诱导型一氧化氮合酶反义核酸在脊髓损伤后细胞凋亡和p-p38 MAPK信号转导通路中的作用

目的研究一氧化氮合酶(NOS)反义核酸(ASODN)对脊髓损伤后NOS表达、细胞凋亡、信号转导通路的影响。方法设计并合成诱导型NOS反义寡脱氧核苷酸(ASODN-iNOS)及诱导型NOS无义寡脱氧核苷酸(NSODN-iNOS),微量注入大鼠蛛网膜下腔并制备成脊髓压迫伤动物模型。伤后6 h分别用RT-PCR检测iNOS mRNA表达及用Western blotting检测组织中磷酸化丝裂原激活蛋白激酶(p-p38 MAPK)的变化,用双标染色流式细胞术检测伤后72 h细胞凋亡情况。损伤对照组鞘内注射不含核酸的溶液成分。结果脊髓损伤后组织中存在iNOS的表达和p-p38 MAPK变化;损伤后局部组织中存在明显的细胞凋亡;ASODN-iNOS可以抑制iNOS的表达,并可以显著抑制损伤后p-p38 MAPK的表达和细胞凋亡的发生,与损伤对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论ASODN-iNOS可以抑制脊髓损伤后iNOS的表达和细胞凋亡,ASODN的这种作用可能与p-p38 MAPK信号转导通路有关。

野生蒙古口蘑多糖通过STAT3和HIF-1α通路对LPS诱导的巨噬细胞发挥抗炎调节作用

研究蒙古口蘑多糖提取物对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞)炎症保护作用的机理。用不同预量质量浓度的蒙古口蘑多糖处理RAW264.7细胞,通过CCK-8法检测细胞活性;Griess法测定NO的产生量;酶联免疫吸附测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素1β(IL-1β);实时定量检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、诱导型一氧化氮和酶(iNOS)、核因子κB(NF-κB)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)和环氧化酶2(COX-2)的mRNA表达量;免疫印迹检测HIF-1α、NF-κB、STAT3和COX-2蛋白质的表达量。结果表明,蒙古口蘑多糖提取物作用RAW264.7细胞的最大剂量为100μg/mL;与LPS模型组相比,蒙古口蘑多糖提取物质量浓度0.01、0.1、1、10μg/mL均能有效抑制NO(抑制率分别是38.21%、64.17%、58.16%和79.42%)、TNF-α(抑制率分别为27.91%、36.31%、36.14%、45.09%)和IL-1β(抑制率分别为47.75%、58.47%、60.21%、64.55%)的产生;在质量浓度为10μg/mL的蒙古口蘑多糖提取物作用下,除NF-κB外,HIF-1α、STAT3、COX-2和iNOS的mRNA的表达量均降低;免疫印迹的结果也显示,除NF-κB外,HIF-1α、NF-κB、STAT3及COX-2的蛋白质的表达量均有不同程度的降低。蒙古口蘑多糖提取物对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞具有保护作用,其抗炎的机制主要通过JAK-STAT3及HIF-1α信号通路,而不主要通过NF-κB信号通路发挥作用。

基于TLR2/4-NF-κB/iNOS-NO信号通路研究秦艽水提物对胶原诱导型关节炎大鼠的影响及作用机制

目的:研究秦艽水提物对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠的疗效,并从Toll样受体2/4-核转录因子/诱导型一氧化氮合酶一氧化氮(TLR2/4-NF-κB/iNOS-NO)信号通路探讨其可能的作用机制。方法:SD大鼠随机分为6组,即正常对照组、模型对照组、雷公藤多苷0.005 g/kg组、秦艽水提物8 g/kg、4 g/kg、2 g/kg组。除正常对照组外,其余大鼠均建立CIA大鼠模型。模型成功后,药物组按对应剂量灌胃给药,正常对照组及模型对照组以等体积(10 ml/kg)灌胃双蒸水,每天1次,共28 d。观察并记录实验期间大鼠体重变化及右踝关节肿胀程度;Elisa法检测大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及一氧化氮(NO)含量;Western blot测定大鼠足跖软组织中核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)相关蛋白表达变化。结果:与正常对照组相比,模型对照组血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS及NO含量显著升高;足跖软组织中NF-κB、TLR2及TLR4相关蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。药物干预28 d后,与模型对照组相比,除秦艽水提物2 g/kg组外,其余各给药组大鼠体重显著升高,踝关节肿胀程度显著降低;血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS及NO含量显著下降;足跖软组织中NF-κB、TLR2及TLR4相关蛋白的表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:秦艽水提物对大鼠胶原诱导型关节炎有显著的治疗作用,其作用机制可能与抑制TLR2/4-NF-κB/iNOS-NO信号通路,进而抑制炎症反应有关。

