幽门螺杆菌5种候选疫苗抗原基因的克隆、表达及抗原性的鉴定

目的:构建含人Hpylori5种候选疫苗抗原Lpp20,HspA,UreaseA,CagA,UreaseB的编码基因的重组质粒并研究其抗原性.方法:应用PCR技术从Hpylori染色体中扩增编码Lpp20,HspA,UreaseA,CagA,UreaseB的基因片段,将其T-A克隆和测序,并与GenBank公布的其他Hpylori菌株基因序列比较,再将目的基因克隆至融合表达载体pGEX-4T-1上中进行表达,用GST亲和层析对其进行纯化,纯化产物用于对29株小鼠抗Hpylori-全菌单克隆抗体(mAb)的鉴定及与Hpylori感染患者血清进行Westernblot分析.结果:扩增的Lpp20,HspA,UreaseA,CagA,UreaseB基因全长分别为528bp,351bp,675bp,855bp,1704bp(GenBank登录号分别为DQ106902,DQ141574,DQ141577,DQ141575,DQ141576),与GenBank公布的其他菌株的核酸序列的同源性在95%-99%,表达Lpp20,HspA,UreaseA,CagA,UreaseB融合蛋白的相对分子质量分别约为48000,41000,52000,60000,91000Da,29株小鼠抗Hpylori全菌mAb中针对Lpp20,HspA,UreaseA,CagA,UreaseB抗原的分别为4,5,5,1,6株,5种抗原的纯化产物均可被Hpylori感染患者血清特异性识别.结论:重组表达的Lpp20,HspA,UreaseA,CagA,UreaseB均具有较好的抗原性.

我国云南分离株间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原pvs25基因多态性分析

目的阐明我国疟疾流行区间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原pvs25基因多态性特点。方法收集全年流行区云南省血样31份;提取疟原虫基因组DNA;聚合酶链反应(PCR)扩增pvs25基因;Sanger双脱氧链终止法测序;DnaSPversion4.0软件统计学分析。结果成功扩增pvs25全长基因31个序列。与标准株SalI比较,检测出4个错义突变位点,5种基因型,4处氨基酸置换。C103G289C389C391为主导基因型,L35E97T130Q131是相应主导氨基酸型,其突变与季节流行区的主导基因型和氨基酸型完全一致。核苷酸多态性π值为0.0014。组间多态性π值比较表明全年流行区明显高于季节流行区。结论我国分离株间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs25只有1种主导基因型和1种主导氨基酸型。有限的基因突变再次提示Pvs25是理想的候选抗原,以Pvs25为基础构建的传播阻断疫苗在我国具有广泛应用的可行性。

间日疟原虫云南分离株传播阻断疫苗候选抗原Pvs28基因多态性分析

目的分析我国疟疾混合流行区云南分离株间日疟原虫(P.v)传播阻断疫苗候选抗原Pvs28基因特点。方法收集云南省血样17份;提取疟原虫基因组DNA;PCR扩增Pvs28基因;基因测序;DnaSPversion4.0软件进行基因多态性分析。结果成功扩增Pvs28全长基因17个序列。与标准株Sal-I比较,检测出7个错义突变,7个基因型和7种氨基酸型。云南P.v分离株核苷酸多态性π值为0.0044。若不考虑重复片段拷贝数的差异,云南P.v分离株和湖北P.v分离株Pvs28蛋白主导氨基酸型完全一致,即V14-L52-L98-E105-L116-S140-I223。与泰国P.v分离株比较,我国主导基因型突变位点完全包含在泰国P.v分离株突变位点中。结论以Sal-IPvs28为基础建立的传播阻断疫苗能够克服云南P.v分离株Pvs28抗原多样性而发挥传播阻断作用,提示间日疟原虫传播阻断疫苗在我国具有良好的应用前景。

我国间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs48基因特点分析

目的明确我国疟疾流行区间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs48基因特点。方法收集疟疾单纯流行区浙江、湖北两省间日疟患者血样,制备血样干滤纸片;提取疟原虫基因组DNA;聚合酶链反应(PCR)扩增Pvs48基因;Sanger双脱氧链终止法测序并分析。结果成功扩增12例间日疟原虫分离株Pvs48全长基因。与间日疟原虫标准株SalⅠ比较,检测出6个错义突变位点,导致6处氨基酸置换和6种基因型。结论我国间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs48具有保守性。

