沉默信息调节因子1、信号转导与转录激活因子3在眼睑基底细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)和信号转导与转录激活因子3(STAT3)在眼睑基底细胞癌组织中的表达情况及其与临床病理分类的关系。方法选取二四二医院2014年2月至2017年8月经病理证实为眼睑基底细胞癌且经手术切除保留的癌组织蜡块93例作为观察组,皮肤基底细胞乳头状瘤组织60例作为对照组。采用免疫组化法检测各组织中SIRT1、STAT3蛋白阳性表达率;Spearman法分析SIRT1和STAT3蛋白表达相关性;χ^(2)检验分析SIRT1和STAT3蛋白表达与眼睑基底细胞癌临床病理指标的联系。结果眼睑基底细胞癌组织中SIRT1和STAT3阳性表达率分别为79.57%(74/93)和76.34%(71/93),均显著高于皮肤基底细胞乳头状瘤组织(P<0.05);Spearman法分析眼睑基底细胞癌组织中SIRT1和STAT3蛋白表达具有正相关性(r=0.72,P<0.05);SIRT1、STAT3蛋白在眼睑基底细胞癌组织中的表达与病人年龄、增殖细胞核抗原(PCNA)增殖指数、肿瘤长径和肿瘤病理分型有关(P<0.05)。结论SIRT1和STAT3在眼睑基底细胞癌病人癌组织中均高表达,且呈正相关,与病人年龄、PCNA增殖指数、肿瘤长径和病理分型分类有关,可能是鉴别眼睑基底细胞癌恶性程度的潜在生物标志物。

乳腺癌患者癌组织中信号转导与激活因子1的表达及其临床意义

目的探讨乳腺癌患者癌组织中信号转导与激活因子1(STAT1)的表达及其临床意义。方法收集32例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织标本,采用实时荧光聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法和免疫组化法检测STAT1在乳腺癌及癌旁组织中的表达,比较不同临床病理特征患者癌组织STAT1 mRNA的表达水平,利用生物信息学网站Progno Scan分析GEO芯片中乳腺癌患者STAT1表达与预后的关系。结果 STAT1 mRNA及蛋白在乳腺癌组织中的相对表达量均高于癌旁组织(均P <0. 05)。Ki-67阴性、雌激素受体阳性患者的STAT1 mRNA相对表达水平分别高于Ki-67阳性者、雌激素受体阴性者(均P <0. 05)。生物信息学分析结果显示,STAT1的高表达与乳腺癌患者的无瘤生存时间短及预后差相关(均P <0. 05)。结论 STAT1在乳腺癌组织中表达水平较高,有助于乳腺癌的诊断及预后评估。

信号转导及转录激活因子3抑制剂增强肺癌细胞对多柔比星的敏感性

目的研究信号转导及转录激活因子3(STAT3)活化水平在肺癌细胞对多柔比星药物敏感性上的作用,明确STAT3抑制剂和化疗药物对肺癌增殖的协同抑制作用。方法通过c-Src重组表达载体质粒转染A549细胞获得过表达c-Src的A549-c-Src细胞;应用CCK8试验分析不同浓度的NSC 74859、多柔比星或两药联合应用对细胞增殖能力的影响;应用蛋白质印迹法检测不同处理后胞内总STAT3、活化STAT3或Src的表达水平。结果 A549细胞经过NSC 74859作用后其胞内的p STAT3表达水平明显低于未经NSC 74859处理的对照组细胞(t=5.90,P<0.05),STAT3活化水平下调导致多柔比星的IC50降低(F=186.50,P<0.05),增强A549细胞对多柔比星的敏感性。c-Src过表达促进了STAT3活化,A549-c-Src细胞中多柔比星的IC50值明显高于A549-pcDNA3细胞(F=17.26,P<0.05)。联合应用NSC 74859和多柔比星可通过抑制A549-c-Src细胞的STAT3活化水平,恢复其对化疗药物的敏感性。结论 STAT3活化水平下调可增强肺癌细胞对多柔比星的敏感性,STAT3抑制剂和多柔比星联合治疗对抑制肺癌细胞生长具有高度协同作用。

