血清细胞程序性死亡蛋白5、信号转导与转录激活因子1水平与宫颈鳞状细胞癌患者临床特征及预后的关系

目的探讨血清细胞程序性死亡蛋白5(PDCD5)、信号转导与转录激活因子1(STAT1)水平与宫颈鳞状细胞癌(CSCC)患者临床特征及预后的关系。方法选取68例CSCC患者和60例健康体检者,分别纳入CSCC组和健康组。比较两组受试者及不同临床特征CSCC患者血清PDCD5、STAT1水平。CSCC患者预后的影响因素采用多因素Cox回归模型分析。结果CSCC组患者血清PDCD5、STAT1水平均明显低于健康组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。有淋巴结转移、分化程度为低分化、临床分期为Ⅲ+Ⅳ期CSCC患者血清PDCD5、STAT1水平分别低于无淋巴结转移、分化程度为中高分化、临床分期为Ⅰ+Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。随访12个月,68例CSCC患者中,生存62例,死亡6例。多因素Cox分析结果显示,血清PDCD5﹤0.75 ng/ml、STAT1﹤54.69μg/L、淋巴结转移均是CSCC患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.05)。结论CSCC患者血清PDCD5、STAT1水平较低,血清PDCD5﹤0.75 ng/ml、STAT1﹤54.69μg/L、淋巴结转移均是CSCC患者预后不良的独立危险因素。

基于IL-6/STAT3信号通路探讨miR-34a-5p过表达对溃疡性结肠炎的影响及小檗碱的干预作用

目的基于白细胞介素6(IL-6)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路探讨微小RNA-34a-5p(miR-34a-5p)过表达对溃疡性结肠炎(UC)的影响及小檗碱(BBR)的干预作用。方法体外传代培养人结肠癌HT-29细胞。取传3代、对数生长期、生长状态良好的HT-29细胞,随机分为空白对照组、NC mimics组、miR-34a-5p mimics组,NC mimics组和miR-34a-5p mimics组分别转染NC mimics、miR-34a-5p mimics,空白对照组不予转染。转染6 h更换新鲜培养基继续培养48 h,收集细胞,采用RT-qPCR法验证转染效率。收集三组转染后细胞,采用CCK-8法检测细胞活力;分离三组培养上清液,采用ELISA法检测IL-6、IL-1β、TNF-α含量;收集三组转染后细胞,分别采用RT-qPCR法、Western blotting法检测IL-6、STAT3 mRNA和蛋白表达。取HT-29细胞,加入LPS刺激48 h,建立UC细胞模型。取UC细胞,分别加入0、2.5、5、10、20、40、80、160、320μg/mL BBR干预24 h,采用CCK-8法检测细胞活力。随机将UC细胞分为模型组和BBR组,BBR组予BBR干预24 h,模型组不予BBR干预。分离两组培养上清液,采用ELISA法检测IL-6、IL-1β、TNF-α含量;取两组干预24 h细胞,采用RT-qPCR法检测miR-34a-5p以及IL-6、STAT3mRNA表达。结果miR-34a-5p mimics组miR-34a-5p相对表达量高于NC mimics组和空白对照组(P均<0.05),NC mimics组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-34a-5p mimics组细胞活力低于NC mimics组和空白对照组(P均<0.05),NC mimics组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-34a-5p mimics组培养上清液IL-6、IL-1β、TNF-α含量均低于NC mimics组和空白对照组(P均<0.05),NC mimics组与空白对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。miR-34a-5p mimics组IL-6、STAT3 mRNA以及IL-6蛋白相对表达量均低于NC mimics组和空白对照组(P均<0.05),NC mimics组与空白对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。40、80、160、320μg/mL BBR干预24 h UC细胞活力均高于0、2.5、5、10、20μg/mL BBR干预24 h UC细胞(P均<0.05),故选择20μg/mL BBR进行后续实验。BBR组培养上清液IL-6、IL-1β、TNF-α含量均低于模型组(P均<0.05);BBR组miR-34a-5p相对表达量高于模型组,IL-6、STAT3 mRNA相对表达量均低于模型组(P均<0.05)。结论miR-34a-5p过表达能够通过抑制IL-6/STAT3信号通路减轻UC炎症反应;BBR则能通过上调miR-34a-5p表达和抑制IL-6/STAT3信号通路,减轻UC炎症反应,阻延UC癌变。

