日本血吸虫信号转导分子14-3-3蛋白epsilon亚型基因的克隆与序列分析

目的 克隆日本血吸虫 14 - 3- 3蛋白 epsilon亚型的编码基因 ,以研究其在血吸虫信号传导及其在免疫预防的作用。方法 以日本血吸虫成虫总 RNA为模板逆转录合成 c DNA链 ,设计合成引物 ,用 PCR法扩增14 - 3- 3蛋白 epsilon亚型基因编码序列 ,将其克隆入 p GEM- T载体 ,并用双酶切和以质粒为模板的 PCR进行鉴定。结果 RT- PCR扩增出一条约 75 3bp大小的特异性条带 ,重组质粒的双酶切和以质粒为模板的 PCR均获得了一条与 RT- PCR扩增出大小相同条带 ,序列测定结果表明其具有 75 3bp的开放阅读框 ,并具蛋白激酶、酪氨酸激酶磷酸化位点。结论 成功构建了日本血吸虫 14 - 3- 3蛋白 epsilon亚型重组 p GEM- T克隆载体 ,为进一步的研究提供了条件。

TGF-β1及其信号转导蛋白Smad23在去卵巢大鼠骨组织中的表达及意义

目的观察转化生长因子β1(TGFβ1)及其信号转导蛋白Smad23在去卵巢大鼠骨组织中的表达及意义。方法手术切除大鼠双侧卵巢。术后13周,取离体胫骨测量组织学参数髓腔面积百分率(%Ma.Ar)、骨小梁厚度(Tb.Th),用逆转录多聚酶链反应(RTPCR)检测大鼠骨组织TGFβ1mRNA的表达,用免疫组化法检测Smad23蛋白在骨组织中的定位,用Westernblot杂交法检测骨组织TGFβ1、Smad23蛋白表达。结果与对照组(Sham组)比较,模型大鼠(OVX组)骨组织Tb.Th缩小,%Ma.Ar明显增大,差异有显著性(P<0.01);OVX组TGFβ1的mRNA、蛋白及Smad23蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Smad23蛋白广泛表达于骨组织干骺端,主要表达于骨基质表面及骨小梁周围的成骨细胞。结论TGFβ1及其信号转导蛋白Smad23可能在绝经后骨质疏松症中起重要调节作用。

信号转导分子smad4基因表达抑制体外培养人血管平滑肌细胞的增殖

目的:探讨细胞内转化生长因子β信号通路中信号转导分子Smad4与平滑肌细胞的增殖关系。方法:实验于2003-08/10在哈尔滨医科大学医学遗传学研究室完成。①取体质量200g左右的健康雄性SD大鼠,常规胶原酶消化法原代培养大鼠血管平滑肌细胞。用体积分数为0.2和0.05(去血清培养)胎牛血清和的Dulbecco改良的Eagle培养基,37℃,体积分数0.05CO2进行培养,2.5g/L胰酶消化传代。血管平滑肌细胞经锥虫蓝染色,存活细胞数在98%以上。形态学上出现典型的“峰和谷”样生长状态,抗平滑肌特异α-肌动蛋白免疫组织化学染色阳性。取3～8代细胞用于实验。②观察项目:转染前后细胞增殖能力和细胞凋亡能力的检测应用流式细胞分析仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法凋亡检测试剂盒完成。smad4的表达及部分与细胞周期调控相关基因(p16、细胞周期调控激酶4和细胞周期因子E)和细胞凋亡基因(半胱天冬酶2和半胱天冬酶3)表达变化应用免疫印迹法和荧光免疫组化方法检测。结果:①转染前后细胞增殖能力和细胞凋亡能力流式细胞分析仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法测定结果:smad4基因过表达调控人血管平滑肌细胞增殖能力下降DNA合成前期细胞明显增加[(72.33±4.35)%],正常培养细胞DNA合成前期细胞数相对较少[(45.88±1.58)%]。②smad4的表达及部分与细胞周期调控相关基因免疫印迹法和荧光免疫组化方法检测结果:转染后细胞凋亡能力增加;细胞周期抑制基因p16表达增加,细胞周期调控激酶4和细胞周期因子E表达下降,凋亡相关基因半胱天冬酶2和半胱天冬酶3表达增加。结论:smad4基因对血管平滑肌细胞增殖能力的抑制作用主要通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的发生而实现。转化生长因子β信号传导通路对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用除了能够有效阻滞细胞周期的演进外,还能够诱导细胞凋亡。

