人脐静脉内皮细胞的体外改良分离、培养及鉴定

目的建立一种改良的血管内皮细胞培养方案,为体外培养血管内皮细胞提供稳定而有效的实验方法。方法在无菌条件下,应用输液延长管置入脐带并注入2/3容积的0.1%Ⅱ型胶原酶消化、分离人脐静脉内皮细胞。用倒置相差显微镜观察细胞生长,免疫细胞化学法鉴定培养细胞。结果原代培养的细胞30 min开始贴壁生长,24￣48 h生长最快,3￣5 d呈铺路石样排列。免疫细胞化学可见培养细胞胞浆中人Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应,证实培养的细胞为血管内皮细胞,且纯度达97.5%。结论用本实验中的方法消化、分离血管内皮细胞可获得高纯度的内皮细胞,细胞数量多、污染少且成活率高。

缝隙连接蛋白在钙离子介导的乳腺癌细胞转移和侵袭中的作用

目的探讨缝隙接蛋白(Cx)在钙离子介导的乳腺癌细胞转移和侵袭中的作用。方法选用不影响细胞生长的缝隙连接蛋白阻断剂,辛醇100μmol/L处理高转移MDA-MB-231细胞和低转移MCF-7细胞。倒置相差显微镜下观察细胞形态,激光扫描共焦显微镜下观察Cx43的位置、微丝纤维的排列和细胞内钙离子浓度变化,划痕和侵袭实验观察细胞的转移情况。结果辛醇处理细胞后,细胞的生长状态由大面积片状生长转变为单个或少数几个团状的独立生长;Cx43蛋白的形成和表达位置虽无改变,但相邻细胞间微丝纤维排列的平行同向性显著性降低;MDA-MB-231细胞穿过基底膜成胶和Transwell小室基底面的细胞数显著低于对照组;此外,细胞内钙离子浓度强度显著性降低,钙离子螯合剂(EGTA)处理显著性加剧辛醇对细胞转移和侵袭能力的抑制。但是,上述现象在低转移MCF-7细胞中效果不明显。结论缝隙连接蛋白阻断剂在干扰乳腺癌细胞Cx功能活性,而不影响Cx形成的情况下,能够显著性抑制高转移乳腺癌的恶性进展和侵袭转移,此机制与细胞内钙离子浓度降低有关。

CMTD晶体(001)面的表面形貌观测及其结晶形态研究

用倒置相差显微镜观察了CdHg(SCN)4(H6C2OS)2(CMTD)晶体结晶过程的形态变化。同时用原子力显微镜(AFM)对CMTD的(001)面进行形貌观察,测得的初级台阶高度为1.411nm,是晶胞参数c的一半,发现了螺旋生长丘及缺陷,并对生长丘的中心孔芯作了初步分析,讨论了CMTD晶体所特有的“树杈状”和“一字形”缺陷及形成机理。

人脐静脉内皮细胞原代培养方法的改进

目的改进人脐静脉内皮细胞(HUVECs)原代培养方法,以获得足够数量的高纯度可传代内皮细胞。方法胶原酶消化法分离培养内皮细胞,并加以改进。2.5×104 IU/L重组牛碱性成纤维细胞生长因子(rb-bFGF)加入完全培养液中。用形态学、免疫细胞化学染色法进行内皮细胞鉴定。观察含rb-bFGF的培养液对内皮细胞生长和形态结构的影响。观察原代细胞长满瓶底60%、70%和80%时传代后第1代细胞的生长情况。结果 HUVECs融合时呈单层铺路石样外观,95%以上细胞Ⅷ因子检测呈阳性。含2.5×104 IU/L rb-bFGF的完全培养液可将HUVECs传7代以上。第7代细胞长满瓶底80%所需时间延长,并出现异常细胞形态。原代细胞长满瓶底60%、70%和80%后传代,第1代细胞长满瓶底80%所需时间均为3d左右。结论 rb-bFGF可取代内皮细胞生长添加剂、内皮细胞生长因子等添加于培养液中,获得足够数量高纯度可传代的内皮细胞;原代细胞的传代时间可适当提前至长满瓶底60%～70%时。