白细胞介素-2和信号转导和转录激活因子5在宫颈病变患者血清、宫颈组织和细胞中的表达及意义

目的探讨白细胞介素-2(IL-2)、IL-2受体(IL-2R)和信号转导和转录激活因子5(STAT5)在宫颈病变患者血清、宫颈组织和细胞中的表达变化及其与宫颈病变严重程度的关系。方法选择2020年6月至2021年6月新疆生产建设兵团医院门诊或住院治疗的25例宫颈鳞状细胞癌患者(宫颈鳞状细胞癌组)、40例慢性宫颈炎患者(慢性宫颈炎组)和50例体检健康女性(健康对照组)为研究对象,应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测3组受试者人乳头瘤病毒(HPV)16/18感染情况,酶联免疫吸附试验法检测3组受试者血清和宫颈脱落细胞中IL-2水平,实时荧光定量PCR法检测3组受试者宫颈脱落细胞中IL-2、IL-2R、STAT5a和STAT5b mRNA水平。另外,收集新疆医科大学第一附属医院和新疆生产建设兵团医院病理科石蜡包埋的慢性宫颈炎组织35例和宫颈鳞状细胞癌组织87例(高分化30例,中分化42例,低分化15例),免疫组织化学法检测慢性宫颈炎和宫颈鳞状细胞癌组织中IL-2、IL-2R、STAT5和磷酸化STAT5(p-STAT5)蛋白的表达。结果慢性宫颈炎组和宫颈鳞状细胞癌组患者HPV16/18阳性率高于健康对照组(χ^(2)=6.762、13.868,P<0.05);宫颈鳞状细胞癌组患者HPV16/18阳性率显著高于慢性宫颈炎组(χ^(2)=7.870,P<0.05)。慢性宫颈炎组和宫颈鳞状细胞癌组HPV16/18阳性患者血清和宫颈脱落细胞中IL-2水平低于健康对照组,宫颈鳞状细胞癌组HPV16/18阳性患者血清和宫颈脱落细胞中IL-2水平低于慢性宫颈炎组(P<0.05);慢性宫颈炎组和宫颈鳞状细胞癌组HPV16/18阴性患者血清和宫颈脱落细胞中IL-2水平低于健康对照组,宫颈鳞状细胞癌组HPV16/18阴性患者血清和宫颈脱落细胞中IL-2水平低于慢性宫颈炎组(P<0.05);3组HPV16/18阳性受试者血清和宫颈脱落细胞中IL-2水平低于HPV16/18阴性受试者(P<0.05)。HPV16/18阳性受试者宫颈脱落细胞中与血清中IL-2水平呈正相关(r=0.665,P<0.05)。慢性宫颈炎组和宫颈鳞状细胞癌组患者宫颈脱落细胞中IL-2、IL-2R、STAT5a和STAT5b mRNA相对表达量低于健康对照组,宫颈鳞状细胞癌组患者宫颈脱落细胞中IL-2、IL-2R、STAT5a和STAT5b mRNA相对表达量低于慢性宫颈炎组(P<0.05)。宫颈鳞状细胞癌宫颈组织中IL-2、IL-2R阳性表达率显著低于慢性宫颈炎组织,STAT5和p-STAT5阳性表达率显著高于慢性宫颈炎组织(P<0.05)。高分化型宫颈鳞状细胞癌宫颈组织中IL-2、IL-2R阳性表达率显著高于中分化型和低分化型,STAT5和p-STAT5阳性表达率低于中分化型和低分化型(P<0.05);中分化型宫颈鳞状细胞癌宫颈组织中IL-2、IL-2R阳性表达率显著高于低分化型,STAT5和p-STAT5阳性表达率低于低分化型(P<0.05)。结论HPV16/18阳性者血清和宫颈脱落细胞中IL-2水平低于HPV16/18阴性者,且随宫颈病变程度加重而降低;宫颈病变组织和细胞中IL-2和IL-2R表达随宫颈病变分化程度加重而降低,IL-2可能通过JAK/STAT通路激活STAT家族蛋白STAT5a、STAT5b参与宫颈癌的发生、发展;宫颈脱落细胞和血清IL-2联合检测可预测宫颈病变的进展。

