信号转导及转录激活因子3、垂体同源框1及胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及临床意义

目的探讨信号转导及转录激活因子3(STAT3)、垂体同源框1(PITX1)及胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1(Gli-1)在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及临床意义。方法选取89例皮肤恶性黑色素瘤患者的肿瘤组织及癌旁组织。对患者进行随访,根据预后情况分为预后良好及预后不良。采用免疫组化法检测STAT3、PITX1、Gli-1蛋白表达情况,分析皮肤恶性黑色素瘤患者预后的影响因素。结果肿瘤组织中STAT3、Gli-1蛋白阳性表达率均明显高于癌旁组织,PITX1阳性表达率明显低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。预后不良患者肿瘤组织中STAT3、Gli-1蛋白阳性表达率均高于预后良好患者,PITX1阳性表达率低于预后良好患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。肿瘤直径≥5 cm、STAT3阳性、PITX1阴性、Gli-1阳性均为皮肤恶性黑色素瘤患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.05)。结论STAT3、PITX1及Gli-l蛋白在皮肤恶性黑色素瘤中存在异常表达,通过检测其水平能为临床治疗及预后提供新的思路与依据。

TGF-β1及其信号转导蛋白Smad23在去卵巢大鼠骨组织中的表达及意义

目的观察转化生长因子β1(TGFβ1)及其信号转导蛋白Smad23在去卵巢大鼠骨组织中的表达及意义。方法手术切除大鼠双侧卵巢。术后13周,取离体胫骨测量组织学参数髓腔面积百分率(%Ma.Ar)、骨小梁厚度(Tb.Th),用逆转录多聚酶链反应(RTPCR)检测大鼠骨组织TGFβ1mRNA的表达,用免疫组化法检测Smad23蛋白在骨组织中的定位,用Westernblot杂交法检测骨组织TGFβ1、Smad23蛋白表达。结果与对照组(Sham组)比较,模型大鼠(OVX组)骨组织Tb.Th缩小,%Ma.Ar明显增大,差异有显著性(P<0.01);OVX组TGFβ1的mRNA、蛋白及Smad23蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Smad23蛋白广泛表达于骨组织干骺端,主要表达于骨基质表面及骨小梁周围的成骨细胞。结论TGFβ1及其信号转导蛋白Smad23可能在绝经后骨质疏松症中起重要调节作用。

前交叉韧带离断骨关节炎大鼠印第安刺猬蛋白以及Runt相关转录因子2的表达

背景:印第安刺猬蛋白(Ihh)及其信号蛋白Gli1以及Runt相关转录因子2(Runx2)是骨关节炎密切相关的因子,在骨关节炎发病过程中,是引起关节退行性改变的重要原因之一。目的:探索Ihh,Gli1以及Runx2在骨关节炎发病过程中的作用。方法:将30只SD大鼠随机分成对照组(n=10)和模型组(n=20)。模型组大鼠取一侧膝关节行前交叉韧带离断建立骨关节炎模型,分别于造模后4周及12周,各取10只大鼠进行观察。对照组大鼠仅暴露前交叉韧带,于术后12周进行观察。结果与结论:与对照组相比,造模4周后可见骨关节炎模型大鼠膝关节出现软骨退变,膝关节软骨中Ihh,Gli1及Runx2表达水平明显增高,而造模12周后软骨退变进一步加重,但膝关节软骨中Ihh,Gli1及Runx2表达水平下降。提示Ihh,Gli1及Runx2在骨关节炎退变过程中起重要作用,其表达水平在骨关节炎的早期即明显升高,可作为骨关节炎防治研究中的评价指标。

