子痫前期孕妇外周血、胎盘组织中信号肽⁃CUB⁃表皮生长因子样结构域蛋白2的表达及意义

目的探讨信号肽⁃CUB⁃表皮生长因子样结构域蛋白2(Signal peptide⁃CUB⁃EGF⁃like domain⁃containing protein,SCUBE2)在子痫前期孕妇外周血及胎盘组织中的表达及临床意义。方法选取2021年6月至2022年6月住院分娩的子痫前期患者58例,其中早发型子痫前期30例(发病妊娠周数<34周),晚发型子痫前期组28例(发病妊娠周数≥34周);另选取30例足月正常分娩孕妇作为对照组。收集入院治疗前孕妇的血清样本以及分娩时新鲜胎盘组织标本。ELISA检测三组孕妇血清SCUBE2、VEGFR2表达水平,免疫组化检测三组胎盘组织中SCUBE2的定位及表达,Western blot实验及实时荧光定量PCR(RT⁃qPCR)实验检测三组胎盘组织中SCUBE2、VEGFR2的表达水平。结果免疫组化法检测显示,SCUBE2主要表达于胎盘合体滋养细胞及胎盘血管内皮细胞中,子痫前期组表达水平低于对照组,早发型子痫前期组表达低于晚发型子痫前期组;Western blot及RT⁃qPCR实验检测结果显示,三组孕妇胎盘中SCUBE2和VEGFR2蛋白及mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05),子痫前期组表达量低于对照组,其中早发型子痫前期组表达量低于晚发型子痫前期组(P<0.05);ELISA法检测显示,三组孕妇血清中SCUBE2及VEGFR2表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),子痫前期组低于对照组,其中早发型子痫前期组表达量低于晚发型子痫前期组(P<0.05),子痫前期组孕妇血清SCUBE2与VEGFR2表达量呈正相关(r=0.6022,P<0.0001)。结论SCUBE2在孕妇血清中及胎盘组织表达量降低可能参与子痫前期的发生发展。

人胰岛素样生长因子1受体β结构域蛋白的原核表达及活性检测

目的构建人胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)β亚基胞外结构域(ED)和胞内激酶(PKD)结构域的原核表达载体,获得纯化的GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD融合蛋白,并检测其活性。方法用PCR方法从乳腺cDNA文库中扩增IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体。重组质粒转化大肠杆菌Rossate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白,并用Western blot法检测融合蛋白表达,最后用GST pull-down技术检测纯化蛋白与已知蛋白表皮生长因子受体2驱动的细胞运动调节蛋白(MEMO)的相互作用。结果构建得到GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,测序后与目的序列一致;在Rossate菌中诱导表达出与预期位置相符的目的蛋白,并经过Western blot检测,融合蛋白成功表达;纯化得到GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD两个融合蛋白,GST pull-down证明蛋白GST-IGF1Rβ-PKD可以和MEMO相互作用。结论成功克隆GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因,并获得活性良好的GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD蛋白。

血清SCUBE1、Lp-PLA2水平与急性STEMI患者冠状动脉高血栓负荷的关系

目的探讨血清可溶性信号肽-CUB-表皮生长因子样结构域蛋白1(SCUBE1)、脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)与急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者冠状动脉高血栓负荷(HTB)的关系。方法选取126例急性STEMI患者(急性STEMI组),根据血栓分级分为HTB患者57例和非HTB患者69例;另选取87名健康体检者为对照组。用酶联免疫吸附法检测血清SCUBE1、Lp-PLA2;用多因素Logistic回归分析急性STEMI患者冠状动脉HTB的影响因素;用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清SCUBE1、Lp-PLA2水平对急性STEMI患者冠状动脉HTB的预测价值。结果急性STEMI组血清SCUBE1、Lp-PLA2水平高于对照组(P均<0.05)。HTB患者年龄、吸烟比例、低密度脂蛋白胆固醇、白细胞计数、SCUBE1、Lp-PLA2水平高于非HTB患者(P均<0.05),两者性别、基础疾病、罪犯血管、Gensini评分、左室射血分数比较差异无统计学意义(P均>0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄增加、吸烟和血清SCUBE1、Lp-PLA2水平升高为急性STEMI患者冠状动脉HTB的独立危险因素(P均<0.05)。ROC曲线分析显示,血清SCUBE1、Lp-PLA2水平联合预测急性STEMI患者冠状动脉HTB的曲线下面积为0.874,大于二者单独预测的0.794、0.791(P均<0.05)。结论急性STEMI患者血清SCUBE1、Lp-PLA2水平升高与冠状动脉HTB密切相关,二者联合检测对急性STEMI患者冠状动脉HTB的预测价值较高。

