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抗体修饰DNA测序酶的开发及其应用
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作者 宋辉 曹文刚 +1 位作者 肖晓文 杜军 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期84-93,共10页
【目的】开发一种新型DNA测序酶,解决一代测序技术应对复杂DNA结构模板所面临的主要挑战,如测序信号中断或测序信号快速衰减。【方法】从NCBI数据库中挖掘到了Taq DNA聚合酶和单链结合蛋白SSB基因信息,利用遗传融合、定点突变及基因设... 【目的】开发一种新型DNA测序酶,解决一代测序技术应对复杂DNA结构模板所面临的主要挑战,如测序信号中断或测序信号快速衰减。【方法】从NCBI数据库中挖掘到了Taq DNA聚合酶和单链结合蛋白SSB基因信息,利用遗传融合、定点突变及基因设计技术获得了一种新型的测序酶Sso-Sequenase。利用亲和层析和离子交换层析,获得了纯化的测序酶。利用抗体修饰技术改良了Sso-Sequenase的性能,并且利用STR技术对其热启动性能进行了表征。选取多组不同类型的复杂模板,采用一代技术对比分析了Sso-Sequenase测序酶试剂盒和传统BigDye测序试剂盒的测序表现。【结果】Sso-Sequenase在大肠杆菌中稳定表达,纯度达到95%以上,产量高达10.5 mg/L。当温度低于35℃时,Sso-Sequenase表现出热启动活性。在复杂模板的一代测序反应中,如重复序列、高GC和发夹结构等样本,Sso-Sequenase测序酶成功完成了所有样本的测序,序列的平均碱基质量QV大于20。相比而言,BigDye测序试剂盒在处理这些复杂样本时,多数样本测序信号出现了显著衰减或中断。【结论】开发了一种纯度好、产量高,兼具热启动活性的DNA测序酶Sso-Sequenase及测序试剂盒,显著提高了复杂DNA结构模板(重复序列、高GC和发夹结构)测序成功率。 展开更多
关键词 DNA测序酶 抗体修饰 复杂模板 测序
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蓝藻抗病毒蛋白-N的制备、生物活性鉴定及其多克隆抗体的制备和修饰
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作者 韩波 杨辉 +3 位作者 王巧利 陈伟 钱垂文 熊盛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期531-534,共4页
目的:纯化CVN重组蛋白,检测其抗病毒活性,制备CVN多克隆抗体,并对其进行纯化和修饰。方法:利用两步Ni-NTA亲和层析和一步SUMO酶切制备CVN抗原,CPE法观察其抗病毒活性,活性抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,ELISA及Western blot鉴定其... 目的:纯化CVN重组蛋白,检测其抗病毒活性,制备CVN多克隆抗体,并对其进行纯化和修饰。方法:利用两步Ni-NTA亲和层析和一步SUMO酶切制备CVN抗原,CPE法观察其抗病毒活性,活性抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,ELISA及Western blot鉴定其效价和特异性,抗血清经硫酸铵初步沉淀和DEAE离子交换层析获得纯化抗体,纯化抗体通过辣根过氧化物酶(HRP)标记获得修饰抗体。结果:纯化获得纯度达95%以上且具有明显抗流感病毒作用的非融合CVN,利用所得CVN抗原成功制备CVN多克隆抗体,酶联免疫分析显示其效价达到1∶16 000以上,Western blot分析表明其具明显特异性。抗血清经盐析和DEAE离子柱层析后获得效价为1∶6 400高纯度纯化抗体,经HRP修饰后获得具有较高生物活性的标记抗体。结论:获得高纯度,高效价兔抗CVN多克隆抗体,以及HRP标记的兔抗CVN多克隆抗体,为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 CVN 抗病毒活性 多克隆抗体 修饰抗体
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冠心病患者血清氧化修饰低密度脂蛋白抗体和可溶性细胞间黏附分子相关性研究
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作者 柏庆利 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2005年第4期330-331,334,共3页
目的:探讨脂质氧化沉积和内皮损伤在动脉粥样硬化(AS)形成中的相互作用。方法:检测38例心绞痛患者、24例急性心肌梗死患者和20例正常人血清中氧化修饰低密度脂蛋白抗体(OX-LDL-Ab)滴度和可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)水平以及它们之... 目的:探讨脂质氧化沉积和内皮损伤在动脉粥样硬化(AS)形成中的相互作用。方法:检测38例心绞痛患者、24例急性心肌梗死患者和20例正常人血清中氧化修饰低密度脂蛋白抗体(OX-LDL-Ab)滴度和可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)水平以及它们之间的相关性。结果:冠心病患者血清中OX-LDL-Ab滴度明显高于正常对照组,其中心肌梗死患者血清中最高。OX-LDL-Ab与sICAM-1呈正相关。结论:冠心病患者体内低密度脂蛋白(LDL)氧化修饰和内皮损伤增加,二者有相互促进作用。 展开更多
关键词 冠状动脉粥样硬化 氧化修饰低密度脂蛋白抗体 可溶性细胞间黏附分子-1
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抗体修饰方法及其应用的研究进展
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作者 胡化静 谭树华 《生物技术世界》 2015年第10期273-273,共1页
抗体在医疗领域的应用十分广泛,可通过各种修饰方式应用于疾病的诊断和治疗,本文主要对抗体的修饰方法及其应用进行综述。