细胞内信号转导分子——Smad7在人牙胚发育中的表达和意义

目的 探讨Smad7在TGF_β调节牙胚发育过程中的作用。方法 采用免疫组化ABC法观察Smad7在人牙胚发育各个时期的表达分布及其变化情况。结果 人牙胚发育各个时期均表达Smad7,但各期分布模式有所不同。Smad7在不同发育时期牙胚中的分布与TGF_β及其特异的信号转导分子Smad2、3有相似之处。 结论 Smad7可能在TGF_β调节成釉细胞和成牙本质细胞分化的信号转导通路中起一定的作用。

细胞因子信号转导抑制分子3与肿瘤关系的研究进展

细胞因子与相应的受体结合可导致信号传导通路的活化,而将细胞因子的信号由胞膜传到胞浆并最终传至胞核,并引起目的基因的表达。已经发现的10余条细胞因子信号传导通路,其中Janus激酶/信号转导和转录激活子（JAK/STAT）系统涉及细胞因子的范围较为广泛。过去研究细胞因子信号的传入较多,较少观察这些信号是如何中止或衰减。

信号转导与转录激活因子3:非多肽类小分子抑制剂

信号转导与转录激活因子(STAT)蛋白家族共有7位成员(STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5a、STAT5b和STAT6),它们在细胞中发挥着信号转导和转录因子的双重作用。其中,STAT3在肿瘤的发生、发展和转移,炎症反应,缺血再灌注损伤等多种病理生理过程中发挥着重要的作用,尤其是STAT3的持续异常激活与肿瘤的生长与转移密切相关。抑制STAT3的过度激活是治疗肿瘤的重要方法之一。目前,靶向STAT3的抑制剂主要分成2类:多肽类和拟肽类,非多肽类小分子抑制剂。大部分用于肿瘤防治的STAT3抑制剂都是非多肽类小分子抑制剂。文章针对目前已报道的STAT3非多肽类小分子抑制剂的研究进展进行综述。

信号转导和转录激活因子3与淋巴瘤关系及分子靶向治疗的研究进展

信号转导和转录激活因子3(signal transductions and activators of transcription 3,STAT3)在各种细胞系与组织中广泛表达,参与细胞增殖、分化、衰老、凋亡等生理过程的调控。STAT3在多种肿瘤中高表达并持续激活,在肿瘤的发生发展中起关键作用。淋巴瘤是一类起源于淋巴造血系统的单克隆增殖性疾病,病理类型较为复杂,具有高度异质性,其发病机制尚未完全阐明。近年研究发现STAT3在各种类型淋巴瘤中异常表达,本文就STAT3的生物学作用、国内外关于STAT3与淋巴瘤关系以及分子靶向治疗的研究进展进行综述。阐明STAT3与淋巴瘤发生发展的关系,将为淋巴瘤的临床诊断和治疗提供更多思路。

转化生长因子-β及其Smad信号转导的研究进展

转化生长因子-β（TGF-β）是具有多种生物学活性的多肽类细胞因子,在细胞的增殖、分化、凋亡等过程中起重要的调节作用,与炎症、纤维化、肿瘤等关系密切。Smads蛋白作为TGF-β下游的信号蛋白分子,是将TGF-β信号从细胞外转导到细胞核内的关键因子,在细胞水平介导TGF-β的生物学效应。本文就近年来国内外在TGF-β及其Smad跨膜信号转导、主要生物学作用及与风湿性疾病关系的研究进展作一综述如下。

弓形虫14-3-3信号转导蛋白基因亚克隆及鉴定

目的 将弓形虫 14 3 3(Toxo14 3 3)信号转导蛋白基因亚克隆入表达载体pBK CMV ,用于寻找弓形虫新的诊断和候选疫苗分子以及寄生虫 宿主相互作用等研究。方法 根据Toxo14 3 3核苷酸序列设计并合成一对引物 ,以弓形虫速殖子mRNA为模板 ,RT PCR法扩增Toxo14 3 3DNA片段 ,通过TA连接将其克隆入 pGEM T载体、经测序证实序列完全正确。再将该目的基因亚克隆入表达载体 pBK CMV中 ,转化大肠杆菌XL1 blue,提取质粒 ,经双酶切法和以该质粒为模板PCR法证实。结果 Toxo14 3 3信号蛋白基因ORF含 798bp ,编码 2 6 5个氨基酸。 结论 获得表达质粒pBK CMV/Toxo14 3 3阳性重组体 ,为原核和真核基因表达奠定了基础。