雷公藤甲素对大鼠血管钙化过程中骨形态发生蛋白2和Runt相关转录因子2蛋白表达的影响

目的探究雷公藤甲素对大鼠血管钙化过程中骨形态发生蛋白2(BMP-2)和Runt相关转录因子2(Runx2)蛋白表达的影响。方法选取30只雄性清洁级SD大鼠随机分成对照组、钙化模型组和雷公藤干预组,每组10只。对照组给予肌肉注射0.9%氯化钠注射液和单纯花生油灌胃;钙化模型组给予肌肉注射维生素D3和尼古丁溶于花生油灌胃处理,制作胸主动脉钙化模型;雷公藤干预组在钙化模型组处理的基础上加用雷公藤甲素干预。喂养4周后处死大鼠,取胸主动脉,用von Kossa染色及苏木精-伊红染色反映血管钙化情况,检测血管钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性,蛋白质印迹法检测BMP-2、Runx2蛋白表达。结果von Kossa染色结果显示,与钙化模型组相比,雷公藤干预组血管中膜棕黑色颗粒显著减少,显示血管钙化程度较轻。苏木精-伊红染色结果显示,雷公藤干预组大鼠动脉组织血管内膜破坏不明显,中膜钙化灶钙化程度较钙化模型组明显减轻。雷公藤干预组血管组织中钙含量和ALP活性明显低于钙化模型组[(31.9±2.3)μmol/g protein比(47.6±3.6)μmol/g protein、(82.4±0.9)U/g protein比(149.6±2.7)U/g protein](均P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,与钙化模型组相比,雷公藤干预组血管组织中BMP-2和Runx2的表达水平显著下调。结论雷公藤甲素具有减轻血管钙化的作用,这种作用可能与雷公藤甲素抑制参与血管平滑肌细胞成骨转分化的重要信号通路上BMP-2/Runx2蛋白的表达有关。

Choukroun′s富血小板纤维蛋白对人成骨细胞增殖分化及细胞外调节蛋白激酶1/2-Runt相关转录因子2通路的影响

目的 分析Choukroun′s富血小板纤维蛋白(PRF)对人成骨细胞增殖分化及ERK1/2-Runx2通路的影响。方法 组织块法分离人成骨细胞,设置对照组、PRF1组和PRF2组,分别用不含PRF、含1×PRF浸出液和2×PRF浸出液的DMEM完全培养基培养。检测细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、I型胶原表达及细胞矿化能力,Western blot法测定细胞外调节蛋白激酶1/2-Runt相关转录因子2(ERK1/2-Runx2)信号通路蛋白表达情况。结果 与对照组比较,PRF1组和PRF2组MTT实验A值及ALP活性均升高,且PRF2组高于PRF1组(P<0.05);与培养1天比较,培养3、7天时三组MTT实验A值均升高,且培养7天高于培养3天(P<0.05)。培养7天,PRF1组和PRF2组I型胶原平均灰度值高于对照组,PRF2组高于PRF1组(P<0.05)。培养14、21天,PRF1组和PRF2组钙结节积分光密度高于对照组,PRF2组高于PRF1组(P<0.05);培养21天三组钙结节积分光密度均高于14天(P<0.05)。与对照组比较,PRF1组和PRF2组p-ERK1/2、Runx2蛋白表达升高,且PRF2组高于PRF1组(P<0.05)。结论 PRF可能通过激活ERK1/2-Runx2信号通路参与人成骨细胞增殖分化过程。

口腔黏膜癌变过程中Runt相关转录因子3的表达研究

目的研究Runt相关转录因子3(runt-related transcription factor3,RUNX3)在口腔黏膜癌变过程中的表达。方法应用免疫组织化学技术分析了临床收集的10例口腔正常黏膜组织、40例口腔白斑(oral leukoplakia,OLK)、150例口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)组织及对应癌旁组织中RUNX3的表达。统计分析了RUNX3的表达与性别、年龄、病损部位、组织病理分型等临床病理参数之间的关系。结果免疫组织化学染色结果显示10例口腔正常黏膜组织中RUNX3的表达皆为强阳性,且主要在细胞核内;4例OLK中RUNX3蛋白呈单纯胞浆表达,2例RUNX3蛋白表达缺失,其余34例OLK中RUNX3蛋白的表达跟正常组织中的表达情况一致;150例OSCC组织中有22例(14.7%)呈现细胞核表达阳性,45例(30.0%)RUNX3蛋白呈单纯胞浆表达,83例(55.3%)RUNX3蛋白呈现表达下调或表达缺失;RUNX3表达下调(P=0.001)和蛋白错位(P=0.001)皆与肿瘤的分化程度相关且具有统计学意义。结论口腔黏膜癌变过程中RUNX3的表达下调和蛋白的错位表达是一种常发事件,且可以发生在癌变的早期阶段。

