乙型肝炎病毒Ⅹ蛋白对肝癌细胞细胞色素P4502El表达的调控及其作用机制

且的探讨乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）抑制细胞色素P4502El（CYP2E1）表达的作用机制及其对肝细胞癌转移的影响。方法将CYP2E1启动子区域划分为10个不同长度的片段并分别克隆到质粒PGL3-Basic上，与HBx表达载体（pCMV-2B-FLAG-X）共转染于HepG2细胞中测定荧光素酶活性以确定HBx作用区域。凝胶电泳迁移率试验分析转录因子与DNA的结合；CCK-8检测细胞的增殖l细胞的侵袭测定采用Martrigel试验。增殖试验、侵袭试验数据比较用t检验，荧光素酶沿f生数据比较采用方差分析。结果通过对CYP2E1启动子的缺失分析，重组子P8（删除-483～-274bp后的P7部分）活性与P7比较明显增高，达216．69％（F=142．13，P=0．002），确定HBx作用区域位于P7（-483～-274bp），进而通过MatInspector分析该区域存有肝细胞核因子4α（HNF4α）与胆固醇调节元件结合蛋白-I（SREBP-1）两转录因子结合位点并对该两序列进行突变分析，将mut-HNF4α、mut-SREBP-1及mut-Duel重组质粒与或不与pCMV-2BFLAG-X蛋白表达载体转染HepG2细胞，测定荧光素酶活性，分别为8．6％、24．44％、147．24％，进一步证实转录因子HNF40α与sREBP-l参与HBx对CYP2E1的调控∽=112．24，P=0．001）；凝胶电泳迁移率试验结果显示转录因子HNF40α与SREBP-l是通过与CYP2E1启动子的结合而发挥作用；CCK-8结果显示转染pCMV-2B-FLAG-X蛋白的HepG2细胞的增殖吸光度值4为0．86土0．11，未转染组增殖吸光度值爿为O．73±0．09，两组比较，差异有统计学意义（t=5．62，尸=0．031）iHepG2细胞的侵袭能力也强于对照组，穿膜细胞数为（40．0土8．1）个，显著高于对照组穿膜细胞数（18．0土3．O）个（f=21．54，P=0．001）；加入P13K与JNK信号通路抑制剂Wortm11annin sP600125后可抑制HBx对CYP2E1mRNA与蛋白水平表达的促进作用及对细胞增殖、侵袭的促进作用，提示P13K与JNK信号通路参与该调控。结论HBx可能通过P13K与JNK信号通路激活转录因子HNF40α与SREBP-1，然后作用于CYP2E1启动子抑制CYP2E1的表达，进而促进肝癌的生长与侵袭。