血液病患者信号转导及转录激活子5和叉头状转录因子3的表达

目的观察恶性血液病患者外周血中单个核细胞磷酸化STAT5及Foxp3的表达水平及其相关性。方法采用蛋白磷酸化流式细胞术分别检测45例急性白血病患者(AL)、23例慢性白血病(CL)、29例骨髓增生异常综合征(MDS)、20例重型再生障碍性贫血(SAA)及38例对照组外周血单个核细胞磷酸化STAT5(P-STAT5)及Foxp3阳性细胞的百分率。结果PSTAT5表达AL组(2.29±0.79)%、CL组(2.45±0.88)%、MDS组(2.21±0.75)%都较对照组(0.54±0.15)%增高,差异具有统计学意义(P<0.05),SAA组P-STAT5表达(0.43±0.17)%较对照组降低,差异无统计学意义(P>0.05);Foxp3表达AL组(3.86±1.13)%、CL组(3.60±1.10)%、MDS组(4.01±1.19)%高于对照组(0.89±0.38)%,差异具有统计学意义(P<0.05),SAA组Foxp3表达(0.57±0.21)%较对照组降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。AL、CL、MDS、SAA各组P-STAT5与Foxp3表达水平都呈正相关(P<0.05)。结论 STAT5及Foxp3可能共同参与了AL、CL、MDS、SAA这几类恶性血液病的发生过程,同时测定可以提供有临床意义的实验依据。

miR-125a-5p通过靶向STAT3减轻戊四唑诱导的癫痫大鼠神经功能障碍和炎症反应

目的:探讨miR-125a-5p通过靶向信号转导与转录激活因子3(STAT3)对戊四唑(PTZ)诱导的癫痫大鼠神经功能障碍和炎症反应的影响。方法:采用PTZ点燃法建立大鼠癫痫模型,并将其随机分为6组:Con组、PTZ组、PTZ+agomir NC组、PTZ+miR-125a-5p agomir组、PTZ+miR-125a-5p agomir+pcDNA组和PTZ+miR-125a-5p agomir+pc-STAT3组,评价miR-125a-5p对大鼠癫痫持续时间、潜伏期、惊厥次数和严重程度的影响。qRT-PCR检测miR-125a-5p和STAT3 mRNA表达;改良神经系统严重程度评分(mNSS)、开场实验和Rotarod测试评价癫痫大鼠的神经功能;Morris水迷宫实验评价癫痫大鼠的认知功能;免疫染色观察海马CA1和CA3区域神经元凋亡;ELISA检测海马组织炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18)水平;Western blot检测海马组织中STAT3蛋白表达;双荧光素酶实验验证miR-125a-5p和STAT3的关系。结果:在PTZ诱导的癫痫大鼠中,miR-125a-5p表达上调,STAT3表达下调,且miR-125a-5p靶向抑制STAT3表达。与PTZ组相比,PTZ+miR-125a-5p agomir组癫痫大鼠的潜伏期缩短,癫痫评分降低,癫痫发作时间和次数减少,mNSS降低,掉落潜伏期及外围区域的移动距离、开放区域的总距离延长,逃避潜伏期显著降低,穿越平台次数及停留在目标象限的时间和游泳距离均增加,海马组织TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18表达降低,CA3和CA1区的NenN+细胞增多(P<0.05);STAT3过表达可逆转miR-125a-5p agomir对癫痫大鼠神经功能障碍及炎症反应的缓解作用(P<0.05)。结论:miR-125a-5p通过靶向下调STAT3,减轻PTZ诱导的癫痫大鼠神经功能障碍和炎症反应。

胃腺癌信号转导与转录调控因子-3、-5和白细胞介素-17A表达及相关性

目的检测胃腺癌信号转导与转录调控因子(STAT)-3、-5和白细胞介素(IL)-17A的表达,探讨三者的关系及临床意义。方法确诊为胃腺癌并行手术治疗的106例患者作为观察组,胃黏膜高级别上皮内瘤变的蜡块组织21例作为对照组1,胃黏膜低级别上皮内瘤变蜡块组织21例作为对照组2,非肿瘤性胃黏膜蜡块组织21例作为对照组3。应用免疫组化方法检测4组中STAT-3、STAT-5和IL-17A的表达。结果 4组中STAT-3、STAT-5和IL-17A的表达差异有统计学意义(均P<0.001),观察组中STAT-3、STAT-5和IL-17A的表达与肿瘤的最大径、浸润深度密切相关,STAT-3和STAT-5的表达均与肿瘤的淋巴结转移和脉管累犯密切相关(均P<0.05)。相关分析显示STAT-3和IL-17A、STAT-5和IL-17A之间均呈正相关(均P<0.05)。结论胃腺癌中STAT-3、STAT-5和IL-17A高表达对肿瘤的形成和进展均有促进作用,三者可能具有一定的协同作用。

