百脉根结瘤信号通道蛋白NSP1和NSP2的相互作用

豆科植物百脉根是研究共生固氮体系的模式植物之一,对其根瘤菌共生信号转导途径和作用机制的研究,有助于揭示根瘤菌与豆科植物共生关系建立和共生体形成的奥秘。本研究利用酵母双杂交系统和体外蛋白质相互作用技术,证明百脉根GARS类家族转录因子结瘤信号通道蛋白NSP1和NSP2在体外体内均可以相互作用,并将相互作用的位点定位在NSP1的GRAS结构域的LHRII区域和NSP2的LHRI区内。

Wnt1诱导信号通道蛋白1-αvβ3整合蛋白信号通路在脓毒症诱发的急性肺损伤中正向调控Toll样受体触发的炎症反应

Wnt1诱导信号通道蛋白1（WISP1）通过整合蛋白B6对脓毒症诱导的急性肺损伤（ALI）产生影响。作者目前致力于研究WISP1对脓毒症小鼠肺Toll样受体（TLR）的信号调控，以及巨噬细胞中TLR4介导的TNF-α释放。作者首先证实了TLR4和CD14在脓毒症介导的ALI中发挥关键作用，之后又证明了依赖TLR4和CD14的多种微生物诱发的脓毒症可以引起肺内αvβ3的高表达。

黄连碱基于NF-κB信号通道的体外抗炎实验研究

目的探讨黄连碱体外抗炎作用及其机制。方法采用LPS诱导RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,用黄连碱对其进行干预,实验结束后,Western Blot技术检测RAW264.7巨噬细胞p-ERK1/2、IκBα和iNOS蛋白的表达。结果与LPS组比较,黄连碱可显著下调LPS所致炎性RAW264.7巨噬细胞中p-ERK1/2和iNOS蛋白表达(P<0.05);显著升高IκBα蛋白的表达(P<0.05)。结论黄连碱抗炎作用机制与其下调LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平,减少IκB-α蛋白磷酸化降解和抑制iNOS蛋白表达等环节有关。

带状疱疹后遗神经痛患者血清非标记定量蛋白质组学分析

目的采用非标记定量蛋白质组学技术检测带状疱疹后遗神经痛(PHN)患者血清差异表达的蛋白质,探讨PHN可能的发病机制。方法选择带状疱疹患者80例,经治疗后存在神经痛症状者40例(观察组)、不存在神经痛症状者40例(对照组)。收集两组治疗前的血液,采用非标定量法蛋白质组学技术分析血清中的差异蛋白。结果与对照组比较,观察组有4种蛋白质表达下调、7种蛋白质表达上调。进一步的差异蛋白分析结果显示,表达下调的4种蛋白质分别为纤维胶凝蛋白1(FCN1)、丝氨酸蛋白酶抑制剂家族D成员1(SERPIND1)、脱脂转化酶(LPA)和蛋白二硫化物异构酶A4(PDIA4),表达上调的7种蛋白质分别为Wnt诱导信号通道蛋白2(WISP2)、免疫球蛋白λ变量1-44(IGLV1-44)、免疫球蛋白重常数γ1(IGHG1)、载脂蛋白C3(APOC3)、半乳糖凝集素1(LGALS1)、中间α-球蛋白抑制因子H1(ITIH1)和C1Q肿瘤坏死因子相关蛋白3(C1QTNF3)。结论PHN患者血清FCN1、SERPIND1、LPA、PDIA4蛋白表达下调,WISP2、IGLV1-44、IGHG1、APOC3、LGALS1、ITIH1和C1QTNF3蛋白表达上调,上述差异表达蛋白可能参与了PHN的发病。

