HPLC/ESI-Q-TOFMS鉴定淋巴癌患者尿液中的修饰核苷

尿液修饰核苷反映了机体RNA的代谢速率及细胞增殖状况,可以作为非常有发展潜力的肿瘤标志物进行研究.尿液中的修饰核苷采用Oasis HLB固相萃取柱进行纯化,利用高效液相色谱与电喷雾质谱联用(HPLC-ESI-MS)、高分辨质谱(HRMS)及串联质谱(MS/MS)技术进行分离鉴定.对淋巴癌患者尿中修饰核苷研究发现,9种尿液核苷与标样的信息完全一致,17种无标样的尿液修饰核苷也被鉴定,其中包括3-甲基腺苷、7-甲基腺嘌呤、5′-脱氢-2′-脱氧次黄苷、3-甲基鸟嘌呤、O6-甲基鸟苷和7-甲基-1-乙基鸟苷6种未见报道的新尿液修饰核苷.此方法能在无对照品的情况下快速、准确地提纯、分离和鉴定复杂的生物样品.

尿中修饰核苷代谢轮廓分析在肺癌诊断中的作用

目的探讨尿中修饰核苷代谢轮廓分析在肺癌诊断中的作用。方法应用二维液相色谱在线分析系统得到42名正常人和80例肺癌患者尿中修饰核苷代谢轮廓谱,结合偏最小二乘判别分析法(PLS-DA)对所得到的代谢轮廓谱数据进行分析。结果尿中修饰核苷代谢轮廓谱分析结合PLS-DA数据处理方法可以用于区分正常人与肺癌患者,其模型判断预测值为Q2=0.744。讨论尿中修饰核苷代谢轮廓分析对肺癌的诊断有一定的参考意义。

尿中5种修饰核苷用于肺癌高危人群筛查分子标志物的可行性研究

目的:探讨尿中5种修饰核苷Pseu,m1A,m1I,m1G及m2G作为肺癌诊断分子标志的可能性。方法:应用高效液相色谱在线系统分别检测肺癌患者55例(其中包括肺鳞癌18例,肺腺癌23例与小细胞肺癌14例)与正常人30例尿中Pseu,m1A,m1I,m1G及m2G五种核苷,同时应用液相色谱法检测尿中肌酐,以两者比值表示核苷浓度;分析其与肺癌发生、病理分型及肿瘤分期之间的关系。结果:肺癌患者尿中Pseu,m1A,m1I,m1G及m2G浓度均显著高于正常人(P值均<0.01)。小细胞癌组m1I浓度显著高于腺癌组(P=0.045);m1A、m1I和Pseu3者联合检测对肺癌诊断的敏感性与4-5种联合检测相同,并且显著高于m1A单项检测(P=0.037)。结论:尿中Pseu,m1A,m1I,m1G及m2G可能成为肺癌诊断的分子标志物,也可能有助于肺癌病理分型。

尿中修饰核苷在胃癌诊断中的意义

[目的]探讨尿中修饰核苷检测在胃癌诊断中的价值。[方法]应用高效液相色谱方法分别检测80名正常人与60例胃癌患者尿中Pseu、C、X、m1A、m2G和ac4C等6种核苷的水平。[结果]60例胃癌患者尿中6种核苷的平均水平明显高于正常人(P<0.01);C与肿瘤大小呈正相关(P<0.05);Pseu、X、m1A、m2G和ac4C与肿瘤TNM分期呈正相关(P<0.05)。[结论]尿中修饰核苷检测对胃癌的诊断有一定意义。

基于LC-MS技术修饰核苷作为肿瘤标志物的研究进展

修饰核苷是RNA的代谢产物,目前认为是一种广谱的潜在肿瘤标志物(tumor marker,TM),在肿瘤患者尿液中排放量较正常人显著升高。液相色谱-质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)技术结合了色谱的高分离能力和质谱的高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点,已逐渐成为修饰核苷分析的的主要技术平台之一。本文综述了近年来LC-MS技术在尿液修饰核苷分析方面的现状与进展,并对其发展前景进行展望。

恶性肿瘤患者尿中修饰核苷的检测

应用毛细管电泳法分别对35名健康成人及32名恶性肿瘤患者尿中13种核苷进行检测 ,结果肿瘤患者的平均值比健康人明显升高 ,提示其可用于恶性肿瘤的辅助诊断。

修饰核苷对酵母tRNA^(phe)反密码区域的贡献

采用单独或结合方式掺入自然出现的修饰核苷 ,合成酵母苯丙氨酸反密码区域 17聚体tRNApheAC,测定其van’tHoff热力学参数。从原子水平上理解 ψ3 9,m1G3 7,m5C40 ,dm5C40 ,Cm3 2 ,Gm3 4 对结构与功能的贡献。

