05)。结论STA可能通过调控Hippo-YAP信号通路、减少神经损伤和神经元细胞凋亡、改善神经功能,发挥对HIBD新生大鼠的神经保护作用。

肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因mRNA在人胰腺癌组织中表达的临床意义

目的:探讨人胰腺癌肿瘤相关钙信号传导蛋白2(tumo-associated calcium signal transducer-2,TROP-2)基因在胰腺癌组织中表达及其临床意义。方法:提取56例人胰腺癌及癌旁正常组织中总mRNA,采用实时荧光定量逆转录聚酶链反应(RT-PCR)法检测其中TROP-2 mRNA表达情况;并分析其表达与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分化程度和TNM分期相关性。结果:以2^(-ΔΔCt)≥2为阳性标准,TROP-2在胰腺癌组织中阳性表达率为75.0%(42/56),而癌旁正常组织未见TROP-2 mRNA表达,两者差异有统计学意义(P<0.001)。TROP 2 mRNA过表达与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期显著相关(均P<0.01),而与患者年龄和肿瘤分化程度无关(均P>0.05)。结论:TROP-2基因表达与胰腺癌进展密切相关,可能是反映胰腺癌侵袭、转移的重要指标之一。

祛瘀化痰方联合促排卵方案对多囊卵巢综合征患者胰岛素信号通路相关蛋白的影响

目的:探讨祛瘀化痰方联合促排卵方案对多囊卵巢综合征(PCOS)患者胰岛素信号通路相关蛋白的影响。方法:选取2016年4月至2018年4月青海大学附属医院收治的PCOS患者100例,按照随机数字表法随机分为对照组和观察组,每组50例,对照组行氯米芬(CC)+人绝经期促性腺激素(h MG)促排卵方案治疗,观察组在对照组治疗的基础上联合中药祛瘀化痰方治疗,比较2组患者临床疗效、中医证候积分及胰岛素信号通路相关蛋白的表达。结果:治疗后,观察组治疗总有效率较对照组高,差异有统计学意义(P <0. 05); 2组中医证候积分与治疗前比较,差异无统计学意义(P> 0. 05);与治疗前比较,治疗后2组中医证候积分明显降低,对照组高于观察组,差异有统计学意义(P <0. 05); 2组治疗后的AKT蛋白表达比治疗前均有明显升高,且观察组上述指标改善情况较对照组明显,差异有统计学意义(P <0. 05); 2组治疗后的P-INSR、INSR、P-IRS、IRS、P-PI3K、PI3K、P-AKT、P-ERK1、ERK1、P-ERK2、ERK2蛋白表达比治疗前均有明显下降,且观察组上述指标改善较对照组明显,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论:对PCOS患者实施祛瘀化痰方剂联合西药治疗效果显著,能有效减轻患者临床症状,调控机体胰岛素信号通路相关蛋白的表达。

鸢尾素调节Hippo/YAP信号通路对绝经后骨质疏松大鼠骨代谢的调节作用

目的:探讨鸢尾素(Irisin)对绝经后骨质疏松(PMOP)大鼠骨代谢及Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路的影响。方法:采用双侧卵巢切除法构建PMOP大鼠模型,将所有实验大鼠分为对照组(Control组)、PMOP组、鸢尾素低、中、高剂量组(Irisin-L、Irisin-M、Irisin-H组)、鸢尾素高剂量+YAP抑制剂维替泊芬组(Irisin-H+VTPF组);骨密度仪测定骨密度(BMD);Micro-CT分析骨小梁的平均厚度(Tb.Th)、骨小梁面积百分比(Tb.Ar)、骨小梁数量(Tb.N)和骨小梁分离度(Tb.Sp);HE染色观察股骨组织形态学变化;ELISA法检测大鼠血清中骨代谢标志物特异性碱性磷酸酶(BALP)、I型前胶原氨基端前肽(PINP)、Ⅰ型胶原氨基端延长肽(PINP)、骨钙素(OC)、核结合因子-α1(CBF-α1)水平;Western blot法检测带pdz结合基序的转录共激活因子(TAZ)、YAP、p-YAP蛋白表达水平。结果:与Control组比较,PMOP组大鼠股骨组织的骨小梁结构紊乱,骨小梁厚度变薄,空骨陷窝明显,甚至发生轻微骨折,BMD、Tb.Th、Tb.Ar、Tb.N、BALP、P1NP、OC、CBF-α1、TAZ、YAP、p-YAP表达水平显著降低,Tb.Sp显著升高(P<0.05);与PMOP组比较,Irisin-L、Irisin-M、Irisin-H组大鼠股骨组织骨小梁结构逐渐排列有序,空骨陷窝减少,股骨组织损伤逐渐减轻,BMD、Tb.Th、Tb.Ar、Tb.N、BALP、P1NP、OC、CBF-α1、TAZ、YAP、p-YAP表达水平依次显著升高,Tb.Sp依次显著降低(P<0.05);与Irisin-H组比较,Irisin-H+VTPF组大鼠股骨组织的骨小梁结构紊乱,空骨陷窝明显增加,股骨组织损伤加重,BMD、Tb.Th、Tb.Ar、Tb.N、BALP、P1NP、OC、CBF-α1、TAZ、YAP、p-YAP表达水平显著降低,Tb.Sp显著升高(P<0.05)。结论:鸢尾素可以通过激活Hippo-YAP信号通路,调节绝经后骨质疏松大鼠骨代谢,防治骨质疏松。