STAT3/iNOS通路在慢性阻塞性肺疾病伴气道重塑中的作用

目的探讨信号传导子及转录活化因子3(STAT3)/诱导型一氧化氮合酶(iNOS)通路在慢性阻塞性肺疾病(COPD)伴气道重塑中的作用。方法(1)采用气管滴注脂多糖加烟熏法构建COPD大鼠模型,并将其分为模型组、STAT3抑制剂组、阳性对照组,每组10只,另取正常大鼠10只作为对照组。建模结束后,给予STAT3抑制剂组大鼠尾静脉注射STAT3特异性抑制剂Stattic,阳性对照组大鼠灌胃醋酸地塞米松溶液,对照组和模型组灌胃生理盐水,均干预28 d。干预结束后,在光学显微镜下计数大鼠肺泡灌洗液中白细胞数量及其他分类细胞比例;采用HE染色法观察大鼠肺组织病理学变化;采用Image J软件测定大鼠支气管管壁面积及支气管平滑肌厚度;采用ELISA检测大鼠肺组织中分泌型IgA(SIgA)、分泌成分(SC)、转化生长因子β1(TGF-β1)和血管内皮生长因子(VEGF)含量;采用Western blot检测大鼠肺组织中STAT3磷酸化水平和iNOS蛋白表达水平。(2)将大鼠支气管上皮细胞分为正常组、模型组、si-NC组、si-STAT3组,si-NC组细胞转染载体质粒si-NC,si-STAT3组细胞转染载体质粒si-STAT3,模型组和正常组细胞不给予干预。转染24h后,使用含3.0%香烟烟雾提取物的DMEM培养模型组、si-NC组和si-STAT3组细胞,使用DMEM培养正常组细胞。培养48 h后采用实时荧光定量PCR检测各组细胞的白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、STAT3、iNOS mRNA表达水平。结果(1)对照组大鼠肺组织结构正常,气道上皮结构完整,无明显炎性细胞浸润。与对照组相比,模型组大鼠肺组织出现大量炎性细胞浸润,肺泡结构紊乱,上皮组织脱落,肺泡腔不规则扩张,肺泡灌洗液中白细胞计数及淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞比例增加,支气管壁面积及支气管平滑肌厚度增加,肺组织中SIgA、SC、TGF-β1、VEGF含量及STAT3磷酸化水平、iNOS蛋白表达水平均升高,而肺泡灌洗液中单核巨噬细胞比例降低(均P<0.05)。STAT3抑制剂组与阳性对照组大鼠的上述指标较模型组均改善(均P<0.05),但两组上述指标差异均无统计学意义(均P>0.05)。(2)与正常组相比,模型组和si-NC组细胞的IL-1β、TNF-α、STAT3、iNOS mRNA表达水平均升高(均P<0.05);与模型组和si-NC组相比,si-STAT3组细胞的IL-1β、TNF-α、STAT3、iNOS mRNA表达水平均降低(均P<0.05)。结论在香烟烟雾诱导的COPD伴气道重塑中STAT3/iNOS通路处于激活状态,抑制该通路的激活可减轻肺组织和支气管上皮细胞的炎症反应,改善气道重塑。