低强度脉冲超声波对早中期兔膝骨性关节炎软骨细胞外基质及MAPKs信号通路的影响

目的:研究低强度脉冲超声波(LIPUS)对早中期兔膝骨性关节炎(OA)软骨细胞外基质(ECM)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路的影响,探讨LIPUS对关节软骨损伤修复和延缓退变的作用机制。方法:36只健康新西兰兔随机分成6组,早期对照组(EC组)、早期OA组(EO组)、早期治疗组(ET组)、中期对照组(MC组)、中期OA组(MO组)和中期治疗组(MT组),6只/组。EO、ET、MO及MT组均接受左后肢前交叉韧带切断术(ACLT),对照组仅接受左侧膝关节囊切开术。ET组和MT组分别于术后第3天和第5周起接受LIPUS治疗。超声频率3MHz,强度40mW/cm2,作用时间20min,1次/d,6d/周,持续6周。EO与MO组的LIPUS方案与治疗组相同,但无超声输出。LIDUS6周后,采用甲苯胺蓝染色进行关节软骨的组织学观察,并进行Mankin评分。采用免疫印迹法检测蛋白多糖、Ⅱ型胶原、磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)及p38(p-p38)的变化。结果:③组织学观察及Mankin评分:EO组关节软骨表面不规则、甲苯胺蓝染色变浅、软骨细胞减少,与EC组相比,Mankin评分显著升高(P<0.01);MO组关节软骨损伤明显,Mankin评分较MC组显著升高(P<0.01)。与EO组相比,ET组病理学改变程度轻,Mankin评分显著降低(P<0.01);但MT组Mankin评分较MO组无显著降低(P>0.05)。③Ⅱ型胶原、蛋白多糖检测:与EC组比较,EO组和ET组均下降,但EO组较ET组明显下降(P<0.05);与MC组相比,MO和MT组均显著降低(P<0.05),MO组与MT组间无显著差异(P>0.05)。③p-ERK1/2、p-p38检测:与EC组相比,EO组表达量显著升高(P<0.05),但与EO组相比,ET组显著降低(P<0.05);与MC组相比,MO组和MT组表达显著升高(P<0.05),MT组与MO组间无明显差异(P>0.05)。结论:LIPUS可以减轻关节软骨ECM的损伤程度,其作用与LIPUS治疗后关节软骨中p38、ERK1/2表达下调有关,这种作用与OA的病变阶段密切相关,即在OA早期进行LIPUS作用更明显。

基于VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路探讨益气润肠方治疗气虚型便秘大鼠的作用机制

目的:基于VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路探讨益气润肠方对气虚便秘模型大鼠作用及其机制。方法:选取48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、乳果糖组、益气润肠方低剂量组、益气润肠方中剂量组和益气润肠方高剂量组,每组8只。空白组大鼠正常饮食,每日给予生理盐水灌胃,其余大鼠给予洛哌丁胺混悬液3 mg/(kg·d)灌胃加饥饱饮食2周制作气虚便秘模型。造模成功后,空白组及模型组每日给予生理盐水灌胃,乳果糖组给予乳果糖口服溶液1.67 g/(kg·d)灌胃,益气润肠方高、中、低剂量组分别给予益气润肠方17.5、8.75、4.375 g/(kg·d)灌胃,连续2周。14 d后称量大鼠粪便湿重、粪便干重并计算粪便含水率;留取结肠组织,采用苏木精伊红染色法观察结肠病理变化,qPCR检测大鼠结肠血管活性肠肽(VIP)、环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、水通道蛋白3(AQP3)mRNA表达水平,Western blot检测大鼠VIP、AQP3蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量明显降低(P<0.01),粪便湿重及粒数明显减少(P<0.01);与模型组比较,益气润肠方低、中、高剂量组和乳果糖组体质量明显增高(P<0.01,P<0.05),粪便湿重增加、粪便粒数增多(P<0.05,P<0.01),但粪便含水率无统计学意义(P>0.05)。与乳果糖组比较,益气润肠方中、高剂量组粪便湿重明显增加、粪便粒数显著增多(P<0.05)。与空白组比较,模型组VIP、cAMP、PKA、AQP3 mRNA表达水平明显降低(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,乳果糖组及益气润肠方各剂量组VIP、cAMP、PKA、AQP3 mRNA表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),益气润肠方高剂量组效果最显著(P<0.01),且优于乳果糖组(P<0.05)。与模型组比较,益气润肠方各剂量组VIP、AQP3的蛋白表达水平升高,且呈剂量依赖性(P<0.05)。益气润肠方可以明显改善咯派丁胺造成的便秘大鼠的肠道病理形态损害。结论:益气润肠方可通过调控VIP-cAMP-PKA-AQP3通路治疗大鼠气虚型便秘。