百里醌通过激活SIRT1/STAT3通路对脓毒症所致大鼠肝损伤和糖代谢紊乱的保护作用

目的:评估百里醌对脓毒症大鼠的治疗潜力,探讨其潜在的分子机制。方法:盲肠结扎穿刺(cecum ligation and puncture,CLP)诱导大鼠脓毒症模型,CLP术后每12 h经腹腔注射百里醌(20 mg/kg),持续3 d,同时腹腔注射或不注射沉默信息调节因子1(sirtuin1,SIRT1)抑制剂EX527(5 mg/kg)。检测大鼠空腹血糖和空腹胰岛素水平;利用赖氏分析法测定大鼠血清中天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)及丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)含量;利用免疫组化测定大鼠肝组织中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;Western blot测定p-Akt、t-Akt、SIRT1、p-信号转导因子和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、PEPCK、G6Pase和t-STAT3的含量;DCFH-DA荧光探针法测定肝脏组织内活性氧(reactive oxygen species,ROS)表达;免疫沉淀反应分析乙酰化STAT3在肝组织中的表达。结果:脓毒症大鼠肝脏SIRT1/STAT3通路明显受到抑制,AST、ALT、IL-6和TNF-α表达上调,血糖和胰岛素水平升高;百里醌可促进肝脏SIRT1表达和STAT3磷酸化,减轻脓毒症导致的肝功能障碍和糖代谢紊乱;EX527显著降低百里醌对脓毒症引起的肝损伤、糖代谢紊乱和STAT3失活的保护作用。结论:百里醌可作为一种潜在治疗脓毒症导致肝功能损害和糖代谢紊乱的药物,其作用机制可能通过激活肝脏SIRT1/STAT3通路来实现。

STATs研究新进展

细胞因子和生长因子通过细胞表面受体传递细胞与细胞之间的交流或对话。信息传递与转录激活因子(signaltransducersandactivatorsoftranscription,STATs)主要参与介导细胞因子和生长因子对细胞的信号转导作用,在细胞的增殖、分化、周期调控及凋亡过程中起重要作用。STATs的过度活化导致细胞的异常增殖和凋亡障碍,促进肿瘤的发生发展,并在肿瘤细胞的侵袭转移及免疫逃避中发挥重要功能。

严重腹腔感染大鼠JAK/STAT通路活化与多器官功能损害的关系

目的 观察Janus激酶 /信号转导子和转录激活因子 (JAK/STAT )通路在腹腔感染所致脓毒症大鼠组织中的活化规律及其与多器官功能损害的关系。方法 采用盲肠结扎穿孔 (CLP)法制作大鼠脓毒症模型。大鼠随机分为正常对照组、CLP组、JAK 2抑制剂 (AG4 90 )组和STAT 3抑制剂 (雷帕霉素 ,RPM)组。留取肝、肺、肾、肠组织测定STAT1/ 3活性 ,同时测定血清AST、BUN含量及肺组织髓过氧化物酶 (MPO)和肠组织二胺氧化酶 (DAO)活性。结果 CLP后 2h肝、肺、肠组织中STAT1均迅速活化 ,6～ 2 4h达高峰 ,而肾组织STAT1活化相对迟缓。肝、肺组织中STAT3活性亦明显升高 ,但肾、肠组织中未检测到活化的STAT 3。AG4 90、RPM早期处理后 ,除肾组织外 ,其他组织STAT1活性均有不同程度下降 (P <0 0 5或 0 0 1) ,肝、肺组织STAT3活性也显著降低。同时 ,AG4 90、RPM处理组血清AST、BUN水平和肺组织MPO活性在 2 4～ 4 8h均有不同程度下降 (P <0 0 5或 0 0 1) ,但小肠DAO活性无明显改变。结论 STAT1、STAT3在脓毒症时高度活化 ,并参与了严重腹腔感染所致脓毒症的病理过程。抑制JAK/STAT通路活化有助于多器官功能损害的防治。

大鼠腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1诱生机制的初步探讨

目的 探讨腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱生的分子机制。方法 取正常Wistar大鼠腹腔巨噬细胞置 2 4孔培养板中 (1× 10 6/孔 ) ,培养 3天后用内毒素 (LPS)刺激 ,观察LPS刺激与巨噬细胞HMGB1mRNA表达的时效关系及量效关系 ,同时观察氟达拉滨 (fludarabine,STAT1抑制剂 )及雷帕霉素 (rapamycin,STAT3抑制剂 )对HMGB1mRNA表达的影响。结果 LPS刺激可使大鼠腹腔巨噬细胞HMGB1mRNA表达明显上调 ,于攻击后 2 4～36h达峰值 ,至 4 8h减弱。LPS的刺激剂量为 75～10 0ng/ml时 ,HMGB1基因表达明显增强。经氟达拉滨和雷帕霉素处理均可明显下调HMGB1基因表达。结论 LPS可诱导大鼠腹腔巨噬细胞HMGB1mRNA表达 ,其诱生机制与Janus激酶 /信号转导子和转录激活因子 (JAK/STAT )途径密切相关。