关键词 抗体 抗体修饰 应用
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多囊卵巢综合征患者血清中MDA修饰蛋白抗体的研究 被引量:1
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作者 雷锦丰 李志英 胡秀娟 《中国医药导报》 CAS 2008年第11期35-36,共2页
目的:研究多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清MDA修饰蛋白、抗子宫内膜抗体(EMAb)MDA修饰人血清白蛋白抗体(anti-HAS-MDA)是否较正常人高,同时探讨EMAb的特异性是否与氧化应激衍生物——过氧化物修饰蛋白有关。方法:PCOS患者20例,对照组20例... 目的:研究多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清MDA修饰蛋白、抗子宫内膜抗体(EMAb)MDA修饰人血清白蛋白抗体(anti-HAS-MDA)是否较正常人高,同时探讨EMAb的特异性是否与氧化应激衍生物——过氧化物修饰蛋白有关。方法:PCOS患者20例,对照组20例,抽取静脉血取血清,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测EMAb和anti-HAS-MDA,比色法检测MDA修饰蛋白,统计EMAb是否与anti-HAS-MDA相关。结果:PCOS患者EMAb、anti-HAS-MDA和MDA修饰蛋白比对照组显著增高,且EMAb和anti-HAS-MDA的变化呈正相关。结论:PCOS患者血清中EMAb、MDA修饰蛋白的升高,证实在PCOS患者中氧化应激损伤和自身免疫反应的存在;anti-HAS-MDA和EMAb的升高呈正相关说明EMAb的特异性可能与过氧化物修饰蛋白有关,提示PCOS患者体内氧化应激损伤和自身免疫反应的内在联系。 展开更多
关键词 多囊卵巢综合征(PCOS) 抗子宫内膜抗体 MDA修饰蛋白 MDA修饰人血清白蛋白抗体
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功能材料表面修饰用于循环肿瘤细胞的捕获
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作者 张正涛 阮梅林 +1 位作者 陈朝会 何荣祥 《纳米技术》 CAS 2021年第1期1-7,共7页
本研究以循环肿瘤细胞(MCF-7)为研究对象,利用软光刻技术制备了微米尺寸的微柱,利用静电纺丝技术在含有微柱结构的基底上面纺上PLGA纳米纤维,形成一种微米和纳米复合尺寸的生物界面,在纳米纤维上修饰特异性抗体,实现肿瘤细胞(MCF-7)的... 本研究以循环肿瘤细胞(MCF-7)为研究对象,利用软光刻技术制备了微米尺寸的微柱,利用静电纺丝技术在含有微柱结构的基底上面纺上PLGA纳米纤维,形成一种微米和纳米复合尺寸的生物界面,在纳米纤维上修饰特异性抗体,实现肿瘤细胞(MCF-7)的捕获。这种研究方法结合了微流控技术和静电纺丝技术,制备出一种三维微柱网络支架结构,增大了细胞的捕获空间,再通过对微结构上的纳米纤维进行改性,提高了循环肿瘤细胞检测的灵敏度,这种研究方法大大提高了循环肿瘤细胞检测的效率,为临床癌症检测提供了新的研究方向。 展开更多
关键词 微流控芯片 循环肿瘤细胞 抗体修饰 静电纺丝 捕获
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抗小泛素样修饰物激活酶抗体阳性结缔组织病患者临床特征
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作者 罗忠灵 崔贝贝 +1 位作者 谢其冰 尹耕 《华西医学》 CAS 2023年第1期45-50,共6页
目的探究抗小泛素样修饰物激活酶(small ubiquitin-like modifier activating enzyme,SAE)抗体阳性结缔组织病患者的临床特征。方法回顾性选择2015年1月1日—2021年5月30日于四川大学华西医院就诊的完善了肌炎自身抗体筛查的患者,筛选出... 目的探究抗小泛素样修饰物激活酶(small ubiquitin-like modifier activating enzyme,SAE)抗体阳性结缔组织病患者的临床特征。方法回顾性选择2015年1月1日—2021年5月30日于四川大学华西医院就诊的完善了肌炎自身抗体筛查的患者,筛选出抗SAE抗体阳性的患者。根据抗SAE抗体阳性患者的临床资料分为以下几组:(1)合并肿瘤组、未合并肿瘤组;(2)合并ILD组、未合并ILD组;(3)炎性肌病组、非炎性肌病组。收集上述患者的临床症状、体征、实验室检查、影像学检查等临床资料。结果共筛选接受肌炎自身抗体检查患者1594例,其中抗SAE抗体阳性56例,阳性率为3.5%。在56例患者中,32.1%皮肤受累、35.7%肌肉受累、12.5%关节受累、5.4%吞咽困难、5.4%体重下降、58.9%合并间质性肺疾病(interstitial lung disease,ILD)以及12.5%存在肿瘤病史。合并肿瘤组和未合并肿瘤组在年龄、性别、以及是否有皮肤受累、肌肉受累、关节受累、呼吸系统受累方面进行比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。除年龄、肌肉受累频率、抗Ro-52抗体的阳性率外,其余指标在合并ILD组和未合并ILD组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。除ILD阳性率、皮肤受累频率、肌肉受累频率、肌酸激酶和羟丁酸脱氢酶水平外(P<0.05),其余指标在非炎性肌病组和炎性肌病组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论抗SAE抗体阳性患者主要表现为皮肤及肌肉症状,容易出现ILD、可合并恶性肿瘤、吞咽困难等。抗SAE抗体阳性合并ILD的患者,年龄更高,肌肉损伤更少,抗Ro-52抗体的阳性率更高。抗SAE抗体不仅出现于炎性肌病患者,亦可出现于非炎性肌病患者中,常合并较高频率ILD及较少肌肉累及。 展开更多
关键词 肌炎特异性自身抗体 抗小泛素样修饰物激活酶抗体 结缔组织病
