外源性碱性成纤维细胞生长因子对大鼠阴茎肌源性干细胞增殖的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子对大鼠阴茎肌源性干细胞体外增殖的影响。方法本试验自2020年12月至2021年6月在滕州市中心人民医院精准实验室完成。取健康雄性Wister大鼠5只,体质量(200±50)g,取其阴茎海绵体并采用酶消化法分离肌源性干细胞,应用密度梯度离心法和差速贴壁法进行纯化。取第2代肌源性干细胞分为两组进行培养,实验组:200μl生长培养基+肌源性干细胞,分别用终浓度为10μg/L、30μg/L、50μg/L、70μg/L、90μg/L外源性碱性成纤维细胞生长因子进行干预;对照组:加入200μl生长培养基+肌源性干细胞。分别于培养24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h加入四甲基偶氮唑蓝(MTT)溶液。应用免疫细胞化学法鉴定大鼠阴茎肌源性干细胞,MTT比色法检测细胞增殖情况。统计学方法采用独立样本t检验、Tukey检验。结果(1)肌源性干细胞多呈Sca-1阳性反应[表达量为(79.90±1.82)%],少数呈Desmin阳性反应[表达量为(68.60±0.72)%]。(2)两组肌源性干细胞均随培养时间的延长而明显增殖(均P<0.01),出现显著促增殖效应的培养时间均为96 h。(3)与对照组比较,实验组各浓度碱性成纤维细胞生长因子对肌源性干细胞均有明显的促增殖效应;当浓度从10~70μg/L递增时,促增殖作用也随之均显著增强(均P<0.01),至70μg/L时其促增殖作用接近顶峰。结论外源性碱性成纤维细胞生长因子可促进体外培养的大鼠阴茎肌源性干细胞增殖,且呈浓度-时间依赖性增加,96 h与70μg/L为最佳的体外培养时间和浓度。

碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子-1对牙周膜细胞增殖的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人牙周膜(PDL)细胞增殖的影响。方法通过体外细胞培养技术,用噻唑盐(MTT)法检测bFGF和IGF-1单独或联合应用时对人PDL细胞增殖的影响。结果bFGF和IGF-1单独应用时均可明显促进PDL细胞增殖,在实验的5d范围内,bFGF浓度在1～100ng/ml和IGF-1浓度在1～100ng/ml时呈浓度-时间依赖关系,bFGF最佳效应浓度为10ng/ml(比对照组增加了247.8%),IGF-1最佳效应浓度为100ng/ml(比对照组增加了236.5%),两者的最佳效应时间均为3d。以二者的最佳效应浓度联合应用时,作用更为显著,培养3d时比对照组增加了290.4%(P<0.001)。结论bFGF和IGF-1均能促进人PDL细胞的分化和增殖,二者联合应用有协同效应。

漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2增殖、生长周期和细胞凋亡的影响

目的观察漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞生长增殖和生长周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT比色法研究漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞生长抑制作用;通过流式细胞仪检测DNA含量,分析细胞周期的分布。结果 MTT实验结果表明较高浓度的漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞具有直接的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,200μmol.L-1的漆树黄酮作用于人肝癌细胞株HepG2细胞72 h后,对细胞生长的抑制率最高可达53.78%,同对照组相比(P<0.01);流式细胞术实验结果表明,不同浓度的漆树黄酮作用于人肝癌细胞株HepG2 12 h后,可使G1期肿瘤细胞增多,引起G1期阻滞,作用时间为24 h、48 h时,则可引起S期阻滞;同时,不同浓度的漆树黄酮在不同的时间点都可使HepG2细胞出现明显的凋亡峰。结论漆树黄酮具有直接抑制肿瘤细胞生长的作用,其机制可能与引起细胞周期阻滞和诱导凋亡有关。