Sirt1和Stat3在甲状腺癌中的表达及临床诊断意义

目的测定沉默信息调节因子1(Sirt1)、信号转导与转录激活因子3(Stat3)、纤维连接蛋白1(FN1)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)在甲状腺乳头状癌(PTC)和良性甲状腺病变中的表达,分析其对PTC的诊断价值,为PTC诊断和鉴别诊断提供依据。方法收集甲状腺疾病病理标本142例,其中PTC组83例,甲状腺腺瘤组28例,结节性甲状腺肿组21例,正常甲状腺组织组10例。采用免疫组织化学SP法和qPCR方法检测Sirt1、Stat3、FN1和E-cadherin在4种不同病理类型甲状腺组织中的表达。结果Sirt1、Stat3和FN1蛋白与mRNA在PTC组中的表达明显高于甲状腺腺瘤组、结节性甲状腺肿组和正常甲状腺组织组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。E-cadherin蛋白和mRNA在PTC组中的表达明显低于甲状腺腺瘤组、结节性甲状腺肿组和正常甲状腺组织组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。Sirt1和Stat3在PTC组中的表达与淋巴结转移密切相关,淋巴结转移组的表达明显增加,高于无淋巴结转移组(P均<0.05),不同性别、年龄患者间Sirt1和Stat3的表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。FN1和E-cadherin在PTC组中的表达与患者的性别、年龄和有无淋巴结转移均无关(P均>0.05)。单一免疫标志物用于诊断PTC时,Sirt1的特异度、灵敏度和诊断准确率均最高。不同组合免疫标志物用于诊断PTC时,Sirt1+Stat3+FN1组合和Sirt1+Stat3+FN1+E-cadherin组合的特异度并列第一(均为98.3%),以Sirt1+Stat3+FN1组合的诊断准确率最高,以Sirt1+FN1的灵敏度最高。结论Sirt1和Stat3在PTC的发生发展以及转移过程中发挥重要的作用。

白藜芦醇通过SIRT1/STAT3通路改善血管性痴呆大鼠学习记忆能力的机制研究

目的研究白藜芦醇对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆能力改善及对沉默信息调节因子1(SIRT1)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路的调控作用。方法将30只健康雄性SD大鼠中22只进行双侧颈总动脉永久结扎术(BCCAO)建立VD模型,筛选其中造模成功的大鼠16只,并随机分为模型组、治疗组,另设置假手术组为对照,每组8只。治疗组大鼠给予白藜芦醇(20 mg/kg)灌胃治疗,持续30 d;假手术组和模型组每天给予同等体积的生理盐水灌胃,持续30 d。通过Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力;免疫组织化学方法和Western bolt法检测各组额叶皮质SIRT1、STAT3以及白细胞介素(IL)-17的表达情况;ELISA法检测炎症因子IL-17的分泌情况。结果与假手术组相比较,模型组大鼠学习记忆能力显著降低(P<0.001),额叶皮质SIRT1表达显著降低(P<0.001),STAT3、IL-17表达显著升高(P<0.01);与模型组相比,治疗组大鼠学习记忆能力明显改善(P<0.05),额叶皮质SIRT1表达显著增多(P<0.05),STAT3、IL-17表达显著降低(P<0.05)。结论白藜芦醇灌胃治疗提高了大鼠学习与记忆能力,其机制可能与激活SIRT1/STAT3信号通路抑制炎症因子表达有关。