染料木素对AD大鼠海马CaM-CREB信号转导通路相关蛋白的影响

目的:通过观察染料木素对Aβ25-35致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠CaM-CREB信号转导通路相关蛋白的影响,探讨染料木素预防阿尔茨海默病的作用机制。方法:SD雌性老龄大鼠120只,随机分为空白组、模型组、染料木素高、中、低剂量组、雌激素阳性对照组,每组20只。预给药7 d后,采用β-淀粉样肽(Aβ)双侧海马注射建立阿尔茨海默病大鼠模型,继续给药21 d。采用Morris水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力的变化,HE染色观察大鼠海马组织形态学变化,ELISA法检测大鼠海马钙调蛋白(CaM)含量,免疫组化SP法检测大鼠海马环腺苷酸反应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB的表达。结果:与模型组比较,染料木素各剂量组AD大鼠的学习记忆能力提高(P<0.01),海马CaM含量、CREB和p-CREB的表达降低(P<0.05)。结论:染料木素可能通过影响海马CaM-CREB信号转导通路相关蛋白表达起到预防AD的作用。

结肠癌中肿瘤相关钙信号转导蛋白-2的表达及其临床意义

目的检测肿瘤相关钙信号转导蛋白-2(TROP-2)在结肠癌组织及结肠癌细胞中的表达水平,探讨TROP-2与结肠癌进展的相关性及其对临床预后的意义。方法应用免疫组织化学法检测TROP-2蛋白在结肠癌组织、癌旁组织及正常结肠组织中的表达情况,回顾患者的临床资料,分析TROP-2蛋白表达水平与不同临床病理特征的相关性及其对临床预后的意义。应用蛋白质印迹法检测TROP-2蛋白在新鲜结肠癌组织标本中的表达情况,并应用免疫荧光法观察TROP-2蛋白的定位。结果TROP-2蛋白主要定位于肿瘤细胞的细胞膜,在细胞质、细胞核则少量表达或不表达。结肠癌组织中TROP-2蛋白表达水平高于癌旁组织和正常组织,差异有统计学意义(P<0.01);结肠癌组织中TROP-2蛋白表达与患者的性别、年龄、肿瘤分化程度无相关性(P>0.05),而与淋巴结转移情况及Dukes分期有明显相关性(P<0.05);伴淋巴结转移的患者结肠癌组织TROP-2蛋白阳性率高于无淋巴结转移者,差异有统计学意义(P<0.05);随着肿瘤Dukes分期的进展,结肠癌组织中TROP-2表达水平逐渐升高;TROP-2蛋白的高表达是结肠癌患者不良预后的独立因子。结论结肠癌中存在TROP-2的高表达,其在结肠癌侵袭和转移过程中可能发挥着重要作用。

前列腺癌患者Hedgehog信号通路相关蛋白的表达及其临床意义

目的研究Hedgehog(Hh)信号通路相关蛋白(Shh、Ptch和Gli1)在前列腺癌患者中的表达及其与疾病预后的关系。方法取90例手术治疗的前列腺癌患者肿瘤组织及对应的癌旁正常组织标本,采用免疫组化法测定Shh、Ptch和Gli1表达,分析其与临床病理特征的相关性,采用Cox回归模型研究前列腺癌患者术后复发转移的危险因素,并利用Kaplan-Meier生存曲线分析Shh、Ptch和Gli1与无进展生存期的关系。结果前列腺癌组织中Shh、Ptch和Gli1蛋白表达水平显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。不同Shh、Ptch和Gli1蛋白表达的前列腺癌患者的临床分期、Gleason评分、合并骨转移的分布差异具有统计学意义(P<0.05)。Cox回归分析显示,Hh信号通路相关蛋白表达阳性是术后复发转移的独立危险因素(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,Hh信号通路相关蛋白表达与前列腺癌患者无进展生存期呈负相关(P<0.05)。结论前列腺癌患者肿瘤组织中Hh信号通路相关蛋白表达与肿瘤分化程度密切相关,对前列腺癌患者预后评估具有一定价值。