实验性大鼠肝纤维化TGFβ1及其受体mRNA与Smad3,7的表达

目的:研究四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化大鼠肝脏转化生长因子β1(TGFβ1)及其I,Ⅱ型受体(TGFR)、Smad3、Smad7的定位及表达. 方法:将24只大鼠随机分为正常对照组与模型组,模型组大鼠予以40%四氯化碳皮下注射8 wk后处死.RT-PCR检测肝组织TGFβ1,TGFR I与TGFRⅡ;免疫组化技术检测TGFβ1,Smad3,Smad7在肝脏的表达及细胞内的定位;放射免疫方法检测透明质酸,肝组织病理检查. 结果:与正常组大鼠比较,RT-PCR显示模型组大鼠肝内TGFβI、TGFR I与TGFR ⅡmRNA表达明显增高;免疫组化结果显示TGFβ1与Smad3表达增加,而Smad7的表达降低,TGFβ1与Smad3的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞质,Smad7主要在肝细胞质表达(正常组与模型组大鼠TGFβ1、Smad、Smad7平均光度分别0.61±0.33与1.57±0.53,0.248±0.042与0.785±0.904, 4.674±1.143与0.470±0.097,P<0.05);模型组大鼠血清透明质酸水平明显增高(正常组大鼠78.4±1 9.2 μg/L, 模型组263.2±107.0 μg/L,P<0.01),肝组织HE染色支持肝纤维化改变. 结论:肝内TGFβ1,TGFR I,TGFR Ⅱ,Smad3表达增强、Smad7表达减弱,提示TGFβ1及其受体与Smad信号通道蛋白参与了肝纤维化的发生发展,可作为防治肝纤维化发生发展的新途径之一.

盐酸伊立替康注射液对直肠癌晚期患者血清GPX3及肿瘤组织液WISP2、FGFBP1的影响

目的探讨盐酸伊立替康注射液对直肠癌晚期患者血清谷胱甘肽过氧化物酶3(glutathione peroxidase 3,GPX3)、肿瘤组织液中WNT1诱导信号通道蛋白2(WNT1 inducible signaling pathway protein 2,WISP2)及成纤维细胞生长因子结合蛋白1(fibroblast growth factor binding protein 1,FGFBP1)的影响。方法选取郑州大学附属肿瘤医院已确诊为晚期直肠癌患者90例,随机分为实验组和对照组,对照组给予奥沙利铂+亚叶酸钙+氟尿嘧啶化疗方案,实验组给予奥沙利铂+亚叶酸钙+盐酸伊立替康化疗方案,每4周重复1次,共6次。治疗前后分别检测2组患者的血清GPX3蛋白含量、肿瘤组织液WISP2、FGFBP1蛋白水平,评价临床疗效。结果与对照组比较,实验组患者血清GPX3蛋白含量明显升高(P<0.05);肿瘤组织液WISP2蛋白水平显著升高(P<0.05);肿瘤组织液FGFBP1蛋白水平显著降低(P<0.05);实验组的总有效率为明显高于对照组(64.44%vs.42.22%;χ2=4.46,P<0.05),实验组的临床获益率明显高于对照组(93.33%vs.75.56%;χ2=5.41,P<0.05)。结论盐酸伊立替康注射液能够使直肠癌晚期患者血清WISP2、肿瘤组织液GPX3表达水平升高,肿瘤组织液FGFBP1表达水平降低,具有良好的临床疗效。