SMADs介导的TGF-β信号转导通路及其在放射性肺损伤中的作用

放射性肺炎-纤维化是人体受到大剂量或累积剂量放射源照射后所致的肺损伤,是临床肺纤维化疾病的一种特殊类型,是放射性核事故、临床放射治疗、骨髓移植前照射预处理、术后放疗预防肿瘤复发等所致的常见并发症,能引起肺的严重损伤;晚期由于大量肺实质被胶原纤维所取代,可发生呼吸功能障碍甚至死亡.

TGF-β1-Samd3信号转导在星形胶质细胞增殖中的作用

目的探讨TGF-β1对体外培养的星形胶质细胞增殖的影响及其Smad3信号转导机制。方法体外培养的原代星形胶质细胞,传代接种后采用SiRNA基因沉默技术,干扰Smad3基因的表达,RT-PCR验证沉默效果,应用免疫荧光技术观察干扰TGF-β1-Smad3通路后对星形胶质细胞增殖的影响。结果 TGF-β1对星形胶质细胞增殖有明显促进作用,并呈现一定的剂量依赖性;成功沉默Smad3基因后,星形胶质细胞的增殖率明显减低;成功沉默Smad3基因能干扰TGF-β1对星形胶质细胞增殖的促进作用。结论 TGF-β1-Smad3信号转导通路对星形胶质细胞增殖起调节作用。

原发性青光眼患者血清STAT3和SMAD4水平表达在临床早期诊断及分期中的应用价值研究

目的探究血清信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3),SMAD4水平表达在原发性青光眼(primary glaucoma)患者早期诊断及临床分期中的应用价值。方法选取沧州市眼科医院2021年8月~2023年5月收治的原发性青光眼患者86例作为研究组,依据研究组临床症状和视力检查结果分为轻度损伤期(n=30)、中度损伤期(n=34)和重度损伤期(n=22);另选取同期在该院进行体检的健康正常者86例作为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清STAT3和SMAD4表达水平;多因素Logistic回归分析影响原发性青光眼临床分期的相关因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清STAT3和SMAD4对原发性青光眼中/重度损伤期患者的诊断价值。结果研究组血清STAT3(13.96±3.45 ng/ml)和SMAD4(11.23±2.85 ng/ml)表达水平均显著高于对照组(9.83±1.72 ng/ml,7.78±1.95 ng/ml),差异有统计学意义(t=9.935,9.265,均P<0.05)。轻度损伤期、中度损伤期和重度损伤期组原发性青光眼患者血清STAT3(11.88±2.52 ng/ml,13.85±3.51 ng/ml,16.96±4.63ng/ml)和SMAD4(9.15±1.95 ng/ml,11.23±2.83 ng/ml,14.08±4.12 ng/ml)表达水平均逐渐升高,差异具有统计学意义(F=13.085,17.513,均P<0.05)。轻度损伤期、中度损伤期和重度损伤期患者眼压(24.21±5.03 mmHg,28.16±6.31 mmHg,32.26±7.57 mmHg)比较,差异有统计学意义(F=10.577,P<0.05)。血清STAT3[OR(95%CI)=2.728(1.409~5.281)],SMAD4[OR(95%CI)=2.849(1.507~5.387)],眼压[OR(95%CI)=2.435(1.094~5.417)]为影响原发性青光眼临床分期的危险因素(均P<0.05)。血清STAT3,SMAD4二者联合诊断原发性青光眼中/重度损伤期患者的曲线下面积(AUC)为0.963(95%CI:0.899~0.992),优于各自单独诊断(Z=2.558,1.961,P=0.010,0.049),其灵敏度和特异度分别为96.43%,83.33%。结论血清STAT3和SMAD4表达水平越高患者临床症状越严重,二者联合检测对中/重度损伤期患者有较好的诊断价值。