血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平预测急性肺栓塞严重程度及预后的价值

目的探讨血浆信号肽-CUB-表皮生长因子结构域包含蛋白1(SCUBE-1)、A解聚素和金属蛋白酶及血小板反应蛋白基序-9(ADAMTS-9)及血管生成素-2(ANG-2)水平预测急性肺栓塞(APE)严重程度及预后的价值。方法选取收治的APE患者121例,依据CT肺动脉栓塞指数(PAOI)分为轻度组34例(PAOI<30%)、中度组45例(30%≤PAOI≤50%)和重度组42例(PAOI>50%),根据APE患者预后情况分为预后良好组86例和预后不良组35例。采用酶联免疫吸附法测定血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平。应用多元logistic回归分析影响APE预后不良的危险因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平对APE预后不良的预测价值。采用Pearson相关分析血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平与心功能指标的相关性。结果预后不良组血浆SCUBE-1[(24.63±11.70)ng/mL vs.(10.17±5.12)ng/mL]、ADAMTS-9[(47.50±13.25)ng/mL vs.(24.28±7.63)ng/mL]及ANG-2[(15.38±6.27)ng/mL vs.(4.15±1.52)ng/mL]水平均明显高于预后良好组(P<0.001)。APE患者病情越重,血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平越高,重度组>中度组>轻度组(P<0.001)。多元logistic回归分析显示,PAOI、CRP、cTnI、BNP、D-二聚体、SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平升高是影响APE预后不良的危险因素(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2三项联合预测APE预后不良的曲线下面积最大(0.931,95%CI:0.868~0.996),其准确度为88.4%。相关分析显示,APE患者血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平与CRP、cTnI、BNP、D-二聚体及PAOI均呈正相关(P<0.05)。结论血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平升高与APE严重程度和预后不良有关,是APE预后不良的危险因素,三项联合对APE预后不良有较好的预测价值。

组织TMEFF2基因甲基化状态与子宫内膜癌和子宫内膜增生的关系

目的分析含表皮样生长因子和卵泡抑素结构域的跨膜蛋白2(TMEFF2)基因甲基化状态与子宫内膜癌(EC)和子宫内膜增生的关系。方法选取2017年3月至2021年8月在该院妇产科住院的172例汉族女性为研究对象,包括91例EC患者(EC组)、36例子宫内膜增生患者(增生组)和45例子宫内膜正常女性(对照组)。采用实时定量焦磷酸测序检测TMEFF2基因3个CpG位点甲基化水平。根据甲基化指数(MI),将91例EC患者分为未甲基化组(MI<10%)、中低度甲基化组(MI为10%~30%)和高度甲基化组(MI>30%)。比较对照组、增生组、EC组临床资料,比较不同甲基化水平组各项临床和病理学特征。采用随机森林分类算法,根据变量在诊断中的重要性绘制出示意图,并对其进行排序,筛选鉴别诊断指标。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析TMEFF2基因CpG1位点甲基化水平对EC、增生子宫内膜及正常子宫内膜的鉴别诊断价值。结果EC组、对照组、增生组TMEFF2基因MI分别为24.53(9.20,65.78)、4.58(0.49,15.76)、13.67(2.95,28.76),EC组MI明显高于对照组和增生组,且增生组MI明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。未甲基化组、中低度甲基化组、高甲基化组的EC肿瘤(pT)分期、淋巴结转移状态(pN)分期、年龄分布情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。根据随机森林分类法,TMEFF2基因CpG1位点甲基化状态是仅次于体质量指数的重要诊断指标。ROC曲线分析结果显示,TMEFF2基因CpG1位点甲基化水平鉴别子宫内膜增生与正常子宫内膜、EC与子宫内膜增生的曲线下面积分别为0.700(95%CI:0.586~0.813,P<0.05)和0.933(95%CI:0.891~0.976,P<0.05)。结论TMEFF2基因CpG1位点甲基化异常与子宫内膜增生形成及增生组织进一步癌变密切相关,可作为潜在的预测因子。