Hippo/YAP信号通路调控蛋白ACAN作为新型肝细胞肝癌血清肿瘤标志物的研究

目的探讨Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路调控蛋白——聚蛋白聚糖(ACAN)诊断肝细胞肝癌(HCC)的价值。方法检测156例HCC患者、33例乙型肝炎患者、31例丙型肝炎患者、30例肝硬化患者、26例结肠癌患者、19例肺癌患者、22例胃癌患者、20例乳腺癌患者及100名体检健康者(正常对照组)的ACAN水平。将过表达YAP载体、YAP-shRNA慢病毒质粒转染肝癌细胞系Bel-7402和SMMC-7721。将过表达环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、TEA域家族成员(TEAD)、α珠蛋白转录因子CP2(TFCP2)、Runt相关转录因子2(RUNX2)载体分别单独转染及与YAP共转染Bel-7402和SMMC-7721细胞,检测ACANmRNA的表达,评价不同载体对ACAN野生型及突变型启动子的影响。同时评价ACAN和甲胎蛋白(AFP)对肝癌的诊断效能。结果 HCC组ACAN水平明显高于胃癌组、结肠癌组、乳腺癌组、肺癌组、乙型肝炎组、丙型肝炎组及正常对照组(P=0.000),而其他各组之间ACAN水平差异均无统计学意义(P>0.05)。过表达YAP后ACANmRNA表达量明显升高(P<0.01),而YAP敲除后ACANmRNA表达量明显降低(P<0.01)。与其他转录因子(TEAD、TFCP2及RUNX2)比较,过表达CREB及共转染CREB和YAP可促进ACAN mRNA表达(P<0.01)。野生型ACAN启动子受CREB、YAP影响,而突变型ACAN启动子则不受影响。ACAN与AFP、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)呈明显正相关(r值分别为0.722、0.517、0.443,P=0.000)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,ACAN和AFP诊断HCC的曲线下面积(AUC)分别为0.978、0.661;ACAN诊断Ⅰ～Ⅱ期HCC、Ⅲ期HCC的AUC分别为0.903和0.993。结论 ACAN对HCC的诊断效能略优于AFP,且对晚期HCC的诊断效能优于早期HCC。ACAN通过Hippo/YAP信号通路发挥重要作用,或可作为一种新的HCC血清肿瘤标志物。

针刺调节RhoA/ROCK信号通路对创伤性脑出血大鼠血脑屏障的影响

目的:探究针刺调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路对创伤性脑出血(TICH)大鼠血脑屏障的影响。方法:随机将SD大鼠分为假手术(Sham)组、TICH组、针刺组、RhoA抑制剂组,除Sham组外,其余各组均采用自由落体击打法制备TICH模型,于TICH模型大鼠苏醒后,针刺组给予百会穴透刺患侧曲鬓穴针刺干预,RhoA抑制剂组给予Rhosin(40 mg/kg)腹腔注射干预,连续干预3 d。3 d后采用Loeffler评分法评估神经缺损程度(Loeffler评分与神经缺损程度呈负相关);烘干法测定脑组织含水量;原位末端标记测定法(TUNEL)染色检测脑组织神经元凋亡情况;伊文思蓝染色(Evans blue)检测血脑屏障损伤情况(伊文思蓝渗透量与血脑屏障损伤严重程度呈正相关);蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测脑组织RhoA/ROCK信号通路相关蛋白表达情况。结果:与Sham组比较,TICH组Loeffler评分减少(P<0.05),脑组织含水量、神经元凋亡率、伊文思蓝渗透量增加(P<0.05);与TICH组比较,针刺组、RhoA抑制剂组Loeffler评分增加(P<0.05),脑组织含水量、神经元凋亡率、伊文思蓝渗透量减少(P<0.05);针刺组与RhoA抑制剂组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与Sham组比较,TICH组脑组织RhoA、ROCK蛋白表达增加(P<0.05);与TICH组比较,针刺组、RhoA抑制剂组RhoA、ROCK蛋白表达减少(P<0.05);针刺组与RhoA抑制剂组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:针刺可保护TICH大鼠血脑屏障,可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路激活而改善脑水肿以及神经损伤。