重组胰岛素生长因子1对成骨细胞增殖和分化的影响:量效与时效作用

目的:观察不同浓度重组胰岛素生长因子对成骨细胞的增殖和分化功能的影响。方法:实验于2004-01/06在广东医学院动物中心完成。无菌取出生24h内的Wistar大鼠颅盖骨,进行成骨细胞的分离、培养、增殖,取第5代鼠成骨细胞,在含体积分数0.1的胎牛血清DMEM培养基中,以配制的5种不同浓度重组胰岛素生长因子犤0(对照组),1,10,20,50μg/L犦中继续培养1,3,5,7d,反映不同浓度重组胰岛素生长因子对成骨细胞增殖的影响,采用四甲基偶氮噻唑盐法在酶标仪上检测吸光度值表示;反映成骨分化作用采用酶标仪检测碱性磷酸酶活性;反映不同浓度重组胰岛素生长因子对成骨细胞脂质代谢的影响采用分光光度计检测丙二醛。结果:①对细胞增殖的量效作用:四甲基偶氮噻唑盐法吸光度值反映细胞增殖的活性,胰岛素生长因子对成骨细胞有明显的刺激作用,能使细胞的增殖率提高。不同浓度重组胰岛素生长因子对成骨细胞均有较强的促进作用,1～20μg/L范围随着浓度的增加,吸光度值随之增高,存在剂量-效应关系,20μg/L重组胰岛素生长因子的刺激作用最强,随浓度增至50μg/L,吸光度值有所下降,重组胰岛素生长因子的刺激作用不再增加。②对细胞增殖的时效作用:重组胰岛素生长因子对鼠成骨细胞的促增殖作用还存在时间-效应的关系,随着培养作用时间的延长,吸光度值增高,作用5d后,吸光度值达到最高峰,促增殖作用最为明显,到第7天后,吸光度值下降。③早期成骨活性:不同浓度的胰岛素生长因子,能促进反映成骨细胞的成骨活性、可作为早期分化指标的骨细胞碱性磷酸酶的表达,1～20μg/L范围随浓度的增加,碱性磷酸酶的表达亦增高,20μg/L组促碱性磷酸酶的活性作用最明显,增至50μg/L,碱性磷酸酶的表达有所下降。④对丙二醛表达的影响:1～20μg/L范围随浓度的增加,丙二醛的表达随之降低,20μg/L组的作用最明显,增至50μg/L,丙二醛的表达略有升高,提示胰岛素生长因子可降低成骨细胞的脂质过氧化物水平。结论:重组胰岛素生长因子可促进成骨细胞的增殖,提高增殖率,并具有量效、时效关系。同时能促进成骨细胞进一步的分化,可促进反映早期分化指标的骨细胞碱性磷酸酶的表达,提高成骨能力,有助于骨坏死修复过程。还具有影响成骨细胞脂质代谢,降低成骨细胞的脂质过氧化物水平的作用。

肝细胞癌肿瘤体积倍增时间:一项系统评价及Meta分析

【据《Hepatology》2020年5月报道】题:肝细胞癌肿瘤体积倍增时间:一项系统评价及Meta分析(作者Nathani P等)肿瘤生长模式对监测间隔、预测和治疗决策具有重要意义,但对肝细胞癌(HCC)的描述并不充分。该研究目的是描述HCC的倍增时间,并确定惰性和快速生长模式的相关性。

FK506对雪旺细胞体外增殖能力的影响

目的 研究普乐可夫(FK506)促进周围神经再生的作用和机制。方法 将纯化的兔雪旺细胞分3组:10μg/L FK506、100μg/L FK506和空白对照组,继续培养10 d,相差显微镜观察计数,绘制各自的增殖曲线。在24和72 h对各组细胞进行流式细胞分析。结果 FK506组雪旺细胞生长良好,而成纤维细胞可以发现细胞肿胀,胞质内出现空泡;活细胞计数对照组雪旺细胞的倍增时间为8d,10μg/L组和100μg/L组倍增时间6.2d。用FK506培养24、72 h后对雪旺细胞增殖的流式细胞分析处于S期的雪旺细胞较对照明显增高(P< 0.01)。结论 FK506有促进体外培养的雪旺细胞快速增殖和抑制成纤维细胞生长的作用。免疫抑制剂FK506的双重作用在神经再生治疗中具广阔的应用前景。

体外培养的人胚胎脑皮层神经干细胞的生长特性

目的 从胎龄 1 0～ 1 2周的人工流产胚胎脑皮层分离、培养神经干细胞后观察其生长特性。方法 分别分离、鉴定孕1 0～ 1 2周人工流产的人胚胎脑皮层及孕 1 6dWistar大鼠脑皮层来源的神经干细胞 ,并在体外培养增殖。通过普通及电子显微镜观察、生长情况测定等方面的比较来观察其生长特性。结果 不同来源的神经干细胞均保持着未分化状态 ,能够自我更新以及具有多向分化潜能。但来源于人胚胎脑皮层的神经干细胞生长速度明显较慢 ,且其生长需多种细胞因子的联合刺激。结论 人胚胎脑皮层神经干细胞体外培养存在生长速度慢 ,分裂相所占比例低 ,群体倍增时间长以及其生长需多种细胞因子的联合刺激等问题。