中药调控哮喘相关信号通路的研究进展

支气管哮喘以下简称哮喘,是一种由先天免疫和适应性免疫之间相互作用引发的呼吸系统疾病,是世界上最常见的、常发于儿童的慢性非传染性疾病之一,其特点是气流受阻程度不一,可引起呼吸困难和喘息。目前全球哮喘患者逾3亿,中国成人哮喘患者约4570万人,且近年来全球哮喘患病率呈逐年上升趋势[1]。

宫颈癌患者高危型人乳头瘤病毒感染对癌组织人Runt相关转录因子3、NIN1/RPN12结合蛋白1同源物、神经激肽1受体表达水平影响

目的探讨宫颈癌患者高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染对癌组织人Runt相关转录因子3(Runx3)、NIN1/RPN12结合蛋白1同源物(NOB1)、神经激肽1受体(NK-1R)表达水平的影响。方法选取自2012年1月至2022年12月于北京市顺义区妇幼保健院确诊为宫颈癌的206例患者为研究对象。比较HR-HPV阳性患者和阴性患者Runx3、NOB1、NK-1R表达阳性率。采用多因素Logistic回归分析观察HR-HPV阳性对Runx3、NOB1、NK-1R表达的影响。结果206例患者中,HR-HPV阳性159例(纳入HR-HPV阳性组),HR-HPV阴性47例(纳入HR-HPV阴性组)。HR-HPV阳性组患者Runx3阳性率低于HR-HPV阴性组患者,NOB1、NK-1R阳性率高于HR-HPV阴性组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,HR-HPV感染是宫颈癌患者NOB1阳性、NK-1R阳性、Runx3阴性的独立危险因素(P<0.05)。结论HR-HPV感染的宫颈癌患者癌组织中Runx3表达水平降低,NOB1、NK-1R表达水平升高。

上调CTRP4基因表达通过抑制炎症因子调控食欲调节相关蛋白的表达

上调中枢补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白4(complement-C1q/tumor necrosis factor-related protein 4,CTRP4)可以改变下丘脑食欲调节相关蛋白的表达,抑制小鼠摄食且降低其体重。然而,CTRP4如何调控食欲调节相关蛋白的表达尚不清楚。本研究通过上调小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a)中的CTRP4,探讨CTRP4调控食欲调节相关蛋白的潜在作用机制。通过对N2a细胞未做干预、转染绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)重组腺病毒和CTRP4过表达重组腺病毒,将其分为空白对照组(Control组)、阴性对照组(Ad-GFP组)及CTRP4过表达组(AdCTRP4组)。干预72 h时,用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞CTRP4 mRNA表达,采用Western印迹检测细胞CTRP4、Pomc、Npy、p-STAT3/t-STAT3、TNF-α、IL-6、SOCS3在蛋白质水平的表达。结果显示,与对照组相比,Ad-CTRP4组的CTRP4 mRNA水平(26 258. 44±10 403. 47vs. 1. 81±0. 79 vs. 1. 00±0. 00,P<0. 01)及蛋白质水平显著增加(10. 44±7. 99 vs.0. 64±0. 62 vs.1. 00±0. 75,P<0. 01)。Ad-CTRP4组的p-STAT3/t-STAT3(3. 38±1. 70 vs. 0. 86±0. 57 vs. 1. 00±0. 63,P<0. 01)和Pomc(1. 81±0. 19 vs. 1. 15±0. 18 vs. 1. 00±0. 22,P <0. 01)表达均显著增高;SOCS3(0. 69±0. 15 vs. 1. 00±0. 12 vs. 1. 00±0. 07,P<0. 01),IL-6(0. 40±0. 19 vs. 1. 03±0. 17 vs.1. 00±0. 16,P<0. 01),TNF-α(0. 39±0. 27 vs. 1. 05±0. 46 vs. 1. 00±0. 29,P<0. 05)及Npy (0. 55±0. 14 vs. 1. 21±0. 38 vs. 1. 00±0. 24,P <0. 05)表达均显著下降。上述结果提示,在N2a细胞中,上调CTRP4可能通过抑制炎症因子TNF-α和IL-6,降低负性调节因子SOCS3的表达,增加STAT3磷酸化表达水平,从而调控食欲调节相关蛋白的表达。