低分子量肝素抑制JAK2/STAT3信号通路缓解高糖诱导的足细胞损伤

目的 探究低分子量肝素(LMH)对高糖环境诱导的人肾小球足细胞(HGPC)功能的调节作用及Janus激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路变化的机制。方法 体外培养HGPC,以30 mmol/L D-葡萄糖诱导细胞建立体外足细胞损伤模型,并分别以1、5、10、15、20μmol/LLMH进行干预,细胞计数试剂盒-8筛选出最佳的药物浓度进行后续研究。将细胞分为对照组、HG组、20μmol/LLMH组、JAK2/STAT3通路抑制剂(AG490)组、20μmol/LLMH+AG490组、20μmol/LLMH+JAK2/STAT3通路激活剂(C-A1)组。5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EDU)法检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹法检测HGPC细胞中JAK2、磷酸化(p)-JAK2、STAT3、p-STAT3、波形蛋白(Vimentin)、纤连蛋白(FN)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮型钙黏蛋白(E-cad-herin)的蛋白表达水平。结果 20μmol/LLMH为干预细胞活力的最佳剂量;与对照组比较,HG组细胞增殖率和E-cad-herin蛋白表达水平降低(均P<0.001),迁移、侵袭能力和p-JAK2、p-STAT3、Vimentin、FN、N-cadherin蛋白表达水平升高(均P<0.001);与HG组相比,LMH给药后细胞增殖率和E-cadherin蛋白表达水平升高(均P<0.001),迁移、侵袭能力和p-JAK2、p-STAT3、Vimentin、FN、N-cadherin蛋白表达水平降低(均P<0.001);与20μmol/L LMH组相比,AG490与LMH合用可以显著增加LMH的作用效果(均P<0.05),而C-A1与LMH合用可以显著减弱LMH的作用效果(均P<0.05)。结论 LMH可通过抑制JAK2/STAT3信号通路蛋白的磷酸化抑制HGPC迁移、侵袭及上皮-间充质转化。

生长因子TGF beta家族信号传导分子Smad2／Smad3在卵巢中功能的研究

除去内分泌的基本调节作用以外，旁分泌／自分泌生长因子的作用也在生殖调控中有着极其重要的意义，并且与卵巢肿瘤的发生和演变密切相关。TGFβ(Transforming growth factor beta)超基因家族即是其中之一。该家族包括：TGFβ，Activin，inhibin，GDF-9，BMP，MIS等成员。这些因子在甾体激素的发生，

细胞因子信号转导抑制因子3在早产和足月产胎盘组织中的不同表达

目的分析细胞因子信号转导抑制因子3（SOCS3）在早产和足月产胎盘组织中的表达,探讨该因子在早产发生中的意义。方法选取2013年2~10月解放军第三〇九医院收治的自发性早产患者30例（早产组）,足月妊娠妇女30例（足月组）,两组依据分娩方式的不同各分为阴道产、剖宫产,各15例,收集患者的绒毛、脐带、胎膜的胎盘组织,应用免疫组织化学法检测两组孕妇各胎盘组织中的SOCS3蛋白表达情况;半定量聚合酶链反应法检测SOCS3-mRNA在胎膜的表达情况,比较2组以及组织部位间SOCS3蛋白及基因表达强度。结果早产组所有患者SOCS3蛋白均表达阳性或强阳性,足月组蛋白表达程弱阳性或阴性,其中早产组SOCS3蛋白主要表达于细胞核和细胞质,足月组主要表达于细胞质;早产组绒毛、胎膜、脐带中SOCS3蛋白表达阳性率显著强于足月组对应组织（P〈0.01）。结论 SOCS3蛋白表达强度与早产的发生、发展机制存在一定的联系,但与分娩方式无关。

HIP-55介导胞内信号转导的分子机制研究

HIP-55(HPK1-interacting protein of 55 ku,又名DBNL,SH3P7,mAbp1)是一种与HPK-1相结合分子量为55 ku,由多个具有蛋白相互作用结构域构成的接头蛋白。其N端含有肌动蛋白结合结构域C端具有SH3结构域。HIP-55能够通过细胞内信号转导调控细胞内吞、迁移、骨架重排等生物功能并且在多种疾病病理生理过程中发挥重要作用。该文将对HIP-55蛋白生物学功能及其胞内信号转导通路参与疾病病理过程分子机制进行综述。