兔骨髓基质干细胞的分离生长及冻存技术研究

目的:建立兔骨髓基质干细胞(MSC)体外分离、培养、增殖、冻存的方法,以及探讨其生物学特性。方法:抽取兔髂骨及胫骨的骨髓液,采用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化出MSC,并增殖。观察MSC的生长特性,测定其贴壁率及第3、8、13、18代的生长曲线,并评价其生物学特性。MSC在12.5%DMSO条件下经液氮或-60℃冻存复苏,测其成活率。结果:MSC为贴壁生长,以均一的梭形的成纤维细胞样生长,贴壁及增殖能力强,所测各代的生长曲线呈相似的S型,倍增时间约为35h。MSC需液氮保存,短期也可-60℃冰箱保存。结论:获得的兔MSC生长旺盛、增殖能力强,其分离、培养、纯化、增殖、冻存方法是可行的,可较长时间稳定地培养增殖、冻存,传代的MSC可保持其原代的生物学特性。MSC将是组织工程理想的种子细胞。

细胞生长促进试验筛选新生牛血清

目的建立适合人二倍体细胞培养血清的筛选方法。方法通过测定细胞倍增时间和进行细胞生长促进试验对15批次的新生牛血清作了筛选,并将筛选出的11批次血清用于大规模细胞培养,观察细胞的生长维持情况。结果发现细胞倍增时间与相对生长率无明显相关性(P>0.05)。在大规模细胞培养中,相对生长率97%以上的血清更适合二倍体细胞生长。结论细胞生长促进试验比细胞倍增时间测定更能客观地反映血清促人二倍体细胞的生长能力。细胞生长促进试验可能是较佳的。

自发性高血压大鼠血管平滑肌及心肌内成纤维细胞生长特性的研究

目的探讨自发性高血压大鼠（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ，ＳＨＲ）主动脉平滑肌细胞（ａｏｒｔａｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌ，ＡＳＭＣ）与心肌内成纤维细胞（ｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＣＦＢ）在体外培养生长的特性。方法１６周龄自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和正常大鼠（ＷＫＹ）测血压后处死，取心脏与胸主动脉，组织块法分别培养ＣＦＢ与ＡＳＭＣ）。分别观察：（１）ＣＦＢ３Ｈ－ｐｒｏｌｉｎｅ掺入与倍增时间（ＤＴ），ＡＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ掺入与倍增时间（ＤＴ），比较ＳＨＲ，ＷＫＹ的平滑肌细胞和心肌内成纤维细胞的增殖能力。（２）ＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡ在无血清或２％小牛血清（ＦＣＳ）条件下对两种大鼠ＡＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ，ＣＦＢ３Ｈ－ｐｒｏｌｉｎｅ掺入率及细胞数的影响，用３Ｈ－ＴｄＲ，３Ｈ－ｐｒｏｌｉｎｅ分别反应ＡＳＭＣ和ＣＦＢ增殖能力。结果（１）ＳＨＲ的ＡＳＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ掺入率ＣＦＢ３Ｈ－ｐｒｏｌｉｎｅ掺入率显著高于ＷＫＹ，ＡＳＭＣ倍增时间明显短于ＷＫＹ（分别为４７３±０２５，３００±１４０，Ｐ＜００１），而ＣＦＢ两组大鼠间倍增时间无差别（２６１±１６，２６６±１９，?

三氧化二砷对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞株细胞增殖及细胞周期的影响

目的 了解三氧化二砷对雄激素非依赖性前列腺癌PC 3细胞株细胞增殖及细胞周期的影响。方法 以不同浓度的三氧化二砷作用于PC 3细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法、流式细胞仪、相差显微镜和透射电镜观察细胞增殖状况、细胞周期变化以及细胞形态学的变化。结果 各浓度的三氧化二砷均可抑制PC 3细胞的增殖 ,具有剂量和时间累积效应 (P <0 0 1 )。三氧化二砷可使PC 3细胞生长停滞于G1 期。G1 期细胞数目随三氧化二砷的作用浓度增高而增多。其中3μmol/L、6 μmol/L、1 0 μmol/L的三氧化二砷作用 4 8小时后 ,可见PC 3细胞凋亡 ,分别为 1 1 8%,1 2 7%,2 9 6 %。透射电镜检查 3μmol/L三氧化二砷作用 4 8小时后的PC 3细胞 ,可见明显的凋亡小体。结论 三氧化二砷可抑制PC 3细胞的增殖 ,并具有剂量和时间依赖性 ;抑制细胞增殖与细胞周期阻滞于G1 期有关 ;三氧化二砷并可诱导PC 3细胞凋亡。