2型糖尿病并发视网膜病变患者血清皮质醇、肌生成抑制素、SCUBE-1水平变化及临床意义

目的探讨2型糖尿病(T2DM)并发糖尿病视网膜病变(DR)患者血清皮质醇、肌生成抑制素(Mstn)、信号肽-补体蛋白C1r/C1s、Uegf和Bmp1-表皮生长因子结构域包含蛋白1(SCUBE-1)的水平变化,并分析其与增生型DR的关系。方法将2018年3月至2021年12月北京中医医院怀柔医院眼科收治的T2DM并发DR患者365例纳入研究,根据有无新生血管分为增生型DR组(62例)和非增生型DR组(303例)。将同期北京中医医院怀柔医院内分泌科收治的单纯T2DM患者51例纳入研究作为T2DM组。另外,选取同期于北京中医医院怀柔医院体检健康者51例作为健康对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清皮质醇、Mstn和SCUBE-1水平,同时收集纳入研究者基线资料,采用Pearson相关分析血清皮质醇、Mstn、SCUBE-1与基线资料中各指标的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清皮质醇、Mstn、SCUBE-1对增生型DR的诊断价值。结果血清皮质醇、Mstn、SCUBE-1水平的组间比较显示,增生型DR组均高于非增生型DR组,非增生型DR组均高于T2DM组,T2DM组均高于健康对照组(P<0.05)。单因素分析显示,增生型DR组体重指数(BMI)、空腹糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血清葡萄糖(FSG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、甘油三酯(TG)、血尿素(Urea)、血肌酐(Cr)、尿清蛋白排泄率(UAER)高于非增生型DR组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,T2DM并发DR患者血清皮质醇、Mstn、SCUBE-1水平与BMI、糖尿病病程、HbA1c、FSG、FINS、HOMA-IR、TG、Urea、Cr、UAER均呈正相关(P<0.05)。血清皮质醇、Mstn、SCUBE-1、两两联合(皮质醇+Mstn、皮质醇+SCUBE-1、Mstn+SCUBE-1)及3项指标联合检测诊断增生型DR的ROC曲线下面积分别为0.695、0.747、0.742、0.768、0.758、0.771、0.838,3项联合应用的诊断效能较高。结论T2DM并发DR患者血清皮质醇、Mstn、SCUBE-1水平异常升高,与增生型DR有关,3项指标联合检测对增生型DR具有较高的诊断价值。

超脉冲CO_(2)激光联合磁敷疗法治疗浅表型增殖期婴幼儿血管瘤的临床效果及其对患儿血清EGFL7、HIF-1α、MMP9、TIMP-1水平的影响

目的探讨超脉冲CO_(2)激光联合磁敷疗法治疗浅表型增殖期婴幼儿血管瘤(IH)的临床效果及其对患儿血清表皮生长因子样结构域蛋白7(EGFL7)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)水平的影响。方法将110例浅表型增殖期IH患儿随机分成观察组与对照组,各55例。观察组采用超脉冲CO_(2)激光联合磁敷疗法治疗,对照组采用单纯超脉冲CO_(2)激光治疗。比较两组患儿近期与远期治疗有效率,以及治疗前后的血清EGFL7、HIF-1α、MMP9、TIMP-1水平,观察两组患儿治疗期间不良反应的发生情况。结果观察组近期治疗有效率与远期治疗有效率均高于对照组(均P<0.05)。治疗后,两组患儿的血清EGFL7、HIF-1α、MMP9水平均低于治疗前,且观察组患儿的上述指标水平均低于对照组(均P<0.05);两组患儿的血清TIMP-1水平均高于治疗前,且观察组患儿的血清TIMP-1水平高于对照组(均P<0.05)。两组患儿治疗期间局部肿胀、局部红斑、色素沉着的发生率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论相比于单纯超脉冲CO_(2)激光治疗,超脉冲CO_(2)激光联合磁敷疗法可提高浅表型增殖期IH患儿的治疗效果,安全性较高,其机制可能与调节血清EGFL7、HIF-1α、MMP9和TIMP-1水平有关。