嗜水气单胞菌相关毒力基因的研究进展

嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是人、畜和水生动物共患的条件致病菌。目前发现其致病性与多种毒力因子相关。主要对外毒素、外膜蛋白和信号相关蛋白等毒力因子相关基因的研究进展作一综述,为嗜水气单胞菌病的鉴定、预防和治疗提供参考。

基于RhoA/ROCK信号通路探讨人参皂苷Rg2对曲妥珠单抗引起的大鼠心功能及心肌细胞损伤的影响

目的:探讨人参皂苷Rg2对曲妥珠单抗引起的大鼠心功能和心肌细胞损伤的影响及RhoA/RhoA相关蛋白激酶(ROCK)信号通路在此过程中的作用。方法:将Wistar雌性大鼠随机分为对照组、曲妥珠单抗组(Trz组,50.4 mg/kg曲妥珠单抗)、曲妥珠单抗+人参皂苷Rg2干预组(Trz+Rg2组,50.4 mg/kg曲妥珠单抗+20 mg/kg人参皂苷Rg2)。将心肌细胞H9c2分为对照组、Trz组(100μg/mL Trz,37℃培养24 h)、Trz+Rg2组(100μg/mL Trz,37℃培养24 h后,于200μmol/L人参皂苷Rg2中37℃培养12 h)。给药结束后,采用超声诊断仪测量左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD),并计算左室射血分数(LVEF)和短轴缩短率(LVFS);检测大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6含量及心肌组织匀浆上清液与H9c2细胞培养上清液丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;流式细胞术检测H9c2细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠心肌组织与H9c2细胞中Bax、Bcl-2和RhoA、ROCK蛋白表达。结果:与对照组比较,Trz组大鼠LVEDD、LVESD升高,LVEF、LVFS降低(P<0.05);血清CK-MB、LDH及TNF-α、IL-6含量升高(P<0.05);大鼠心肌组织与H9c2细胞中MDA水平和RhoA、ROCK蛋白表达升高,SOD活性降低(P<0.05),H9c2细胞凋亡率升高,H9c2细胞中Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05)。与Trz组比较,Trz+Rg2组大鼠LVEDD、LVESD降低,LVEF、LVFS升高(P<0.05);血清CK-MB、LDH及TNF-α、IL-6含量降低(P<0.05);大鼠心肌组织与H9c2细胞MDA水平和RhoA、ROCK蛋白表达降低,SOD活性升高(P<0.05);H9c2细胞凋亡率降低,H9c2细胞中Bax蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg2可能通过下调RhoA/ROCK信号通路表达,改善曲妥珠单抗引起的大鼠心功能受损及心肌细胞损伤。

Rho/ROCK信号通路介导肾脏纤维化的机制研究进展

肾脏纤维化是几乎所有肾脏疾病进展至终末期肾病的共同病理改变,严重威胁人类健康。Rho/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路是生物体内广泛存在的经典信号通路,可通过调节骨架蛋白的聚合状态影响细胞收缩、黏附、迁移等生物学行为。Rho/ROCK信号通路的异常激活参与肾脏纤维化的发生发展,有望成为临床治疗肾脏纤维化的有效靶点。因此,深入研究Rho/ROCK信号通路介导肾脏纤维化发生发展的机制,可以为慢性肾脏病的临床诊治和新药研发提供思路。

circRNA SIPA1L1修饰牙髓干细胞来源外泌体促血管生成能力的机制

目的 探究环状RNA(circRNA)信号诱导增殖相关蛋白1样蛋白1(SIPA1L1)修饰的人牙髓干细胞(hDPSC)来源外泌体(Exo)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管生成能力的影响及机制。方法 从牙髓组织分离培养hDPSC,将circSIPA1L1过表达质粒载体转染至hDPSC后,分离Exo并进行鉴定。将HUVEC分为对照组、hDPSC Exo组、circSIPA1L1-hDPSC Exo组,培养48 h后,Matrigel基质胶血管形成实验检测血管形成能力,qRT-PCR和Western blot测定血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)、胎盘生长因子(PGF)的表达水平。结果 从未转染的hDPSC与转染circSIPA1L1的hDPSC中成功分离出Exo,且相较于h DPSC来源的Exo,转染circSIPA1L1的hDPSC来源的Exo中circSIPA1L1相对表达量显著上调(P <0.05)。与hDPSC Exo组比较,circSIPA1L1-hDPSC Exo组HUVEC的管样结构形成数目显著增加(P <0.05),VEGF、VEGFR2、PGF mRNA与蛋白相对表达量也显著上调(P<0.05)。结论 circRNA SIPA1L1修饰hDPSC来源的Exo能够促进血管生成,其机制可能与上调VEGF、VEGFR2、PGF的表达水平有关。