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一种高稳定性、高捕获率免疫胶体金的构建 被引量:3
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作者 张天宇 侯金秀 +1 位作者 袁嘉晟 周昕 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS 北大核心 2020年第3期1-8,共8页
为构建一种核酸免疫胶体金的制备方法,将抗体与寡核苷酸共价连接,并与含互补序列的寡核苷酸修饰的胶体金杂交。紫外扫描检测显示,使用4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐(SMCC)共价偶联修饰的抗体-核酸,抗体分子... 为构建一种核酸免疫胶体金的制备方法,将抗体与寡核苷酸共价连接,并与含互补序列的寡核苷酸修饰的胶体金杂交。紫外扫描检测显示,使用4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐(SMCC)共价偶联修饰的抗体-核酸,抗体分子修饰核酸的数量最多。通过蛋白定量、琼脂糖凝胶电泳、盐沉、pH调节等试验,比较核酸免疫胶体金和传统静电吸附方式制备的免疫胶体金的抗体结合率、目标捕获率以及探针的稳定性,并初步测试了新型探针在试纸条检测上的应用。结果表明:构建的核酸免疫胶体金的抗体结合率比传统免疫胶体金高20%,探针捕获目标的效率高40%(以蓝耳病毒为例),稳定性更好(0.5~1 mol·L^-1盐浓度及pH 4~10),试纸条检测有明显特异性(以蓝耳病毒为例)。这一研究成功构建了一种具有更好抗体负载率、靶病毒结合率、稳定性的核酸免疫胶体金,有望替代传统的免疫胶体金,制备更稳定更灵敏的试纸条,用于抗原、抗体及病毒的快速检测。 展开更多
关键词 免疫胶体金 DNA修饰 抗体修饰 病原体检测
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Preparation of copper nanoparticles modified with [BMIm]BF_4 ionic liquid 被引量:5
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作者 Su Yongqing Li Cong Yang Mingdi Cai Ying Ren Nianjun 《Engineering Sciences》 EI 2010年第2期20-23,共4页
Copper nanoparticles was prepared by ascorbic acid reducing CuC12 solution modified with [ BMIm ] BF4 ionic liquid. The size of copper nanoparticles was obviously affected by the concentration of Cu2+ . The diameter ... Copper nanoparticles was prepared by ascorbic acid reducing CuC12 solution modified with [ BMIm ] BF4 ionic liquid. The size of copper nanoparticles was obviously affected by the concentration of Cu2+ . The diameter of nanoparticles was smaller than 10 nm when the Cu2+ concentration was smaller than 2× 10.2 moL/L. The pH and temperature of reductive reaction had no obvious effect on the size of copper nanoparticles. 展开更多
关键词 COPPER NANOPARTICLES [ BMIm ] BF4 ascorbic acid PREPARATION
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Research progress of polysaccharide nanocarriers based on traditional Chinese medicine Thallus japonica
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作者 Yue-Ming Yu Kai-Li Wang +5 位作者 Bing-Jie Wang Lei Fang Meng-Na Liu Xin-Xin Fan Hong-Jie Mu Da-Quan Chen 《TMR Cancer》 2018年第3期82-86,共5页
In the last few years,the overall incidence of malignant tumors has been increasing in the country.In order to find effective anti-tumor drugs,the development and modification of natural drugs have become the focus of... In the last few years,the overall incidence of malignant tumors has been increasing in the country.In order to find effective anti-tumor drugs,the development and modification of natural drugs have become the focus of domestic and international researchers.Thallus japonica,composed of polysaccharides,minerals,amino acids,natural proteins,and lipids,is a