转化生长因子胞内信号蛋白Smad2/3在糖尿病大鼠肾脏表达的动态观察及意义研究

目的:动态观察大鼠糖尿病肾病发生发展过程中TGF-β1及其下游信号分子Sm ad2/3在肾脏的表达及定位变化,探讨TGF-β1-Sm ad2/3信号通路在糖尿病肾病(DN)肾纤维化发病机制中的作用。方法:链脲菌素诱导大鼠糖尿病肾病,以免疫组化、W estern b lotting及荧光实时定量PCR(RT-PCR)的方法动态观察糖尿病肾病发生发展过程中大鼠肾脏TGF-β1、Sm ad2/3蛋白及mRNA表达,并以RT-PCR方法观察结缔组织生长因子(CTGF)、胶原-3(COL-Ⅲ)、纤溶酶原激活剂抑制因子-1(PAI-1)mRNA表达。结果:TGF-β1在糖尿病肾病(DN)大鼠肾小管表达明显多于正常组(P<0.05);Sm ad2/3蛋白主要以胞浆表达阳性为主,部分呈胞核表达阳性;Sm ad2/3蛋白及mRNA从2周起表达明显多于正常对照组(P<0.05),且随着糖尿病进展有逐渐增加的趋势。16周DN组大鼠肾脏TGF-β1、Sm ad2、CTGF、COL-Ⅲ、PAI mRNA表达显著高于正常对照组(P<0.05)。结论:TGF-β1-Sm ad2/3信号转导通路参与了糖尿病肾病肾脏纤维化形成的信号转导过程,伴随着Sm ad2/3信号蛋白表达的增多及入核增加,CTGF、COL-Ⅲ、PAI-1等基因转录增加,导致肾脏细胞外基质的大量沉积,这是细胞因子TGF-β1导致糖尿病肾病肾纤维化进展可能的信号转导途径之一。

黄芪在哮喘大鼠气道重塑模型中对TGF-β1/Smad3信号通路的调控

目的:研究转换生长因子β1(TGF-β1)/Smad3信号通路在哮喘气道重塑中的作用,探讨黄芪对TGF-β1/Smad3信号通路及哮喘气道重塑的调控作用。方法:SPF级雄性SD大鼠30只随机分为3组,分别为对照组(A组)、哮喘组(B组)、黄芪组(F组),每组10只。用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立大鼠哮喘模型。应用图像分析技术测定肺内支气管壁厚度(Wat)及平滑肌厚度(Wam)等重塑指标;免疫组化法及RT-PCR法检测肺组织TGF-β1、P-Smad3蛋白及mRNA的表达。结果:哮喘组大鼠Wat、Wam较对照组显著增加(均P<0.01),黄芪组与哮喘组比较有显著降低(均P<0.01),但仍高于对照组(P<0.01);免疫组化染色阳性结果呈棕黄色,TGF-β1蛋白表达于胞浆,P-Smad3蛋白表达于胞浆和胞核,主要表达于支气管上皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞及散在的炎性细胞。哮喘组TGF-β1和P-Smad3的蛋白表达均显著高于对照组(均P<0.01);黄芪组TGF-β1、P-Smad3的蛋白表达均显著低于哮喘组(均P<0.01),但仍高于对照组(均P<0.01)。肺组织中TGF-β1 mRNA及Smad3 mRNA表达:哮喘组TGF-β1和P-Smad3的蛋白表达均显著高于对照组(均P<0.01);黄芪组TGF-β1、P-Smad3的蛋白表达均显著低于哮喘组(均P<0.01),但仍高于对照组(均P<0.01)。结论:TGF-β1/Smad3信号通路参与了哮喘气道重塑过程,黄芪可通过调控TGF-β1/Smad3信号通路而拮抗气道重塑。

TGFβ1对照射的人肺成纤维细胞细胞周期的影响及其信号转导机制

目的 :检测转化生长因子β1(TGFβ1)对正常及γ射线照射的人肺成纤维细胞 (HLF)的增殖活力及细胞周期的影响 ,并初步探讨其信号转导机制。方法 :培养HLF ,经 3Gyγ射线照射后 ,应用 0 .0 1、0 .1、1和 10 μg/L的TGFβ1处理。采用MTT比色法、DNA倍体分析、免疫酶 /荧光细胞化学及流式细胞仪蛋白质分析等方法 ,检测细胞增殖活力、细胞周期的变化 ,以及信号蛋白Smad3和Smad4表达的变化。结果 :γ射线照射的HLF经 10 μg/L的TGFβ1处理后 ,其增殖活力增强 ,处于S期的细胞增多 ,信号蛋白Smad4发生核转位 ,同时信号蛋白Smad3表达增加。结论 :一定剂量的TGFβ1可通过调控γ射线照射的HLF的细胞周期促进其增殖 。