miR-133a调控RUNX2/BMP2信号通路参与激素性股骨头坏死的机制

目的探讨微RNA(miR)-133a调控生长相关转录因子2(RUNX2)/骨形态蛋白2(BMP2)信号通路参与激素性股骨头坏死(SONFH)的机制。方法收集本院接受髋关节置换SONFH患者(SONFH组)骨髓及股骨颈骨折不愈合患者(对照组)骨髓,提取骨髓间充质干细胞(BMSCs),经表型鉴定、成骨、成脂分化鉴定后检测BMSCs miR-133a、RUNX2 mRNA和蛋白表达水平,双荧光素酶鉴定miR-133a与RUNX2的靶向关系。实验分组包括对照组、SONFH组、抑制剂对照组(inhibitor con组)、miR-133a抑制剂组(miR-133a inhibitor组)、miR-133a inhibitor+si-RUNX2组。实时定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中miR-133a、RUNX2 mRNA水平;Western blotting检测BMSCs中RUNX2、BMP2、骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)蛋白水平;CCK-8检测细胞增殖情况;茜素红染色鉴定细胞矿化能力。结果BMSCs细胞表型鉴定结果显示,细胞表面CD71、CD44表达,CD34、人类白细胞抗原DR等位基因不表达;成骨分化鉴定显示BMSCs出现矿化结节,结节呈红色散落分布;成脂分化鉴定显示BMSCs中脂滴呈橙红色,脂滴沉着细胞,且数量较多,部分细胞内脂滴融合变大成泡状,细胞核位于中央或挤向外周,提示BMSCs提取成功。miR-133a与RUNX2靶向关系存在特异性结合位点。与对照组比较,SONFH组BMSCs中miR-133a水平升高(P<0.05);RUNX2 mRNA和蛋白水平,24、48、72 h时BMSCs的吸光度值,BMSCs矿化结节相对数量,BMP2、BGP、COL-Ⅰ蛋白水平均显著降低(均P<0.05)。与SONFH组、inhibitor con组比较,miR-133a inhibitor组BMSCs中miR-133a水平降低(P<0.05);RUNX2 mRNA和蛋白水平,24、48、72 h时BMSCs的吸光度值,BMSCs矿化结节相对数量,BMP2、BGP、COL-Ⅰ蛋白水平均显著升高(均P<0.05)。与miR-133a inhibitor组比较,miR-133a inhibitor+si-RUNX2组BMSCs中miR-133a水平升高(P<0.05),RUNX2 mRNA和蛋白水平,24、48、72 h BMSCs的吸光度值,BMSCs矿化结节相对数量,BMP2、BGP、COL-Ⅰ蛋白水平均显著降低(均P<0.05)。结论miR-133a在SONFH患者BMSCs中高表达,抑制miR-133a表达可靶向促进RUNX2的表达,从而促进BMSCs成骨分化和细胞增殖。

骨髓间充质干细胞基于Rho/ROCK信号通路对膝骨性关节炎模型大鼠软骨细胞凋亡的影响

目的分析骨髓间充质干细胞(BMSCs)基于鼠抗Ras同源基因(Rho)/Rho相关螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路对膝骨性关节炎(KOA)模型大鼠软骨细胞凋亡的影响。方法随机选取30只健康大鼠,其中正常组10只,模型组10只、BMSCs组10只,分别进行干预。对比各组软骨组织Mankin评分,检测基质金属蛋白酶(MMP)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-10、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及RhoA、ROCK蛋白表达水平,分析BMSCs对KOA大鼠软骨细胞凋亡的影响。结果BMSCs组Mankin评分高于正常组、低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs组血清MMP-1、TNF-α、Bax、RhoA、ROCK表达水平低于模型组、高于正常组,IL-10、Bcl-2表达水平高于模型组、低于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs组软骨细胞凋亡指数低于模型组、高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于Rho/ROCK信号通路调控BMSCs可改善KOA大鼠膝关节软骨病理状态、抑制炎症反应蔓延、调控Bax、Bcl-2蛋白表达、抑制软骨细胞凋亡,其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路相关,证实BMSCs具有良好的抗软骨细胞凋亡疗效。