外源性碱性成纤维细胞生长因子对创面愈合病理变化的影响

目的:探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在伤口愈合过程中可能的愈合机制以及对瘢痕形成的影响。方法:选用成年健康新西兰兔24只,建立兔耳创面愈合模型96个,随机分为bFGF治疗组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,观察平均愈合时间、瘢痕体积、组织学变化及超微结构。结果:①bFGF组与对照组愈合时间分别为(18．4±1．6)d、(21．3±1．4)d,两组之间有显著性差异(P＜0．05)。②bFGF组瘢痕体积明显小于对照组,两组间差异有统计学意义(P＜0．01)。③光镜观察,bFGF组在愈合期炎症反应、血管形成及成纤维细胞增殖更明显。在愈合后的瘢痕组织中,胶原纤维排列较规则。对照组炎症反应时间较长,胶原纤维较粗大,排列紊乱。④电镜下可见治疗组成纤维细胞胶原合成持续时间较短。肥大细胞与成纤维细胞紧密接触,调整愈合全过程。后期表皮与真皮间有部分基底膜重建;对照组成纤维细胞合成持续时间较长,未见有基底膜的重建。结论:在伤口愈合过程中,外源性bFGF通过对细胞的调控有效地发挥促愈合作用;同时,通过部分重建基底膜结构,改善瘢痕的形成。

^(60)Co-γ射线照射对宫颈癌Hela细胞加速增殖的作用及机制初步探讨

目的:探讨射线对Hela细胞再增殖的影响,为宫颈癌是否有必要实行非常规分割放疗提供一定的理论依据。方法:不同剂量单次放射作用后,以细胞计数法计算照射后不同时间点Hela细胞的Tpot的变化;流式细胞仪分析放射后Hela细胞周期变化,并根据细胞周期的结果计算出能够反映出细胞增殖速度的指标SPF和PI的值;RT-PCR方法检测同期与增殖有关的基因PCNA,Ki-67的表达。结果:实验中测得未照射组的Hela细胞其Tpot为23.28小时(0.97天)。照射组Hela细胞在照射后出现了Tpot的缩短,在0Gy～8Gy剂量范围内单次照射剂量越大,其照射后细胞的Tpot就越短,且缩短有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪技术测定计算SPF与PI早期都出现了升高,这也说明了加速增殖的出现。与增殖有关的基因PCNA、Ki-67在照射后24h内在宫颈癌Hela细胞中呈现高于对照组的表达。结论:Hela细胞在照射后出现加速增殖,24小时内就体现出了加速增殖的效果,可能是射线造成分子水平基因的改变。

脂氧合酶抑制剂抑制HepG2细胞增殖的研究

目的探讨脂氧合酶抑制刑对HepG2细胞增殖的影响及其相关机制。方法体外培养HepG2肝癌细胞，应用不同浓度脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)处理HepG2细胞，利用MTT比色法、生长曲线、细胞克隆形成试验观察NDGA对HepG2细胞增殖的影响。结果NDGA对HepG2细胞具有明显的生长抑制作用，不同浓度的NDGA(50、100、150、200μmol/L)处理HepG2细胞72h的抑制率分别为27．34％、41．76％、57．08％和69．17％，其IC50值为109．13μmol／L。细胞克隆形成率分别为21．63％。17．33％，12．53％，7．97％，明显低于对照组的31．70％。结论NDGA对HepG2细胞有较强的细胞毒作用且以剂量、时间依赖方式抑制细胞增殖。

MDCK细胞连续传代培养的生长特性研究

目的:确定引进的MDCK细胞冻存保种效果。方法:复苏从ATCC引进保种冻存的MDCK细胞(P55),连续传代至P66,分别在P57、P59、P62和P66测定细胞生长曲线,计算细胞最大增殖浓度和倍增时间进行比较。结果:保种的细胞复苏活力达95.3%,最大增殖浓度分别为107.6×104、105.5×104、97×104和102.4×104(个/ml),倍增时间分别为15.8、15、15.2和15.3(h),结论:引进的MDCK细胞保种冻存后复苏活力高,能稳定连续传代培养,可用于相关研究。

胃泌素及其受体拮抗剂对人结肠癌 细胞的增殖调控

目的:探讨胃泌素类似物五肽胃泌素（PG）及胃泌素受体桔抗剂丙谷胺（PGL）对体外培养的人结肠癌细胞株HT29生长的影响。方法:采用MTT比色分析法检测细胞增殖情况,用流式细胞术（FCM）分析细胞周期变化。结果:高浓度的PG(10-5～10-7M)能明显促进HT29细胞的增殖（p【 O.05）,作用呈剂量依赖关系,最大作用浓度为10-6M。