血清ANXA5、SFRP5、STAT6与支气管哮喘患儿1年内再入院的关系分析

目的分析血清膜联蛋白A5(ANXA5)、分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)、信号转导转录激活因子6(STAT6)与支气管哮喘患儿1年内再入院的关系。方法选取2018年1月至2022年8月该院收治的210例支气管哮喘患儿作为研究对象,根据支气管哮喘患儿1年内是否再入院分为再入院组和未再入院组,再入院组30例,未再入院组180例。比较再入院组和未再入院组首次入院时血清ANXA5、SFRP5、STAT6水平,采用多因素Logistic回归分析支气管哮喘患儿1年内再入院的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清ANXA5、SFRP5、STAT6对支气管哮喘患儿1年内再入院的预测价值。结果再入院组血清ANXA5、SFRP5水平低于未再入院组,血清STAT6水平高于未再入院组,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清ANXA5、SFRP5水平升高是支气管哮喘患儿1年内再入院的保护因素(OR<1,P<0.05),血清STAT6水平升高是支气管哮喘患儿1年内再入院的危险因素(OR>1,P<0.05)。血清ANXA5、SFRP5、STAT6单项预测支气管哮喘患儿1年内再入院的曲线下面积(AUC)均>0.700,且3项联合检测预测的AUC为0.856。结论血清ANXA5、SFRP5、STAT6水平与支气管哮喘患儿1年内再入院密切相关,对预测患儿1年内再入院有一定价值。

当归多糖诱导K562细胞向红系样细胞分化及其信号转导通路研究

目的探讨当归多糖(APS)诱导K562细胞向红系样细胞分化相关的信号转导通路。方法实验分组:对照组采用常规方法培养;APS组在常规培养基础上加入APS(终浓度100～500mg/L),分别培养12h、1d、2d、3d。联苯胺染色与分光光度法检测经APS诱导后K562细胞向红系样细胞分化的血红蛋白表达;激光扫描共焦显微镜观察JAK2、信号转导和转录激活因子5(STAT5)在各组细胞内的分布;Westernblotting检测细胞核、质蛋白中JAK2、STAT5的表达变化;免疫沉淀法检测质蛋白中JAK2的磷酸化改变。结果经APS诱导后K562细胞的联苯胺染色阳性率增高,随着APS诱导浓度增加K562细胞合成血红蛋白也增加;APS诱导K562细胞12h、24h和48h,核蛋白中STAT5表达较对照组增加,质蛋白中STAT5表达减少;APS组与对照组K562细胞的JAK2表达未见显著差异,但APS组的JAK2磷酸化强于对照组。结论APS可诱导K562细胞向红系样细胞分化,其机制可能与APS启动JAK2的酪氨酸磷酸化,继而引起STAT5核转位,通过信号转导通路的调控影响细胞的增殖分化。

miR-21-5p靶向JAK/STAT信号通路抑制Th1细胞极化

目的探讨miR-21-5p对1型辅助性T细胞(Th1细胞)极化相关信号通路的调控作用。方法提取小鼠脾单个核细胞,用免疫磁珠阴性分选试剂盒分离初始(naive)CD4^(+)T细胞,用抗小鼠CD3ε,CD28和白细胞介素4(IL-4)单克隆抗体及小鼠IL-12和IL-2混合因子诱导体系诱导初始CD4^(+)T细胞向Th1细胞极化,同时转染miR-21-5p模拟物或模拟物对照,分别命名为Th1诱导组、诱导+模拟物对照组和诱导^(+)miR-21-5p模拟物组,72 h后用流式细胞术检测CD4和干扰素γ(IFN-γ)双阳性(CD4^(+)IFN-γ^(+))细胞百分比;用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Th1细胞极化相关关键转录因子和细胞因子mRNA表达水平;Western印迹法检测Th1细胞极化相关通路关键蛋白及其磷酸化水平。结合双荧光素酶报告系统验证miR-21-5p作用靶标关键细胞因子IFN-γ、信号通路受体IL-12受体β_(1)(IL-12Rβ_(1))和信号转录与转录激活因子1(STAT1)的表达。结果经免疫磁珠分选获得高表达CD62L的初始CD4^(+)T细胞。与Th1诱导组和诱导+模拟物对照组相比,诱导+miR-21-5p模拟物组CD4^(+)IFN-γ^(+)细胞百分比显著降低(P<0.01);Th1细胞极化相关Janus激酶(JAK)/STAT信号通路关键转录因子STAT1(P<0.01)、STAT4(P<0.05)和T盒21转录因子(T-bet)(P<0.01)mRNA表达显著下调,IFN-γ(P<0.01)和IL-12Rβ_(1)(P<0.05)mRNA表达水平亦显著下调,同时STAT1和STAT4蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.01)。结合双荧光素酶报告系统结果表明,miR-21-5p模拟物可分别特异性靶向结合IFN-γ(P<0.01),IL-12Rβ_(1)(P<0.01)和STAT1(P<0.05)基因的3′-非翻译区,而对应靶向位点突变后miR-21-5p模拟物不影响其表达。结论miR-21-5p可靶向下调IFN-γ,IL-12Rβ_(1)和STAT1表达,抑制IL-12和IFN-γ介导的JAK/STAT信号通路活化,从而抑制Th1细胞极化。