WISP1对百草枯诱导肺泡细胞上皮间质转化和基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的观察百草枯(PQ)对人肺A549细胞WNT1诱导信号通道蛋白1(WISP1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨WISP1在PQ诱导肺泡细胞上皮间质转化(EMT)的作用机制。方法体外培养A549细胞,采用不同浓度PQ染毒,光学显微镜下观察细胞形态学改变,实时荧光定量PCR方法检测A549细胞中E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、WISP1及MMP-9的表达,Western blot测定E-Cadherin、Vimentin、WISP1和MMP-9蛋白表达。结果(1)PQ染毒后A549细胞形态发生改变,细胞体积增大,空泡增多,随着PQ染毒浓度增加细胞出现凋亡。(2)伴随细胞形态改变,E-Cadherin水平随PQ染毒浓度增加而降低,以200μg/ml PQ时最低(P<0.01);Vimentin浓度增加,以50μg/ml PQ时最高(P<0.01)。(3)随着PQ染毒浓度增加,WISP1、MMP-9基因和蛋白表达升高,200μg/ml PQ染毒后第5天WISP1、MMP-9表达达到高峰(P<0.01)。(4)经WISP1 siRNA处理后200μg/ml PQ诱导细胞的EMT现象减少,E-Cadherin表达较空白siRNA升高(P<0.01),Vimentin浓度下降(P<0.01),WISP1和MMP-9表达降低(P<0.01),两者的降低呈正相关(r=0.986,P<0.01)。结论WISP1可能参与了PQ诱导的EMT过程,WISP1水平降低抑制了PQ诱导的MMP-9表达。因而推测WISP1与MMP-9可能在PQ所致肺纤维化过程中发挥了作用。

基于VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路探讨枳实-白芍药对调控C-IBS的作用及机制

目的:研究不同配伍比例的枳实-白芍药对对便秘型肠易激综合征(C-IBS)大鼠的影响,探讨其对C-IBS的作用及机制。方法:取SPF级Wistar成年雄性大鼠60只,随机留取10只大鼠作为空白组。其余50只大鼠为实验组,均采用冰0.9%氯化钠溶液灌胃的方法制备C-IBS模型,造模成功后将50只实验组大鼠随机分为模型对照组、匹维溴铵组、枳实-白芍药对1∶1组、枳实-白芍药对1∶2组、枳实-白芍药对2∶1组,每组10只。经过14 d治疗后,计算粪便含水量,ELISA法检测血清血管活性肠肽(VIP)、环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、水通道蛋白3(AQP3)的含量,荧光定量PCR检测结肠组织VIP、PKA、AQP3 mRNA的表达,Western Blot检测结肠组织cAMP、PKA、AQP3蛋白的表达。结果:与模型对照组比较,枳实-白芍药对1∶1组、枳实-白芍药对1∶2组、枳实-白芍药对2∶1组均可升高粪便含水量(P<0.05),枳实-白芍药对2∶1组可显著升高血清VIP、cAMP、PKA、AQP3含量(P<0.01),枳实-白芍药对1∶1组可升高血清VIP含量(P<0.05),枳实-白芍药对1∶2组可显著升高血清VIP、cAMP、AQP3含量(P<0.01,P<0.05),枳实-白芍药对1∶1组、枳实-白芍药对1∶2组、枳实-白芍药对2∶1组均可显著升高结肠组织VIP、PKA、AQP3 mRNA和cAMP、PKA、AQP3蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),且各组之间差异无统计学意义,说明枳实和白芍配伍时以经典名方枳实芍药散的原方剂量即可。结论:枳实-白芍药对配伍比例为1∶1时即可发挥治疗C-IBS的作用,其机制可能与调控VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路有关。