基于SIRT1/STAT3通路探讨盐酸戊乙奎醚对小鼠学习记忆能力的影响

目的探讨高剂量盐酸戊乙奎醚(PHC)对小鼠学习记忆能力的影响及其作用机制。方法将60只C57BL/6J小鼠随机分为对照组(腹腔注射等量的0.9%NaCl)、低剂量实验组(腹腔注射0.12 mg·kg^(-1)PHC)、高剂量实验组(腹腔注射5.00 mg·kg^(-1)PHC)、SRT1720组[腹腔注射5.00 mg·kg^(-1)PHC和5 mg·kg^(-1)沉默信息调节因子1(SIRT1)激活药SRT1720],每组15只。给药6 h后,用Morris水迷宫实验和Y迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,用蛋白质印迹法检测小鼠海马组织中SIRT1和信号转导及转录激活因子3(STAT3)蛋白的表达水平,用试剂盒检测小鼠海马组织胆碱乙酰转移酶(ChAT)水平,用免疫荧光检测海马组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性表达情况。结果对照组、低剂量实验组、高剂量实验组和SRT1720组小鼠给药6 h后穿越平台次数分别为(6.07±0.44)、(6.00±0.37)、(3.00±0.97)和(4.47±1.31)次,逃避潜伏期分别为(14.02±1.79)、(14.16±1.67)、(51.55±4.07)和(32.84±2.40)s,Y迷宫交替率分别为(60.90±5.18)%、(59.38±5.99)%、(39.80±4.45)%和(46.65±5.02)%,SIRT1蛋白相对表达水平分别为1.05±0.09、1.08±0.12、0.52±0.07和0.77±0.11,STAT3蛋白相对表达水平分别为0.37±0.03、0.38±0.06、0.68±0.06和0.53±0.08,ChAT水平分别为(306.08±20.11)、(296.33±36.11)、(209.99±18.91)和(250.42±25.22)pg·mL-1,GFAP平均光密度值分别为0.05±0.00、0.05±0.00、0.08±0.01和0.06±0.01。高剂量实验组的上述指标与对照组比较,高剂量实验组的上述指标与低剂量实验组比较,SRT1720组的上述指标与高剂量实验组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论高剂量的PHC可能通过抑制SIRT1/STAT3通路导致小鼠学习记忆能力下降。

白藜芦醇调控SIRT1/STAT1通路影响肝细胞癌恶性生物学过程

目的探讨白藜芦醇对肝细胞癌的作用及其相关机制,以期为肝细胞癌的治疗提供新思路。方法将HepG2细胞分为对照组、低剂量白藜芦醇组(RES‐L,10μmol/L)、高剂量组白藜芦醇(RES‐H,30μmol/L)和紫杉醇组(20μmol/L),通过MTT实验、集落形成实验、Transwell实验和细胞划痕实验分析白藜芦醇对HepG2细胞的活性、侵袭和迁移能力以及凋亡率的影响;采用实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法分析白藜芦醇对SIRT1/STAT1信号通路的影响。结果与对照组比较,白藜芦醇能够抑制HepG2细胞的活性[对照组、RES‐L组、RES‐H组、紫杉醇组分别为(100.875.78)%、(81.283.25)%、(46.368.05)%、(44.687.11)%],减少HepG2细胞集落形成数量[对照组、RES‐L组、RES‐H组、紫杉醇组分别为(102.526.82)%、(88.365.15)%、(30.266.05)%、(26.385.31)%],还能够抑制HepG2细胞的侵袭和迁移能力,促进HepG2细胞凋亡[对照组、RES‐L组、RES‐H组、紫杉醇组分别为(8.32±0.72)%、(12.16±3.05)%、(26.13±1.25)%、(41.88±6.81%)%]。另外,与对照组比较,白藜芦醇处理后,SIRT1和STAT1蛋白表达水平增加。结论白藜芦醇能够抑制HepG2细胞的恶性生物学过程,并且白藜芦醇的这一作用可能与激活SIRT1/STAT1信号通路有关。

大鼠PIAS3蛋白表达、纯化及生物信息学分析

[目的]构建大鼠His-PIAS3真核表达载体,将His-PIAS3于体外进行表达纯化,并对PIAS3进行生物信息学分析。[方法]采用分子克隆构建His-PIAS3-pcDNA3.1真核表达载体,之后转染入HEK293细胞进行表达,考马斯亮蓝染色检测整体蛋白变化,免疫印迹鉴定His-PIAS3蛋白表达及细胞整体蛋白SUMO化,镍柱纯化His-PIAS3蛋白。生物信息学方法分析大鼠PIAS3蛋白的理化性质、亲疏水性、二级结构及序列的保守性。[结果]His-PIAS3目的基因扩增成功,且亚克隆入pcDNA3.1载体;和空载体组相比,转染His-PIAS3-pcDNA3.1组PIAS3蛋白表达水平明显增加,且整体蛋白的SUMO化水平显著升高;镍柱纯化可获得较高纯度的His-PIAS3蛋白。生物信息学结果显示,大鼠PIAS3蛋白包含628个氨基酸残基,分子量为68.3 kDa,理论等电点为8.05,亲水性平均值为-0.242;PIAS3主要定位于膜内;PIAS3蛋白的二级结构主要由18.79%α-螺旋、13.69%延伸链和67.52%无规卷曲组成;不同物种间pias3序列相似性均在70%以上。[结论]His-PIAS3真核表达载体构建成功;His-PIAS3可在HEK293细胞中高效表达,具有较高酶活性;获得较高纯度His-PIAS3蛋白;PIAS3主要定位于核内,为碱性、亲水性不稳定蛋白,具有高度保守性。