traditional Chinese medicine with the functions of eliminating phlegm and disinhibiting water.At the same time,it has the edible and medicinal efficacy.There are a lot of active components that have been demonstrated to possess diverse biological activities including anti-tumor,anti-viral,anti-coagulant,and anti-bacterial,and so on in thallus japonica.Laminarin,composed of glucose,galactose,fucose and so on,is a common and high molecular weight heteropolysaccharide in brown algae(such as thallus japonica,kelp),and it is a potential anti-tumor drug.However,the lack of biological activity of natural polysaccharides limits the application of polysaccharides,so it is necessary to modify the structure or physical and chemical properties of it to enhance the anti-tumor activity of polysaccharides.In recent years,in order to improve the biological activity of laminarin,domestic and international researchers have introduced some groups on the surface of it.Moreover,use the function of modified groups to cause the changes in physicochemical property,spatial structure,substituent group and molecular weight to improve the anti-tumor activity in vitro and in vivo.Therefore,the structural modification has become the main and powerful means to improve the activity of polysaccharides. 展开更多
关键词 LAMINARIN Carrier ANTI-TUMOR Modification
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Microfluidic Immunoprecipitation for Post-Translational Modified Protein Purification
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作者 XIA Hu Bobby Mathew +2 位作者 Tom John Hisham Hegab June Feng 《Chinese Journal of Biomedical Engineering(English Edition)》 2012年第2期80-86,共7页
In this paper, we report an antibody functionalized microimmunopreci- pitation (IX IP) method used for enrich lowabundant post-translational modified (PT~ proteins. The device is fabricated by inert, nontoxic and d... In this paper, we report an antibody functionalized microimmunopreci- pitation (IX IP) method used for enrich lowabundant post-translational modified (PT~ proteins. The device is fabricated by inert, nontoxic and disposable polydimethylsiloxane (PDMS) using a silane-based chemical modification protocol, which yield antibody- terminated PDMS surfaces. In this study, the IX IP device is specifically designed for the purification of carbonylated protein, a representative example here to illustrate the potential applications for any other PTMs, which could be immuno-tagged by specific antibodies. The test model in vitro oxidized bovine serum albumin (BSA) was first derivitized by dinitrophenylhydrazide (DNPH) and then captured by the anti-DNP immobilized on this Ix lP device. The surface functional group mapping was systematically analyzed and validated by fluorescence