miR-373调控JAK3/STAT6信号通路抑制肿瘤相关巨噬细胞M2极化对肺癌细胞的影响

目的:探究miR-373调控JAK3/STAT6信号通路抑制肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)M2极化对肺癌细胞的影响。方法:利用佛波酯及IL-4诱导M2-TAMs分化;将miR-NC和miR-373分别转染M0/M2-TAMs并检测M2-TAMs特征性基因mRNA和miR-373水平;将M0/M2-TAMs与A549、H1299细胞共培养;CCK-8、划痕实验、Transwell实验分别检测肺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力;双荧光素酶实验验证miR-373与JAK3的调控关系;RT-qPCR检测细胞JAK3、STAT6 mRNA水平;Western blot检测细胞Ki67、MMP-2/9、p-JAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6水平。30只裸鼠尾静脉注射已转染慢病毒的A549细胞悬液;检测裸鼠肺组织病理变化;RT-qPCR检测肺组织JAK3、STAT6 mRNA水平;Western blot检测CD31、VEGFA、M2-TAMs特征性基因及pJAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6蛋白水平。结果:成功诱导M2-TAMs中CD206及IL-10、Mrc1、Arg1、Ym1、Fizz1、CCL2 mRNA表达增加;与M2+miR-NC组相比,M2+miR-373组IL-10、Mrc1、Arg1、Ym1、Fizz1、CCL2 mRNA和Ki67、MMP-2/9蛋白表达明显降低,A549、H1299细胞增殖、侵袭和迁移能力明显降低(P<0.05);JAK3、STAT6 mRNA和p-JAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6蛋白水平明显降低(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-373组裸鼠肺部病理损伤明显缓解;M2-TAMs特征性基因蛋白水平明显降低;JAK3、STAT6 mRNA和p-JAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论:miR-373通过抑制JAK3/STAT6信号通路抑制TAMs向M2极化,从而抑制肺癌细胞增殖、侵袭、转移和血管生成。