有氧运动干预非酒精性脂肪肝小鼠肝脏JAK2/STAT5信号通路的变化

背景:酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路在脂质代谢中起重要作用,运动有效预防与治疗非酒精性脂肪肝与改善内脏脂质沉积和脂质代谢密切相关。目的:探讨有氧运动对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路的影响及可能作用机制。方法:6周龄C57BL/6雄性小鼠48只,分为普通膳食组及高脂膳食诱导组(n=24),第10周末2组各随机抽取4只进行油红O染色观察肝脏病理形态变化。确定造模成功后,普通膳食组随机分为普通膳食+安静组、普通膳食+运动组(n=10);高脂膳食诱导组随机分为非酒精性脂肪肝+安静组、非酒精性脂肪肝+运动组(n=10),连续干预8周,直至实验结束。观察小鼠肝脏病理形态变化,检测小鼠肝脏组织泌乳素受体、肝脏酪氨酸激酶2、信号传导及转录激活因子5a、肝脏酪氨酸激酶2磷酸化、信号传导及转录激活因子5磷酸化蛋白表达量。结果与结论:(1)与普通膳食+安静组相比,非酒精性脂肪肝+安静组肝细胞脂肪变性加重,肝脏内酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子信号通路蛋白表达量降低;(2)与非酒精性脂肪肝+安静组相比,非酒精性脂肪肝+运动组的肝细胞脂肪变性减轻,肝脏内酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路蛋白表达量升高;(3)肝脏病理形态指标与催乳素受体、肝脏酪氨酸激酶2、肝脏酪氨酸激酶2磷酸化、信号传导及转录激活因子5磷酸化均呈显著负相关(P<0.05);(4)提示有氧运动干预可通过调节非酒精性脂肪肝小鼠肝脏酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路,改善肝内脂质沉积及肝脏脂肪变性程度。

小陷胸汤对5-氟尿嘧啶介导的小鼠肠黏膜损伤的保护作用研究

目的:探究小陷胸汤对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)介导的小鼠肠黏膜损伤的保护作用。方法:将100只SPF级雄性ICR小鼠随机分为正常对照组、模型组、小陷胸汤低、中、高剂量(8.3、16.6、33.2g/kg)组。除正常对照组外,其余各组采用5-FU(30 mg/kg,ip,7 d)诱导肠黏膜损伤小鼠模型。小陷胸汤给药组造模同时按照设定剂量以10 mL·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,正常对照组和模型组给予等量蒸馏水,连续处理7 d。采用苏木素-伊红染色法(HE)观察小肠的病理形态学变化并测定肠绒毛高度/隐窝深度(VH:CD)比值;采用阿利新蓝染色法(AB)测定小肠黏膜杯状细胞数量;采用分光光度法检测血清内毒素(ET)、D-乳酸(D-LA)及小肠组织二胺氧化酶(DAO)水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测小肠组织IL-6、信号转导和转录激活因子3(STAT3)和表皮生长因子受体(EGFR)mRNA表达;采用Western blot法检测小肠组织IL-6、STAT3及EGFR蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型组小鼠体质量显著降低,腹泻评分、粪便质量、粪便含水量及小肠推进率明显升高(P<0.01),小肠黏膜VH:CD比值和杯状细胞数量降低(P<0.01),血清ET和D-LA水平升高,小肠组织DAO水平降低(P<0.05),脾指数和胸腺指数降低(P<0.01),血清IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05),小肠组织IL-6、STAT3 mRNA表达升高,EGFR mRNA表达降低(P<0.01);小肠组织IL-6、STAT3蛋白表达升高,EGFR蛋白表达降低(P<0.01)。与模型组相比,小陷胸汤能够明显改善上述指标(P<0.05)。结论:小陷胸汤对5-FU介导的肠黏膜损伤具有保护作用,其作用机制可能与小陷胸汤激活EGFR信号转导,下调IL-6/STAT3信号通路,减轻5-FU诱导的肠黏膜炎症反应,改善免疫功能有关。