p38 MAPK/AP-1信号通路在1,2-二氯乙烷中毒性脑水肿形成中对iNOS表达的上调作用

目的探究p38 MAPK/AP-1信号通路在小鼠1?2-二氯乙烷(1?2-DCE)中毒性脑水肿形成过程中对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的作用及其对脑水肿的影响。方法选取40只雌性昆明种小鼠随机分为对照组、染毒组、低剂量以及高剂量p38抑制剂组。染毒小鼠于染毒柜中1.2 mg/L 1?2-二氯乙烷染毒3.5 h/d,连续染毒3 d,低、高剂量抑制剂组小鼠于染毒前1 h腹腔注射200μl 3.75、15 mg/kg的p38 MAPK抑制剂(SB202190)。染毒结束次日取材,测定各组小鼠脑含水量及HE病理观察脑水肿,Western Blot检测各组小鼠脑组织中磷酸化p38、激活蛋白1(AP-1)两个亚基c-fos、c-jun的磷酸化形式表达水平以及iNOS的蛋白表达,Real-Time RT-PCR检测iNOS mRNA表达水平。结果单纯染毒组的小鼠出现抱爪现象,SB202190干预能够明显改善1?2-DCE中毒小鼠的抱爪症状。染毒组小鼠脑组织含水量与对照组小鼠相比明显增加,SB202190干预能够有效缓解小鼠出现脑水肿。单纯染毒组小鼠脑组织中p-p38蛋白、磷酸化c-jun和c-fos表达水平明显上调,iNOS蛋白和mRNA表达水平也显著增加,而SB202190能够显著降低iNOS、磷酸化c-jun和c-fos的表达水平。结论小鼠脑组织iNOS mRNA和蛋白表达水平在1?2-DCE中毒性脑水肿形成过程中显著上调。p38 MAPK/AP-1信号通路参与iNOS表达增多的调控过程。

基于NF-κB/iNOS/NO信号通路探讨生脉散加减对老年心肌梗死患者心功能的保护作用

目的:探究生脉散加减对老年心肌梗死患者心功能的保护作用并探讨核转录因子-κB/诱导型一氧化氮合酶/一氧化氮(NF-κB/iNOS/NO)信号通路在其中的作用机制。方法:前瞻性对2019年12月至2021年12月青海省中医院老年心肌梗死患者136例进行研究,按照随机数字表法分为观察组、对照组,各68例。对照组实施常规西药治疗,观察组实施常规西药+生脉散加减治疗,两组患者均给予经皮冠状动脉介入治疗进行血运重建。比较两组患者心功能相关指标,血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平,超声心动图指标,心功能分级,NF-κB/iNOS/NO信号通路变化,氧化应激指标变化及不良心血管事件(MACE)发生情况。结果:与本组治疗前比较,两组患者的N末端B型利钠肽原(NT-pro BNP)、血清炎症指标、左室收缩末期容积(LVESV)、左室舒张末期容积(LVEDV)、NO、iNOS、NF-κB p65及丙二醛(MDA)水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),左室射血分数(LVEF)及超氧化物歧化酶(SOD)均明显升高(P<0.05)。治疗后与对照组比较,观察组NT-pro BNP、血清炎症指标、LVESV、LVEDV、NO、iNOS、NF-κB p65及MDA水平均明显降低(P<0.05),LVEF及SOD均明显升高(P<0.05)。两组患者纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级比较差异无统计学意义。观察组MACE发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论:生脉散加减可明显降低老年心肌梗死患者NT-pro BNP、血清炎症指标水平,改善超声心动图指标,可调控NF-κB/iNOS/NO信号通路变化及降低氧化应激指标,减少不良心血管事件发生率,具有较好的心功能保护作用。

和血明目片改善老年性黄斑变性的机制

目的:探讨和血明目片通过调节STAT3-iNOS信号通路改善老年性黄斑变性的机制。方法:选取老年性黄斑病变患者100例,分为治疗组53例及对照组47例,其中治疗组服用和血明目片,对照组服用维生素C、E。治疗3个月后,检测并比较两组治疗前后的矫正视力及STAT3-iNOS mRNA的表达。结果:治疗组较对照组STAT3、iNOS mRNA表达降低、视力值升高(P<0.05)。结论:和血明目片可通过促进STAT3-iNOS信号通路的表达改善老年患者黄斑变性带来的视力影响。