骨形态发生蛋白2介导同型半胱氨酸促进血管钙化

背景:高同型半胱氨酸血症与血管钙化之间存在一定的内部联系。但是,目前有关高同型半胱氨酸血症促进血管钙化的发病机制还不清楚。目的:探讨骨形态发生蛋白2在高同型半胱氨酸血症诱导血管钙化中的作用。方法:人颈动脉蜡块标本根据有无钙化斑块分为钙化组(n=29)与非钙化组(n=13)。16只ApoE-/-小鼠随机分为对照组和高同型半胱氨酸血症组,每组8只。骨形态发生蛋白2转染大鼠胸大动脉平滑肌A7r5细胞,然后应用梯度浓度同型半胱氨酸(50,100,200,400μmol/L)干预A7r5细胞。茜素红染色和苏木精-伊红染色法检测钙化反应,免疫荧光法检测骨形态发生蛋白2与Runt相关转录因子2相互作用关系,免疫组化法和Western blot检测骨形态发生蛋白2、Runt相关转录因子2、α-平滑肌肌动蛋白的表达。结果与结论:①人体颈动脉组织染色显示,与非钙化组比较,钙化组炎性细胞增多,钙化阳性率增加(P<0.05);与非钙化组比较,钙化组骨形态发生蛋白2和Runt相关转录因子2表达量均上调,α-平滑肌肌动蛋白表达量下降(P均<0.05);②小鼠动脉标本染色显示,高同型半胱氨酸血症组钙化面积阳性率高于对照组(P<0.05);高同型半胱氨酸血症组血清同型半胱氨酸水平明显高于对照组(P<0.05);与对照组比较,高同型半胱氨酸血症组骨形态发生蛋白2和Runt相关转录因子2表达量均上调,α-平滑肌肌动蛋白表达量下降(P均<0.05);③A7r5细胞培养分析,随着同型半胱氨酸浓度梯度增加,A7r5细胞钙化程度、骨形态发生蛋白2和Runt相关转录因子2的蛋白表达增加(P<0.05),α-平滑肌肌动蛋白的蛋白表达降低(P<0.05);④过表达骨形态发生蛋白2的A7r5细胞培养分析,骨形态发生蛋白2过表达组较相对应的对照组、β-甘油磷酸钠组和同型半胱氨酸组钙化程度增加;Runt相关转录因子2表达上调(P<0.05),α-平滑肌肌动蛋白表达下调(P<0.05);⑤同型半胱氨酸钙化培养基培养的骨形态发生蛋白2过表达A7r5细胞中骨形态发生蛋白2表达量增加,且Runt相关转录因子2表达量随骨形态发生蛋白2表达量增加而增加;⑥结果表明,骨形态发生蛋白2是高同型半胱氨酸血症调控平滑肌细胞表型转化导致血管钙化的关键靶基因。靶向调控骨形态发生蛋白2可降低高同型半胱氨酸诱导的血管钙化。

阿托伐他汀促进大鼠牙槽骨缺损愈合及对Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨阿托伐他汀对大鼠牙槽骨缺损的治疗作用,并观察对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:30只大鼠随机分为正常组(N组)、模型组(M组)与阿托伐他汀给药组(ATV组),除N组外,其余大鼠均在牙槽骨处制造缺口,构建牙槽骨缺损模型。建模成功后,ATV组灌胃20 mg/kg阿托伐他汀混悬液,N组和M组灌胃等量羧甲基纤维素钠溶液,连续给药21天。末次给药后,尾静脉采血,检测血清骨保护素(OPG)、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BPG)浓度。H-E染色观察上颌骨缺损区组织变化情况,并进行Lane Sandhu评分。以抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测缺损区破骨细胞数目,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)与蛋白免疫印迹(WB)法检测缺损区分泌型糖蛋白(Wnt)、β连锁蛋白(β-catenin)和RUNT相关转录因子2(Runx2)mRNA及蛋白表达量。采用SPSS 23.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与N组相比,M组OPG、ALP和BGP浓度与Lane Sandhu评分降低,破骨细胞数增多。与M组相比,ATV组OPG、ALP和BGP浓度与Lane Sandhu评分上升,破骨细胞数减少。H-E染色可见,N组上颌骨缺损区的骨形成量较多,M组缺损区骨组织较少,ATV组缺损区骨组织量增加。与N组相比,M组上颌骨缺损区Wnt、β-catenin和Runx2 mRNA和蛋白表达量降低。与M组相比,ATV组上颌骨缺损区的Wnt、β-catenin和Runx2 mRNA和蛋白表达量增加。结论:阿托伐他汀可促进牙槽骨缺损模型大鼠牙槽骨缺损愈合,加快缺损处骨重建,该作用可能与Wnt/β-catenin信号通路激活有关。