反相高效液相色谱法同时测定胸腔积液中3种氨基酸和3种修饰核苷

提出了反相高效液相色谱法同时测定胸腔积液中3种氨基酸和3种修饰核苷的方法.样品用甲醇提取,离心后上清液以Waters sunfire C18色谱柱为分离柱,不同体积比的甲醇和10 mmol·L-1乙酸铵溶液(pH 4.6)的混合溶液为流动相进行梯度洗脱,在278 nm处测定酪氨酸、色氨酸,257 nm处测定2 '-脱氧鸟苷、次黄嘌呤核苷和鸟嘌呤核苷,215 nm处测定苯丙氨酸.苯丙氨酸的线性范围为2～2 000μmol·L-1,其余5种化合物为1～1 000 μmol·L-1.方法的检出限(3S/N)在0.008 3～0.50μmol·L-1之间.加标回收率在85.8％～106％之间.

尿中修饰核苷水平在膀胱移行细胞癌诊断及预测预后中的意义

目的探讨尿中7种修饰核苷M1A、ac4C、A、06-MeG、MTA、1-MeI、1-MeG检测在膀胱移行细胞癌(bladdertransitional cell carcinoma,BTCC)诊断及预测预后中的意义。方法选取经病理证实为膀胱移行细胞癌患者45例为膀胱癌组,其中初发32例,复发13例;组织学分级:Ⅰ级22例,Ⅱ级16例,Ⅲ级7例;浸润性癌16例,非浸润癌29例。选取16例正常人为对照组。应用高效液相色谱/电喷雾-四极杆-飞行时间质谱技术(HPLC/ESI-Q-TOF-MS)检测膀胱癌组和对照组尿液中M1A、ac4C、A、06-MeG、MTA、1-MeI、1-MeG 7种修饰核苷水平(核苷含量/肌酐)。结果 BTCC组尿液M1A、ac4C、06-MeG和1-MeI水平[分别为(4.61±1.82)、(0.63±0.29)、(0.46±0.35)和(12.28±9.74)],均显著高于对照组[(2.85±0.68)、(0.35±0.15)、(0.21±0.11)和(5.39±2.41),P<0.01];诊断准确度由大到小为1-MeI>M1A>ac4C>06-MeG,且1-MeI与M1A联合检测可达到对膀胱癌最高的灵敏度和特异性,分别为92.45%和87.50%。BTCC组织学分级之间以及浸润性与非浸润性之间尿液修饰核苷水平差异均无统计学意义(P>0.05)。复发患者尿液M1A和ac4C水平分别为(6.74±1.23)、(0.83±0.41),均显著性高于初发患者[(3.93±1.43)、(0.57±0.20),P<0.05],M1A与其复发时间呈负相关(r=-0.895,P<0.01)。结论尿液M1A联合1-MeI检测在膀胱移行细胞癌诊断中意义重大,M1A和ac4C有助于预测膀胱移行细胞癌患者预后。

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定肿瘤细胞mRNA中12种正常核苷和修饰核苷

建立了一种肿瘤细胞mRNA中12种正常核苷和修饰核苷的分析方法。肿瘤细胞样品经总RNA提取、mRNA纯化和mRNA水解后,加入8-溴鸟苷(8Br-G)为内标,以0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸甲醇溶液为流动相,采用Agilent RRHD SB-C18(2.1 mm×50 mm,1.8μm)色谱柱进行分离,电喷雾电离源正离子扫描(ESI+),多反应监测(MRM)模式检测。该方法符合方法学验证要求,12种正常核苷和修饰核苷在一定浓度范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.99,定量下限(LOQ)为0.17~3.13 ng/mL,检出限(LOD)为0.08~1.56 ng/mL。将建立的方法应用于人鼻咽癌5-8F细胞系、人宫颈癌Hela细胞系和人胚肾上皮293T细胞系,成功地检测出多种修饰核苷水平。该方法细胞用量少(每样品2×106个),分析时间短(每样品6 min),灵敏度高,可为癌症研究和临床诊断等提供一种有效的分析方法。

体液中修饰核苷及环核甘酸等生化成份的改变

近年来,许多研究致力于在肿赐病人体内找出肿忘的生物学标志,期望用这些标志尽早发现病人或监同病人对治疗的反应和预后“-’‘。最近也有人月这些标志物对肿瘤进行分类[‘j。肿瘤的标志包括3个范畴,即减素,蛋白和核酸衍生物。在所有的恶性肿油组织中,完成m＊A甲基化的酶异常活跃,而良性肿泡则例外。而且这些 t R NA和酶的分解产物对肿过是特异的,结构上与正常组织不同。

