一个新的人信号识别微粒受体基因APMCF1的克隆、表达和抗体制备

目的 :克隆人类新基因APMCF1 ,原核表达并制备其特异性多克隆抗体 .方法 :运用 5′末端快速扩增方法 ,结合Genbank数据库进行电子拼接 ,完善APMCF1的 5′端序列 ;利用RT PCR方法 ,扩增出APMCF1的蛋白编码cDNA序列 ,克隆入pGEX KG中 ,构建APMCF1的原核表达载体 ,在大肠杆菌中诱导表达后获得了GST APMCF1融合蛋白 ,以此融合蛋白为免疫原制备兔抗血清 ,用Westernblot鉴定抗体特异性 .结果 :通过RACE及电子拼接 ,完善了APMCF1的 5′端序列 ,其cDNA长度为 1 74 5bp,与鼠信号识别微粒受体 β亚基序列同源性较高 ,染色体定位于 3q2 2 .2 ;克隆了APMCF1 81 6bp的开放读框序列并表达了GST APMCF1融合蛋白 .制备了特异性兔抗GST APMCF1多克隆抗体 .结论 :APMCF1可能是编码人类信号识别微粒受体β亚基的基因 .该分子多克隆抗体的初步制备 。