微小RNA-98-5p靶向Kruppel样转录因子9对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨微小RNA(miR)-98-5p靶向Kruppel样转录因子9(KLF9)对大鼠心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤的保护作用。方法50只大鼠随机分为假手术组、模型组、miR-98-5p agomir组、agomir-NC组及miR-98-5p agomir+pcDNA-3.1-KLF9组,每组10只。通过冠状动脉结扎法建立MI/R注模型。HE染色观察心肌组织病理情况;TUNEL检测心肌组织细胞凋亡情况;ELISA检测血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;Real-time PCR检测心肌组织miR-98-5p、KLF9 mRNA表达水平;Western blotting检测心肌组织KLF9、Bax和JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证miR-98-5p与KLF9的关系。结果与假手术组相比,模型组大鼠心肌细胞排列较乱,出现坏死;心肌组织细胞凋亡率、血清CK、CK-MB、LDH含量均升高,心肌组织miR-98-5p表达水平下降,KLF9 mRNA和蛋白及p-JAK2和p-STAT3蛋白表达均升高(P<0.05)。过表达miR-98-5p后,大鼠心肌细胞排列较为整齐,心肌细胞坏死减少;心肌组织细胞凋亡率、血清CK、CK-MB、LDH含量及心肌组织p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均下降(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果验证KLF9是miR-98-5p的靶基因。过表达KLF9逆转了miR-98-5p agomir对心肌损伤大鼠产生的作用。结论MiR-98-5p靶向KLF9改善MI/R大鼠心肌损伤,其机制可能与miR-98-5p调控JAK2/STAT3信号通路抑制心肌细胞凋亡相关。

MicroRNA-136-5p靶向STAT3调控对脊髓损伤大鼠炎症因子的影响

目的研究microRNA-136-5p(miR-136-5p)靶向信号转导和转录激活子3(STAT3)调控对脊髓损伤大鼠炎症因子的影响。方法选取60只SD健康大鼠,随机分为对照组、脊髓损伤组、沉默组及过表达组,每组15只。将脊髓损伤组、沉默组、过表达组大鼠复制脊髓损伤模型,对照组在模型复制期间不做任何处理。无菌环境下将10μlmiR-136-5p慢病毒悬液(病毒滴度为108 TU/ml)注射于沉默组、过表达组大鼠脊髓损伤区。对照组、脊髓损伤组大鼠注射等量的生理盐水。使用BBB评分、联合行为评分法(CBS)对4组大鼠运动功能、脊髓神经功能进行评价,检测4组大鼠脊髓组织白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-21(IL-21)、白细胞介素-23(IL-23)表达水平及STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白相对表达量,以及IL-17 mRNA表达水平。结果沉默组大鼠BBB评分高于脊髓损伤组和过表达组(P<0.05);沉默组大鼠CBS评分低于脊髓损伤组和过表达组(P<0.05)。沉默组大鼠脊髓组织IL-6、IL-21、IL-23表达水平低于脊髓损伤组和过表达组(P<0.05)。沉默组大鼠脊髓组织STAT3、p-STAT3蛋白相对表达量、IL-17 mRNA表达水平均低于对照组、脊髓损伤组及过表达组(P<0.05)。结论脊髓损伤后miR-136-5p沉默可抑制STAT3的表达,进而抑制炎症因子的过度表达,最终抑制脊髓炎症反应。