基于VIP/cAMP/PKA/AQP5信号通路探讨针刺治疗水液缺乏型干眼的作用机制

目的:观察针刺对水液缺乏型干眼(ATD)豚鼠眼表症状及泪腺组织中血管活性肠肽(VIP)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/水通道蛋白5(AQP5)信号通路相关蛋白表达的影响,探讨针刺治疗ATD的作用机制。方法:40只豚鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、假针组和西药组,每组8只。皮下注射氢溴酸东莨菪碱复制ATD模型。针刺组针刺双侧“睛明”“攒竹”“丝竹空”“太阳”“瞳子髎”,每次15 min,每日1次;假针组每5 min钝针点压上述穴位1次,共3次;西药组双眼滴玻璃酸钠滴眼液,3次/d,每次1滴。以上3组均治疗14 d。分别于造模前、造模后及干预后进行酚红棉线泪液分泌量(PRT)实验、测定泪膜破裂时间(BUT)和角膜荧光素钠染色评分(FLS)。干预后泪腺称重,计算泪腺指数;HE染色法观察泪腺组织病理形态变化;免疫荧光染色法检测泪腺组织AQP5的表达;ELISA法检测泪腺组织VIP和AQP5含量;Western blot法检测泪腺组织VIP、cAMP、PKA、磷酸化(p)-PKA及AQP5蛋白表达。结果:造模后,与空白组比较,其余4组PRT减少、BUT缩短(P<0.01,P<0.05),FLS升高(P<0.05,P<0.01)。干预后,与空白组比较,模型组PRT减少、BUT缩短(P<0.01),FLS升高(P<0.01),泪腺指数降低(P<0.01),泪腺组织VIP含量、AQP5免疫荧光强度及含量降低(P<0.01),VIP、cAMP、PKA、p-PKA和AQP5蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05)。干预后,与模型组比较,针刺组和西药组PRT增多、BUT延长(P<0.01,P<0.05),FLS降低(P<0.01,P<0.05),泪腺指数升高(P<0.05),泪腺组织VIP含量、AQP5免疫荧光强度及含量升高(P<0.01);针刺组泪腺组织VIP、cAMP、PKA、p-PKA、AQP5蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);西药组VIP和AQP5的蛋白表达升高(P<0.05)。与假针组比较,针刺组和西药组PRT增多、BUT延长(P<0.01,P<0.05),FLS降低(P<0.01,P<0.05),泪腺组织VIP含量、AQP5免疫荧光强度及含量升高(P<0.05,P<0.01);针刺组泪腺组织VIP、cAMP、PKA、AQP5蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);西药组AQP5的蛋白表达升高(P<0.05)。与西药组比较,针刺组PRT增多(P<0.05)。空白组泪腺结构无明显异常;模型组和假针组泪腺上皮细胞明显萎缩,可见淋巴细胞浸润;针刺组和西药组泪腺上皮细胞结构基本正常,部分腺腔扩张,可见少量淋巴细胞浸润。结论:针刺可减轻干眼眼表损伤,促进泪液分泌,其作用机制可能与激活VIP/cAMP/PKA/AQP5信号通路,增强泪腺分泌功能有关。

基于VIP/cAMP/PKA/AQPs信号通路研究肺肠合治法减轻肺水肿治疗急性肺损伤的作用机制

目的:探究肺肠合治法(麻黄汤+大承气汤)减轻脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺水肿的作用和机制。方法:Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、肺肠合治低、中、高剂量组、地塞米松组。采用LPS(10 mg·kg^(-1))腹腔注射复制ALI大鼠模型,造模后开始灌胃给药,正常组给予生理盐水(25 m L·kg;),肺肠合治低(5 g·kg^(-1))、中(7.5 g·kg^(-1))、高(10 g·kg^(-1))剂量组分别给予(麻黄汤+大承气汤)灌胃,阳性药组给予地塞米松(5 mg·kg^(-1)),分别于LPS注射后0、8、16 h给药,共3次。给药结束后取肺组织及血清,肺组织苏木素-伊红(HE)染色,进行肺水肿评分;计算各组大鼠肺组织干/湿(D/W)质量比;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清血管活性肠肽(VIP)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠肺组织水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白5(AQP5)、VIP、环磷酸腺苷(c AMP)、磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)、蛋白激酶A(PKA)蛋白的表达量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠肺组织中VIP m RNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺损伤明显,水肿评分升高,肺组织D/W降低(P<0.01),肺组织AQP1、AQP5、c AMP、p-PKA/PKA明显降低(P<0.05,P<0.01),VIP含量显著升高(P<0.01),肺组织VIP蛋白和m RNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,肺肠合治组大鼠肺损伤减轻,肺组织D/W显著升高(P<0.01),肺组织AQP1、AQP5、VIP、c AMP、p-PKA/PKA升高(P<0.05,P<0.01),肺组织VIP表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论:肺肠合治法能减轻急性肺损伤造成的肺组织水肿,其机制可能通过激活VIP/c AMP/PKA信号通路,进而促进水通道蛋白AQP1、AQP5的表达,增强肺组织的水液代谢有关。