转录因子的入核转运调控机制

转录因子(transcription factors,TFs)参与细胞内DNA转录的起始与调控,直接或间接响应信号通路转导。其中,部分转录因子存在细胞核质定位的改变,在细胞质与细胞核中发挥不同的功能或活性。目前已发现,Smad,细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK),Yes相关蛋白(yes-associated protein,YAP),β-联蛋白(β-catenin),信号传导与转录激活蛋白(signal transducer and activator of transcription,STAT)等转录因子存在细胞核质定位的改变。各转录因子通过不同的核定位信号肽(nuclear localization signal,NLS)受经典或非经典入核转运机制调控,进而影响其功能与活性。转录因子入核转运调控作为信号通路调控基因表达的重要方式之一,诸多转录因子入核转运机制仍不清楚。同时,部分转录因子被报道受不同的入核转运机制调控,各入核转运调控机制之间的关系尚不清楚。本文主要针对Smad,ERK,YAP,β-联蛋白,STAT五类转录因子NLS,入核转运机制研究及其对信号通路的影响进行综述,并对转录因子入核转运机制中存在的问题进行讨论,以期为后续其他转录因子入核转运机制研究提供参考。

RUNX1通过调节SOX2转录促进食管鳞状细胞癌干性

目的:探讨RUNT相关转录因子1(RUNX1)在食管鳞状细胞癌中的表达及其对细胞干性的影响。方法:从GEPIA数据库和GEO数据库(GSE111011)获取RUNX1的表达情况,使用TCGA数据库分析基因表达相关性。利用Western blot检测RUNX1、SOX2、OCT4、KLF4和c-MYC蛋白表达情况。利用qRT-PCR技术检测CD271、CD44、CD54、SOX2和RUNX1的mRNA水平,双荧光素酶报告基因实验检测SOX2启动子活性。通过细胞成球培养和流式细胞术检测侧群细胞和CD271^(+)/CD44^(+)细胞的数量反映细胞干性。结果:GEPIA数据库、GEO数据库和Western blot结果均显示RUNX1在食管癌中高表达。在Eca-109细胞中敲低RUNX1后,抑制SOX2表达和细胞干性(P<0.01)。在KYSE-150细胞中过表达RUNX1后,促进SOX2表达和细胞干性增加(P<0.01)。在KYSE-150细胞中同时过表达RUNX1和敲低SOX2后,RUNX1促进的细胞干性增加被逆转(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示RUNX1促进SOX2启动子活性,在转录水平调节SOX2表达。结论:RUNX1在食管鳞状细胞癌中高表达,并通过在转录水平调节SOX2表达,从而促进细胞干性。

瘦素调节下丘脑神经肽Agouti相关蛋白表达的研究进展

下丘脑是机体能量代谢的调节中枢,其神经内分泌调节网络的中心环节是感受外周脂肪细胞分泌的瘦素所提供的能量贮存信号,调控下丘脑弓状核内Agouti相关蛋白(AgRP)和阿黑皮素原(POMC)的表达水平,从而调节能量的摄入和消耗,维持机体能量代谢的稳态。转录因子叉头框蛋白1(FoxO1)和信号转导及转录激活因子3(STAT3)是介导瘦素对AgRP转录调控作用的重要分子,直接参与了机体能量代谢的稳态调节。FoxO1可以增强AgRP的转录活性,而STAT3活化后则抑制AgRP的转录水平。瘦素可通过抑制FoxO1和激活STAT3实现对AgRP和能量代谢的调控。本文就瘦素对AgRP基因的转录调控机制的最新进展作一综述。

TGF-βSmadRUNX3信号通路在糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞EMT过程中的作用

目的探讨TGF-β/Smad/RUNX3信号通路在糖尿病肾病(DN)大鼠肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中的作用。方法将45只Wistar雄性大鼠随机分成三组:对照组、模型组和实验组,每组各15只,实验组和模型组制备DN大鼠模型。按照实验分组进行给药。末次给药后,用血糖仪检测各组大鼠血糖含量,全自动生化分析仪检测各组大鼠24 h尿蛋白、血尿素氮及血肌酐含量,过碘酸希夫(PAS)、天狼星红(SR)染色观察各组大鼠肾脏组织病理变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组大鼠血清白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)表达水平,蛋白免疫印迹(Western blot)检测各组大鼠肾脏组织α-SMA、E-cadherin、TGF-β1、Smad3、Smad4、RUNX3蛋白表达情况。结果与对照组相比,模型组大鼠肾小管肥大增生,肾间质有炎症细胞浸润现象,肾间质胶原纤维沉积、24 h尿量、24 h尿蛋白、血糖、血尿素氮、血肌酐浓度、血清IL-1β、IL-6表达量、肾脏α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smad4蛋白表达显著升高(P<0.05),肾脏E-cadherin、RUNX3蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,实验组大鼠肾小管肥大减轻,炎症细胞减少,肾间质胶原纤维沉积、24 h尿量、24 h尿蛋白、血尿素氮、血肌酐浓度、血清IL-1β、IL-6、肾脏α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smad4蛋白表达显著降低(P<0.05),肾脏E-cadherin、RUNX3蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论TGF-β抑制剂可通过抑制TGF-β/Smad通路激活促进RUNX3表达,减少糖尿病肾病大鼠肾间质纤维化及促炎因子分泌,抑制肾小管上皮细胞EMT的发展。

人Runt相关转录因子3通过影响蛋白激酶B/β-连环蛋白信号通路抑制涎腺腺样囊性癌细胞增殖和迁移

目的 观察人Runt相关转录因子3（RUNX3）在涎腺腺样囊性癌中的表达以及对蛋白激酶B（Akt）/β-连环蛋白（β-catenin）的影响.方法 应用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）技术检测55例涎腺腺样囊性癌及癌旁正常组织中RUNX3 mRNA表达水平,并分析其临床意义.在SACC-83、SACC-LM细胞中过表达野生型RUNX3后,使用Western blot、RT-qPCR分别在蛋白和mRNA水平上观察RUNX3对Akt/β-catenin的影响;使用细胞计数试剂盒（CCK-8）细胞增殖实验和细胞划痕实验检查过表达野生型RUNX3对涎腺腺样囊性癌细胞增殖和迁移的影响.结果70.9%（39/55）SACC组织中RUNX3 mRNA呈低水平表达.RUNX3低表达与涎腺腺样囊性癌患者神经转移（P=0.003）、复发（P=0.043）和临床分期（P=0.003）显著相关,与T分级（P=0.072）接近相关.RUNX3高表达组总生存（OR）显著高于RUNX3低表达组（P=0.031）.过表达野生型RUNX3可下调Akt、β-catenin蛋白和mRNA的表达,并显著抑制SACC-83、SACC-LM细胞的增殖和迁移.结论 RUNX3在涎腺腺样囊性癌中起着抑癌基因作用,通过影响Akt/β-catenin信号通路抑制肿瘤细胞增殖和迁移.