生长激素慢性刺激对肝脏JAK2-STAT5信号通路的影响

目的:研究生长激素(growth hormone,GH)慢性刺激对肝脏Janus激酶2(Janus kinase 2,JAK2)-信号转导及转录激活因子5(signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)信号通路的影响.方法:动物实验使用健康BALB/c♂小鼠,分为GH慢性刺激组与对照组,每日分别予GH或PBS刺激共2 wk;检测肝脏P-STAT5、信号转导抑制因子(suppressor of cytokine signaling,SOCS)-3 mRNA及生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)水平.细胞实验使用大鼠肝癌细胞H4-II-E,分为GH慢性刺激组与对照组,每日分别予GH或PBS刺激共4 d;检测细胞P-STAT5水平及P-STAT5与DNA的结合水平.结果:动物试验中,小鼠接受GH慢性刺激后,肝脏P-STAT5水平降低,SOCS-3 mRNA水平升高(P<0.05),而GHR水平无变化.细胞实验中,GH慢性刺激同样导致P-STAT5水平下降(P<0.05),同时P-STAT5与DNA的结合水平亦降低(P<0.05).结论:GH慢性刺激可抑制肝脏JAK2-STAT5信号通路,其机制可能是SOCS-3基因的表达增加,从而抑制了STAT5的磷酸化.

白介素-18及信号转导和转录激活因子5在糖尿病大鼠视网膜的表达

目的观察白介素-18(IL-18)及信号转导和转录激活因子5(STAT5)在4～24周糖尿病大鼠视网膜的表达,初步探讨其在糖尿病视网膜病变(DR)中可能的分子机制。方法用限制性片段差异显示聚合酶链反应(RFDD-PCR)技术,建立正常大鼠和糖尿病8周大鼠视网膜基因表达谱。以生物信息学分析两者差异,筛选出候补基因IL-18及STAT5。以半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察IL-18及STAT5在4、8、24周糖尿病大鼠视网膜的表达。结果RFDD-PCR结果显示,正常组IL-18表达明显强于糖尿病组;正常组STAT5无表达,糖尿病组较强表达。RT-PCR结果显示,与正常相比,糖尿病4周时,视网膜高表达IL-18,8周IL-18表达降低,24周表达最低。STAT5在正常及糖尿病4周视网膜未见表达;8周开始表达,24周时最强。结论IL-18表达变化及STAT5的活化与DR发生有关。IL-18的表达不依赖于STAT5的活化。

卵白蛋白诱导哮喘小鼠脾细胞增殖中STAT5的变化

目的 :研究卵白蛋白 (OVA)在哮喘小鼠脾细胞增殖中信号转导蛋白和转录激活因子 5 (STAT5 )的变化 ,探讨STAT5在OVA诱导哮喘小鼠脾细胞增殖中的作用。方法 :经腹腔注射与雾化吸入OVA诱发小鼠哮喘发作。激发后分离小鼠脾细胞 ,采用MTT比色法测定经OVA诱导的脾细胞增殖 ;用双染免疫组化法检查脾细胞中STAT5磷酸化与STAT5抗原的定位。用电泳迁移率变动分析 (EMSA)测定STAT5与DNA探针的结合力。结果 :OVA在体外能明显诱导哮喘小鼠脾细胞增殖 (平均A值为 0 .5 4 3± 0 .112 ) ,呈剂量依赖性 ,与对照组相 (平均A值为 0 .2 0 3± 0 .0 32 )比较差异明显 (P <0 .0 1)。OVA诱导 1、3h ,能诱导哮喘小鼠脾细胞中的STAT5磷酸化 ,脾细胞中出现STAT5 DNA结合带。结论 :OVA能诱导哮喘小鼠脾细胞增殖和脾细胞中的STAT5磷酸化 ,增加STAT5与DNA探针的结合力 。

STAT5在人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内的表达

目的研究信号传导及转录活化因子STAT5在人肝癌细胞内的表达及其酪氨酸磷酸化活化情况。方法分别采用western b lot、流式细胞术(FCM)方法检测人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内STAT 5蛋白和磷酸化STAT 5(P-STAT5)蛋白的表达。结果人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内有STAT 5的表达和酪氨酸(Tyr 694)磷酸化活化。结论STAT 5的异常表达和活化可能在肝癌的发生发展中起重要的作用。

哮喘小鼠肺组织STAT5、STAT6表达及阿奇霉素的影响

目的观察阿奇霉素(AZM)对哮喘小鼠信号转导和转录激活因子5、6(STAT5、STAT6)的影响。方法 BALB/c小鼠24只随机分为三组,A组(哮喘模型组)、B组(阿奇霉素治疗组)、C组(正常对照组)。其中A、B组小鼠于第0、13天分别给予卵清蛋白(OVA)20μg和氢氧化铝1 mg的混悬液致敏,于第21-30天每天给予雾化吸入2%OVA建立哮喘模型,B组于15-30天给予阿奇霉素100 mg/kg/d腹腔注射,C组以0.9%生理盐水代替OVA致敏和激发。所有动物于31天处死,制备肺组织石蜡切片,应用免疫组化方法检测支气管肺组织STAT5、STAT6的表达水平。结果哮喘模型组STAT5、STAT6蛋白表达分别为(23.25±3.28)和(26.11±3.95)明显高于正常对照组(2.33±0.78)和(2.78±0.32)(P<0.01),阿奇霉素治疗组STAT5、STAT6蛋白表达分别为(10.83±1.96)和(11.32±2.03)明显低于哮喘组(P<0.01)。结论 STAT5S、TAT6与哮喘发病相关,阿奇霉素可通过下调STAT5、STAT6的表达抑制气道炎症。