5种尿液修饰核苷联合血浆EBV-DNA定量检测在鼻咽癌诊断中的可行性研究

目的探讨5种尿液修饰核苷联合血浆EBV-DNA定量检测在鼻咽癌诊断中的可行性。方法选取2020年1~6月浙江省肿瘤医院收治的56例初诊鼻咽癌患者作为鼻咽癌组,选取同期32例健康体检者作为正常对照组。采用液相色谱-串联质谱方法检测尿液中修饰核苷假尿嘧啶核苷(Pseu)、1-甲基腺苷(m1A)、2-甲基鸟苷(m2G)、6-甲基腺苷(m6A)和1-甲基鸟苷(m1G)的浓度,比较两组受试者尿液修饰核苷的表达水平。采用荧光定量聚合酶链反应技术检测血浆EBV-DNA的拷贝数,并制作受试者工作特征(ROC)曲线评价尿液核苷和血浆EBV-DNA单项检测及联合检测的诊断价值。结果鼻咽癌组尿液中的m2G、Pseu、m1A、m1G浓度均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。鼻咽癌组的血浆EBV-DNA拷贝数高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。m2G、m1A、Pseu、m1G与EBV-DNA 5项联合检测的曲线下面积(AUC)均高于m2G、m1A、Pseu、m1G与EBV-DNA单项检测,差异有统计学意义(P<0.05)。Pseu浓度与临床分期及淋巴结转移均呈正相关(r=0.474、0.406,P<0.01)。结论尿液Pseu、m2G、m1A和m1G有望成为诊断鼻咽癌的小分子标志物,上述4种尿液核苷与血浆EBV-DNA 5项联合检测可能有助于提高诊断鼻咽癌的诊断效能。

转运RNA中1-methyguanosine修饰核苷研究进展

tRNA中存在着大量转录后修饰,这些修饰的存在对tRNA的结构和功能有很大影响。截至目前为止,已经发现了至少108种tRNA转录后修饰,其中碱基或核糖的甲基化最为常见。有研究证明,鸟嘌呤第一位N原子甲基化形成1-methyguanosine(m^1G),m^1G修饰对提高tRNA的结构稳定性,诱导tRNA的正确折叠,以及降低翻译中的错误起关键作用。总结目前已知的m^1G修饰在tRNA中的合成位点及作用,比较合成不同位点m^1G修饰的酶的不同结构和生化特性,着重介绍不同的酶和底物tRNA的特异性结合介导m^1G形成背后的分子机制。为m^1G核苷修饰及其相关蛋白的功能研究提供一定的参考价值,希望对后续相关研究提供一定启发。

mRNA核苷碱基修饰开启疫苗新时代

2023年诺贝尔生理学或医学奖授予考里科和韦斯曼,以奖励他们“在核苷碱基修饰方面的发现,从而开启有效的新冠感染mRNA疫苗研发”方面所做出的杰出贡献。疫苗接种是大多数传染病和部分慢性病(如宫颈癌等)预防的首选方法,成败关键依赖于高效疫苗的研制和应用。1980年代前,灭活疫苗和减毒疫苗是主要的应用类型。

2023年诺贝尔生理学与医学奖解读--核苷碱基修饰与mRNA疫苗

2023年诺贝尔生理学或医学奖授予美国科学家卡塔琳•卡里科(Katalin KARIK)和德鲁•魏斯曼(Drew WEISSMAN),以表彰他们在核苷碱基修饰方面的发现,为研发有效的抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的mRNA疫苗做出了杰出贡献。掺入修饰碱基的mRNA可以逃避不良的免疫反应,而且含假尿苷的mRNA能更有效地进行翻译。以两位科学家的研究为基础,科研人员完善了mRNA疫苗的研发技术体系。展望了核苷碱基修饰、mRNA疫苗、脂质纳米颗粒技术、mRNA疫苗的应用前景。