microscopy. Quantitative study of DNP-derivatized carbonylated protein capture recovery and elution efficiency of the device was also studied. We also envision that this proteome enrichment Ix IP device can be assembled with other lab-on-a-chip components, such as microelectrophoresis or micro-chromatographic devices for follow-up protein analysis. This selective enrichment of modified proteins greatly facilitates the study of low abundant protein biomarkers discovery. 展开更多
关键词 post-translational modification microimmunoprecipitation polydi-methylsiloxane microiluidic device
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MiRNA-126硬脂胺阳离子脂质体递送系统的构建及细胞摄取考察
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作者 唐永瑜 邰诗蝶 +5 位作者 吴兴杰 陈英 冯发进 沈祥春 邹弢 陶玲 《药物评价研究》 CAS 北大核心 2024年第9期2006-2016,共11页
目的基于阳离子脂质体制备血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)单克隆抗体(VCAM-1 mAb)修饰的负载微小RNA-126(miR-126)的靶向递送系统,并初步评价其稳定性、细胞毒性及细胞摄取。方法采用薄膜分散-挤出法制备硬脂胺阳离子脂质体(SCL),以脂质体... 目的基于阳离子脂质体制备血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)单克隆抗体(VCAM-1 mAb)修饰的负载微小RNA-126(miR-126)的靶向递送系统,并初步评价其稳定性、细胞毒性及细胞摄取。方法采用薄膜分散-挤出法制备硬脂胺阳离子脂质体(SCL),以脂质体粒径、电位为指标,单因素法考察大豆磷脂与胆固醇质量比、硬脂胺用量、无水乙醇的用量、成膜温度、水合介质用量、水合制备温度、水合制备时间;并考察其稀释稳定性及储存稳定性。采用琼脂糖凝胶阻滞实验考察SCL对miR-126的负载能力及对酶解的保护效果。利用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)交联法制备VCAM-1 mAb修饰的SCL(Va-SCL),并通过SDS-PAGE法考察VCAM-1 mAb与SCL的耦连效率。MTT法考察其对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的毒性,流式细胞术和荧光显微镜考察正常HUVECs及LPS(1μg·mL^(-1))刺激后HUVECs对miR-126、SCL/miR-126、Va-SCL/miR-126的摄取情况。结果精密称量大豆磷脂120mg、胆固醇40mg、硬脂胺10 mg于茄形瓶中,加入5 mL无水乙醇,50℃超声(功率300 W、频率40 kHz)使其充分溶解,肉眼观察无可见颗粒物或者不溶物,水浴减压蒸发除去有机溶剂,在瓶壁上形成均匀透明的脂质薄膜;加入12 mL DEPC水作为水合介质,水浴超声30 min,挤出器过孔径为200 nm聚碳酸酯膜7次,取续滤液,得SCL,稳定性良好。当氮磷比为10∶1时,SCL能够有效负载miR-126;miR-126通过静电吸附于SCL表面,SCL一定程度上保护miR-126不被酶解。SDS-PAGE结果显示,VCAM-1mAb与SCL成功偶联,接枝率为(53.2±7.6)%。MTT结果显示,Va-SCL、Va-SCL/miR-126对HUVECs的半数抑制浓度(IC_(50))值分别为17.38、71.61 nmol·L^(-1),SCL、SCL/miR-126的IC_(50)值分别为81.03、97.79 nmol·L^(-1)。荧光显微镜及流式结果均显示Va-SCL/miR-126的细胞摄取效果更为明显。结论成功制备了Va-SCL/miR-126,能明显增加miR-126的细胞摄取。 展开更多
关键词 阳离子脂质体 MIR-126 薄膜分散法 EDC/NHS法 血管细胞黏附分子-1单克隆抗体修饰
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基于磁致伸缩材料的猪瘟病毒无线免疫传感器
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作者 郭星 高爽 +1 位作者 桑胜波 张文栋 《分析试验室》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期536-538,共3页
通过在磁致伸缩材料表面形成金-硫键自组装膜固载猪瘟多抗,构建了一种新型、灵敏、便携、低成本的猪瘟病毒无线免疫传感器。该传感器基于抗原抗体特异性结合使猪瘟病毒附着在磁致伸缩材料表面从而导致磁弹片共振频率降低的原理,通过测... 通过在磁致伸缩材料表面形成金-硫键自组装膜固载猪瘟多抗,构建了一种新型、灵敏、便携、低成本的猪瘟病毒无线免疫传感器。该传感器基于抗原抗体特异性结合使猪瘟病毒附着在磁致伸缩材料表面从而导致磁弹片共振频率降低的原理,通过测定共振频率偏移量实现对猪瘟病毒的无线检测。采用扫描电子显微镜(SEM)对抗体修饰及猪瘟病毒检测过程进行了表征,利用该传感器对不同浓度的猪瘟病毒进行检测,线性范围为0.5~2.5μg/m L,响应灵敏度为65 Hz/(μg·m L^(-1)),检出限为0.5μg/m L。 展开更多
关键词 免疫传感器 磁致伸缩材料 猪瘟病毒 抗体修饰
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