miR-129-5p、p62和STAT3在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨结肠癌组织中miR-129-5p、p62和信号转导与转录激活因子3(STAT3)表达水平与结肠癌进展及预后的关系。方法:选取2013年6月-2016年6月本院收治的113例结肠癌患者为研究对象,术中收集结肠癌组织及癌旁组织(距癌组织≥5 cm)。实时荧光定量(qRT-PCR)法检测结肠癌组织中miR-129-5p、p62 mRNA、STAT3 mRNA表达水平,免疫组织化学染色法检测p62及STAT3蛋白表达水平。分析三者表达与结肠癌患者临床病理特征及预后关系。结果:结肠癌组织中miR-129-5p表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05),p62和STAT3的mRNA表达水平及蛋白高表达率均显著高于癌旁组织(P均<0.05)。miR-129-5p和p62蛋白表达水平与分化程度、浸润深度、TNM分期及淋巴结转移有关(P均<0.05),STAT3蛋白表达水平与浸润深度、TNM分期及淋巴结转移有关(P均<0.05)。miR-129-5p高表达组3年累积生存率显著高于miR-129-5p低表达组(P<0.05)。p62及STAT3蛋白高表达组患者3年累积生存率显著低于p62及STAT3蛋白低表达组(P<0.05)。结肠癌组织中miR-129-5p与STAT3 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.390,P<0.05),p62 mRNA与STAT3 mRNA表达水平呈正相关(r=0.402,P<0.05)。结论:在结肠癌组织中miR-129-5p表达下调,p62、STAT3 mRNA水平及蛋白高表达率均上调,三者表达水平均与浸润深度、TNM分期、淋巴结转移及3年累积生存率有关,可能成为结肠癌预后标志物,为结肠癌临床治疗提供指导。

白介素5与转录激活因子和信号转导子1表达水平及其信号转导对支气管哮喘豚鼠气道炎症影响的研究

目的研究支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素5(IL-5)与支气管上皮细胞转录激活因子和信号转导子1(STAT-1)蛋白表达及其信号转导途径对支气管哮喘(简称哮喘)豚鼠气道炎症的影响。方法豚鼠48只随机分为正常对照组(A组);哮喘组(B组):据不同时间段分为B1组(0h)、B2组(24h)、B3组(72h)、B4组(5d)和地塞米松干预组(C组)。B组与C组采用卵白蛋白(OVA)腹腔注射与雾化吸入诱发豚鼠哮喘发作,A组用0.9%生理盐水代替抗原进行腹腔注射致敏和激发。观察各组豚鼠临床与病理学变化特点,用免疫组织化学测定各组支气管上皮细胞STAT-1的表达,ELISA法测定IL-5的浓度,同时计数BALF中细胞总数和嗜酸粒细胞(EOS)数。结果B组和C组肺组织病理变化为哮喘病理改变特点,气道上皮细胞STAT-1蛋白表达:B1～B4组豚鼠在OVA激发后其分别为(57±9,136±14,95±21,67±30)与A组(13±7)比较差异均有统计学意义(P<0.01);C组(25±7)与B4组(67±30)比较差异有统计学意义(P<0.01);B1～B4组气道上皮细胞STAT-1蛋白表达水平与BALF中EOS和IL-5动态变化呈正相关(r=0.652,P<0.01)和(r=0.699,P<0.05)。结论哮喘存在EOS、T细胞、上皮细胞等炎细胞的聚集、活化及细胞组分的高分泌和气道上皮细胞STAT-1的过度表达与持续活化及其信号转导途径异常,其机制可能与IL-5介导的STAT-1过度表达与持续活化及其信号转导途径和细胞因子紊乱等有关。糖皮质激素可抑制气道上皮细胞STAT-1的表达和上述炎细胞集聚与活化,调控气道炎症的发生、发展和气道重塑。