呼吸道合胞病毒感染后气道上皮细胞Toll样受体4的表达及其功能

目的观察呼吸道合胞病毒（RSV）感染后气道上皮细胞Toll样受体4（TLR4）表达变化及其信号通路的功能，探讨RSV诱导气道炎症的机制。方法体外培养人气管上皮细胞株9HTEo，以RSV感染复数为10感染上皮细胞，用半定量逆转录PCR（RT-PCR）检测TLR1-10 mRNA表达；用定量PCR检测TLR4 mRNA表达的动态变化；用流式细胞术检测TLR4蛋白表达及与细胞凋亡的关系；感染后再用TLR4激动剂脂多糖（LPS）刺激细胞，用酶联免疫法（ELISA）检测上清液中白细胞介素-8（IL-8）含量以观察病毒诱导表达的膜TLR4蛋白功能。RT-PCR和流式细胞术实验分为正常组和RSV感染组，用GraphPad 4．0统计软件进行配对t检验；实时定量PCR实验分为正常组、RSV感染组和紫外线灭活RSV感染组，采用Kruskal-Wallis检验分析；ELISA实验分为正常组、RSV感染组、单独LPS刺激组和RSV-LPS共刺激组，采用One-way ANOVA检验分析。结果（1）RSV感染组TLR2～10 mRNA表达均上调（t值为3．49～14．47，P均〈0．05），以TLR2和TLR6变化最为显著；定量PCR结果提示：感染组TLR4 mRNA 3h后开始增高（Kruskal-Wallis检测值=8．82，P〈0．05，n=6），紫外灭活RSV组TLR4 mRNA表达无明显变化；（2）流式细胞术结果表明：RSV感染组膜上TLR4表达比正常组增高（平均荧光强度：1．27±0．48，0．97±0．25，t=2．39，P〉0．05，n=10），感染组胞内TLR4表达比正常组降低（平均荧光强度：3．08±1．38，3．36±1．31；t=2．92，P〉0．05，n=10），感染组膜TLR4阳性细胞中（93．32±1．7）％为膜黏连蛋白-5阳性细胞；（3）RSV-LPS共刺激组培养上清液中IL-8含量明显高于单纯LPS刺激组（F=59．29，P〈0．01，n=3）。结论RSV感染后，上皮细胞TLR4 mRNA和蛋白表达水平上调，与TLR4信号通路相关的IL-8分泌增加；TLR4与上皮细胞凋亡的关系提示TLR4及其信号通路可能参与了RSV诱导的上皮细胞急、慢性炎症反应。