ROCK抑制剂Y-27632促进人角质形成细胞增殖与调控衰老

背景:促进角质形成细胞体外培养增殖能力对皮肤生物学和皮肤相关疾病发病机制的研究具有重要意义。目的:观察Rho激酶抑制剂Y-27632对角质形成细胞增殖与衰老的影响。方法:分离培养人角质形成细胞,通过形态鉴定观察Y-27632(10μmol/L)对角质形成细胞形态的影响;利用群体倍增速率估算Y-27632对角质形成细胞增殖的影响;分别在角质形成细胞第0,5代,通过β-半乳糖苷酶细胞染色方法检测Y-27632对细胞衰老的作用;进一步通过MTT法和BrdU细胞增殖检测试剂盒检测细胞增殖情况。结果与结论:人角质形成细胞为大小均一的铺路石样细胞,且在早期具有较强的增殖能力,随着细胞传代,增殖能力降低,且形态变为扁平的,胞浆增大的特点;Y-27632显著提高了细胞的群体倍增速率,通过β-半乳糖苷酶细胞染色显示,Y-27632降低了阳性细胞数,进一步通过MTT法和BrdU细胞增殖检测法得出,Y-27632促进细胞体外增殖。结果说明,人角质形成细胞体外过程中,Y-27632的加入不仅能够抑制细胞衰老,同时促进其增殖,为角质形成细胞体外扩增培养与研究提供了新思路。

不同生长时期牛血清对细胞培养效果的影响

[目的]为了检测不同生长时期的牛血清的细胞培养效果,从而在今后的实验中更加合理地选择牛血清进行细胞培养。[方法]实验采用两组采自不同年龄段的牛血清对Sp2/0—Ag14细胞进行培养,并对细胞生长的细胞数量、细胞形态等定期进行测定及观察并绘制出细胞生长曲线,计算出细胞倍增时间,以比较两组牛血清细胞培养的效果。实验分为两组:一组为3月龄采血的牛血清(A组),另一组为14日龄采血的牛血清(B组)。[结论]结果表明,应用两组牛血清培养的Sp2/0—Ag14细胞的培养倍增时间分别为A组牛血清17.8h和B组牛血清17.1h;表明B组牛血清的细胞培养效果优于A组牛血清。

脐带和胚胎肝来源间充质干细胞生长特性的比较

背景:不同来源的干细胞具有不同的分子特征及生长特性,对疾病治疗的机制及效果可能会有所差异。目的:比较两种来源间充质干细胞的生物学特性。方法:分离培养人脐带源、胚胎肝来源的间充质干细胞,传至第5代时分别进行细胞形态观察,细胞群体倍增时间计算,细胞表面标志鉴定,诱导分化能力检测。另外将脐带源间充质干细胞继续培养至第10,15代,绘制生长曲线并计算细胞群体倍增时间。结果与结论:两种来源的间充质干细胞在对数生长期均为梭形,旋涡状生长,均具有成骨、成脂、成软骨分化的能力。两种间充质干细胞的生长曲线均为S形。第5代胎肝来源间充质干细胞的倍增时间为(34.37±0.31)h,脐带源间充质干细胞的倍增时间为(35.63±0.38)h,差异无显著性意义(P>0.05)。第10代和第15代脐带源间充质干细胞的倍增时间分别为(52.6±0.53)h和(53.27±0.92)h,与第5代比较差异有显著性意义(P<0.05)。结果可见两种来源间充质干细胞生物学特性基本相同,肉眼观察胎肝来源间充质干细胞比脐带源间充质干细胞形态稍小,增殖较快,但统计学上差异无显著性意义。

碱性成纤维细胞生长因子复合降解膜置入脊髓缺损局部对脊髓神经再生的作用

目的:探索碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)复合降解膜置入脊髓缺损局部抑制结缔组织增生,促进胶质细胞增殖和轴突再生,提高脊髓神经纤维的再生效果。方法:切除狗L1-2,L3-4脊髓节段,采用缝匠肌尾侧部桥接脊髓缺损局部包裹bFGF复合阵解膜,术后不同时间采用行为学和形态学方法进行测试和观察。结果:膜内外结缔组织增生有明显差异。肌桥段内有再生的神经纤维,双下肢运动功能有所恢复,TarlovMotorscotol分级为2-4级。结论:bFGF复合降解膜抑制脊髓损伤局部结缔组织增生,提高神经纤维的再生效果。