补肾化痰方对去势骨质疏松大鼠BMP2/Smad/RUNX2信号通路及钙沉积的影响

目的:观察补肾化痰方对去势骨质疏松大鼠BMP2/Smad/RUNX2信号通路及钙沉积的影响。方法:6月龄SD大鼠40只,随机分为假手术组、模型组、补肾组和补肾化痰方组,每组10只。补肾组予补肾方灌胃,0.51 g/mL;补肾化痰组予补肾化痰方灌胃,0.94 g/mL,模型组和假手术组予等体积生理盐水灌胃,1 mL/100 g,持续灌胃8周。采用micro CT检测大鼠的骨密度(BMD),采用ELISA检测血清骨形态发生蛋白2(BMP2)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、胎球蛋白(Fetuin-A)、基质gla蛋白(MGP)含量,Western blot法检测骨组织BMP2、RUNX2、Fetuin-A、MGP蛋白的表达。结果:模型组、补肾组、补肾化痰方组大鼠骨密度、血清及骨组织BMP2、RUNX2、Fetuin-A的含量、血清MGP水平均低于假手术组,骨组织MGP水平高于假手术组,差异均有统计学意义(P<0.05);补肾组和补肾化痰方组大鼠骨密度、血清及骨组织BMP2、RUNX2、Fetuin-A含量、血清MGP水平均高于模型组,骨组织MGP水平低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。补肾化痰方组血清BMP2、RUNX2、Fetuin-A、MGP高于补肾组(P<0.05);补肾组骨组织BMP2、RUNX2高于补肾化痰方组(P<0.05);补肾组和补肾化痰方组骨密度、骨组织Fetuin-A、MGP比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:补肾化痰方能够提高骨质疏松大鼠的骨密度及血清Fetuin-A的含量,影响BMP2/Smad/RUNX2信号通路。

低氧诱导因子-1α对骨髓间充质干细胞成骨分化与血管生成相关因子的影响

目的探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)在SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中对成骨分化和血管生成相关细胞因子的影响。方法分离并培养BMSCs,采用流式细胞术进行鉴定;分别构建上调和下调HIF-1α基因的质粒载体及对照组质粒,使用Lipofectamine?LTX转染试剂将各组质粒分别转染至BMSCs,将细胞分为过表达实验组、过表达对照组、低表达实验组和低表达对照组。各组成骨诱导3、7 d后分别进行茜素红染色;RT-PCR检测目的基因HIF-1α,成骨分化特异标志物Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2),以及血管生成特异标志物血小板衍生生长因子-BB(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的mRNA表达水平;用Western blot检测目的蛋白HIF-1α及Runx2、PDGF-BB的蛋白表达量。结果流式鉴定BMSCs表面标记物CD29、CD45阳性表达率分别为98.2%和4.2%;RT-PCR结果显示:过表达实验组BMSCs中HIF-1α、Runx2、TGF-β和PDGF-BB的mRNA表达显著升高(P<0.001);低表达组中HIF-1α、Runx2、TGF-β和PDGF-BB的mRNA表达显著降低(P<0.001);Western blot结果显示:过表达实验组BMSCs中HIF-1α、Runx2和PDGF-BB的蛋白表达量均增高(P<0.001),低表达实验组中HIF-1α、Runx2和PDGF-BB蛋白表达量降低(P<0.001)。茜素红染色结果显示,低表达实验组钙结节面积小于其对照组,过表达实验组红色钙结节面积显著大于其对照组,随着成骨诱导时间的增加,各组钙化面积也增大。结论上调和下调HIF-1α后可调控BMSCs的成骨分化及血管生成相关因子表达。

含锌指和BTB结构域7B(ZBTB7B/ThPOK)及其相关因子在T细胞分化及功能中的作用

含锌指和BTB结构域7B(ZBTB7B/ThPOK)是CD4谱系分化中的关键转录因子,并抑制CD8谱系生成。ThPOK蛋白表达促进CD4谱系分化,维持CD4谱系稳定性,并抑制CD8谱系分化。首先在胸腺内,ThPOK基因表达受T细胞受体(TCR)信号、基因增强子、基因沉默子等调节,且ThPOK表达受GATA结合蛋白3(GATA3)、Runt相关转录因子3(Runx3)、白血病/淋巴瘤相关因子(LRF)、胸腺细胞选择相关性高迁移率族盒基因(TOX)、Myc关联的锌指蛋白相关因子(MAZR)、E1A结合蛋白p300(P300)等转录因子影响,进而影响CD4、CD8谱系分化。而在外周T细胞中,ThPOK影响CD_4^+T细胞亚群、CD_8^+T细胞分化及功能。在此基础上,正逐步展开针对外周疾病中ThPOK作用的研究。