2型糖尿病大鼠脑组织EGFL-7的表达及氨基胍和Baicalein对其干预作用

目的研究人表皮生长因子样结构域蛋白-7(EGFL-7)因子在2型糖尿病大鼠脑组织中的表达以及氨基胍、Baicalein干预后对其影响。方法 48只SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组、氨基胍组、Baicalein组4组,每组12只。正常对照组给予普通饮食喂养;糖尿病组、氨基胍组、Baicalein组采用高脂高糖饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素的方法建立糖尿病大鼠模型。造模成功后,氨基胍组、Baicalein组分别给予氨基胍溶液、Baicalein溶液灌胃,剂量均为150 mg/(kg·d),正常对照组、糖尿病组给予等量生理盐水灌胃。16周后,用免疫组织化学法及蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测各组大鼠脑组织EGFL-7的表达。结果免疫组织化学法及蛋白免疫印迹法均显示,与正常对照组比较,糖尿病组、氨基胍组及Baicalein组EGFL-7的表达均明显增加(P<0.01),与糖尿病组比较,氨基胍组、Baicalein组EGFL7表达明显降低(P<0.01),Baicalein组与氨基胍组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EGFL-7可能参与糖尿病大鼠脑血管增生与重塑,氨基胍、Baicalein在一定程度上抑制其血管增生,其抑制作用可能是通过降低EGFL-7表达来实现的。

川芎挥发油通过LRIG2调控EGFR/VEGF-A通路对胶质瘤血管生成的影响

目的:探究川芎挥发油(LCH)通过富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域2(LRIG2)调控表皮生长因子受体(EGFR)/血管内皮生长因子A(VEGF-A)通路对胶质瘤血管生成的影响。方法:体外培养人恶性胶质瘤U87 MG细胞,分别采用低(L-LCH)、高(H-LCH)剂量LCH进行处理,检测LCH对U87 MG细胞恶性生物学行为(CCK-8检测增殖能力,Transwell实验检测迁移、侵袭能力)及血管生成(三维培养实验)的影响;体外培养U87 MG细胞及正常人星形胶质细胞(HA1800细胞),Western blot检测LRIG2、EGFR、VEGF-A在两者中的表达情况及L-LCH、H-LCH对LRIG2、EGFR、VEGF-A表达的影响;向U87 MG细胞转染LRIG2过表达[LRIG2(+)]质粒,检测U87 MG细胞LRIG2、EGFR、VEGF-A表达变化,以及恶性生物学行为与血管生成情况;U87 MG细胞在H-LCH处理的同时亦给予转染LRIG2(+)质粒处理,观察其恶性生物学行为与血管生成情况。结果:L-LCH、H-LCH处理后U87 MG细胞增殖率,迁移、侵袭细胞数及小管数量均减少(P<0.05);U87 MG细胞LRIG2、EGFR、 VEGF-A蛋白表达较之HA1800细胞均增加(P<0.05);L-LCH、H-LCH处理后U87 MG细胞LRIG2、EGFR、VEGF-A蛋白表达均减少(P<0.05);增加转染LRIG2(+)质粒处理可部分逆转H-LCH对U87 MG细胞增殖、迁移、侵袭和血管生成的影响。结论:LCH能抑制U87 MG细胞恶性生物学行为及血管生成,可能通过下调LRIG2表达,进而下调EGFR、VEGF-A表达而实现。