尿液修饰核苷检测在膀胱尿路上皮癌预后监测中的应用价值

目的探索膀胱癌患者预后监测的新方法。方法选取病理证实为膀胱尿路上皮癌患者85例。临床分期Ti1～T1期55例，T2～T4期30例；组织学分级G127例，G240例，G318例。膀胱肿瘤电切术后随访1年，每3个月复查。术后第3个月均未复发。术后6个月复发20例，9个月复发18例，术后12个月复发19例，共57例设为复发组。28例术后1年内未复发者设为未复发组。复发组Ti1-T1期35例，T2～T4期22例，未复发组分别为20例，8例。健康对照组50例。应用高效液相色谱／电喷雾-四极杆-飞行时间质谱技术检测各组尿液修饰核苷1-甲基腺苷（M1A）和1-甲基次黄苷（1-MeI）的水平。统计学比较尿修饰核苷水平与膀胱癌生物学行为的关系。结果术后3个月未复发组尿液修饰核苷水平（M1A：3．24±0．40，1-MeI：5．73±0．67）明显低于术前（M1A：4．34±0．98，1-MeI：14．22±4．05，P〈0．005），其后维持在低水平状况。术后3个月复发组（M1A：3．31±0．33，1-Mel：5．67±0．55）低于术前（M1A：4．32±1．19，1-MeI：14．31±4．12，P〈0．005），其后呈上升趋势并接近术前水平。未复发组和复发组术前尿液修饰核苷水平均高于对照组（M1A：2．91±0．84，1．Mel：5．56±1．25，P〈0．01）。复发组术后6、9、12个月尿修饰核苷水平（M1A分别为4．04±0．48、4．11±0．47、4．09±0．53；1-Mel分别为11．46±1．34、12．14±1．22、12．33±1．27）均高于未复发组和对照组（P〈0．01）。病理分级间与临床分期间尿液修饰核苷水平差异无统计学意义（P〉0．叭）。复发组Ti1～T1期患者尿液修饰核苷水平（M1A：5．92±1．28，1-MeI：20．01±8．53）高于未复发组（M1A：4．02±1．22，1-MeI：11．21±6．45，P〈0．05），T2-T4中亦如此。结论尿液修饰核苷检测对于膀胱癌术后患者预后判断有一定的临床应用价值。

GC/MS法分析人尿中的修饰核苷

通过检测尿中的某些代谢物的含量来诊断癌症是人们多年来追求的目标,具有这样特性的代谢物被称为肿瘤标志物(tumour marker).人们已经发现,尿中修饰核苷(modifiednucleoside)含量的升高与某些恶性肿瘤相联系,并已证明修饰核苷含量的升高源于转移RNA,在肿瘤的作用下转移RNA的周转速度增高从而释放出修饰核苷.初步研究表明。

酵母tRNA^(Ala)中修饰核苷酸T_(54),Ψ_(55)的生物功能

酵母tRNA^(Ala)的3′半分子与一个11聚的DNA片段(5′GGAATCGAACC3′)杂交后用RNase H酶解,该酶能在ψ_(55)的3′侧定点剪切,这样就制备得片段C_(36)-ψ_(55)该片段经1～2个高碘酸氧化和β-消去得片段C_(36)-T_(54)和C_(36)-G_(53).机器合成了3个酵母tRNA^(Ala)的片段,分别j是片段C_(56)-A_(76),U_(55)-A_(76)(以U替代ψ_(55))和U_(54)-A_(76)(以UU替代T_(54)ψ_(55)).合成和制备的片段以适当的组合用T_4RNA连接酶连接,产物是酵母tRNA^(Ala)的3′半分子或其类似物.3种3′半分子或其类似物分别与天然5′半分子连接得重组天然酵母tRNA^(Ala)(tRNAr)和2个酵母tRNA^(Ala)的类似物:(1)tRNAa(以U替代ψ_(55)),(2)tRNAb(以UU替代T_(54)ψ_(55)).体外测定了它们的丙氨酸接受活力和参入活力,发现酵母tRNA^(Ala)的类似物tRNAa和tRNAb与天然重组酵母tRNA^(Ala)相比,它们的氨基酸接受活力分别降低了25%和55%,参入活力分别降低了35%和30%.说明酵母tRNA^(Ala)中的修饰核苷酸T_(54)和ψ_(55)对该tRNA的功能有重要的影响.

尿修饰核苷作为宫颈鳞癌分子标志物的可行性研究

目的 探讨尿修饰核苷作为宫颈鳞癌分子标志物的可行性。方法 利用超高效液相色谱-串联质谱(UPLCMS)技术检测55例宫颈鳞癌患者和60例健康人群15种尿修饰核苷含量,采用偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)、多因素回归分析及ROC曲线,探讨尿修饰核苷与宫颈鳞癌临床特征的关系。结果 15种修饰核苷线性方程在5 ng/ml~800 ng/ml(Pseu在1μg/ml~12μg/ml)浓度内相关系数良好,检出限均<1. 0 ng/ml(Pseu <10. 0 ng/ml),回收率为83. 92%~127. 99%,重复性的相对标准偏差(RSD)为5. 97%~9. 45%。其中3种尿修饰核苷(Pseu、N4C、NNdm G)在研究组中的水平显著高于对照组(P <0. 05),并与FIGO分期相关(P <0. 05),Pseu、NNdm G、N4C、联合检测ROC-AUC值分别为0. 873、0. 927、0. 947、0. 951,联合检测时敏感度为93. 3%,特异度为93. 2%。结论 尿修饰核苷可区分宫颈鳞癌与健康人群,并与FIGO分期密切相关,可能成为筛查宫颈鳞癌的分子标志物。