间日疟疫苗主要候选抗原的研究进展

疟疾是当今世界人类最严重的三大传染性疾病之一。根据疟原虫复杂的生活史和不同发育时期表达特异性抗原分子的特点 ,确定有效特异性候选抗原成为疟疾疫苗研制开发的关键。多年来 ,研究者致力于子孢子疫苗、红内期疫苗和传播阻断疫苗的研究。在我国间日疟分布最广 ,普遍流行。目前 ,对间日疟疫苗候选抗原的研究取得了卓有成效的进展。疫苗已在小鼠、家兔和猴等开展试验 ,有些已进入人体临床实验阶段。该文选择间日疟 3个疫苗阶段有代表性的候选抗原 ,就分子结构 ,免疫原性和免疫效果作一综述。

间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs48基因特点

目的阐明间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原编码基因Pvs48的特点。方法采集我国疟疾高发混合流行区云南省间日疟患者指尖血样本,制备血样干滤纸片提取疟原虫基因组DNA;聚合酶链反应(PCR)扩增Pvs48;双脱氧链终止法测序,并对测序结果进行序列多态性分析。结果共成功扩增16例间日疟原虫分离株Pvs48基因。与间日疟原虫标准株Sal-I比较,检测出6处错义突变位点,导致6处氨基酸置换和3种基因型、3种氨基酸型。结论我国间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs48编码基因相对保守,不同地理株间差异无统计学意义。有限的基因突变再次提示以Pvs48为基础构建的传播阻断疫苗在我国具有广泛应用的可行性。

日本血吸虫(中国大陆株)基因工程疫苗的研究

本文报道应用PCR技术或RT－PCR技术从日本血吸虫成虫cDNA文库或成虫mRNA中扩增到Sj28GST、C－Sjparamyosin、H-Sj23、Sj14、Sj22．6和Sj．TPI6个编码日本血吸虫中国大陆株抗原的基因，并把它们克隆入适合载体中，在大肠杆菌系统和蚕核型多角体病毒（BmNPV）系统中进行表达．免疫学检测证明这6种基因重组抗原都具有较好的抗原性。我们进一步应用4种比较成熟的基因重组抗原Sj26GST、Sj28GST、C－Sj．paramyosin和H－Sj23进行3批绵羊试验和1批黄、水牛田间试验，评估这几种重组抗原在绵羊和黄、水牛中的免疫保护效果，rSj26GST和rSj28GST分别获得62．1％和50.4％－68.5％的显著保护；n－paramyosin获得42.9％－55．3％、r－C－paramyosin获得44．2％－47．1％的显著保护，r－H－Sj23为51．2％－66．1％的显著保护．各组免疫后的粪便虫卵数和组织虫卵数也有不同程度的减少．用r－C－Sjparamyosin、r－Sj28GST和r－H－Sj23免疫典、水牛在血吸虫重疫区田间试验的结果表明，减虫率水牛高于黄牛，显示上述试验的3种日本血吸虫重组分子抗原有希望成为家畜日本血吸虫病的候选疫苗抗原．

重组疟疾疫苗研制成功

第二军医大学研制开发的重组疟疾疫苗已获得国家药品监督局及世界卫生组织的批准，进入临床试验，这是我国第一个自主研制、进入临床试验的疟疾疫苗。该疫苗抗原是由两个当今领先的疟疾疫苗候选抗原的功能区融合而成，即从疟原虫本身的两种蛋白中找出各自有用的基因信息.

三种幽门螺杆菌疫苗候选抗原的蛋白制备与复性研究

幽门螺杆菌（H．pylori，Hp）与胃十二指肠疾病关系密切，人群中感染率达50％以上，疫苗是在大规模人群中预防感染性疾病最为经典和有效的方法。热休克蛋白（HspA）、尿素酶B（UreB）和空泡毒素（VacA）都是Hp疫苗的主要候选抗原，含上述3种蛋白的多组分疫苗免疫效果可能更强。

日本血吸虫疫苗候选抗原研究进展

日本血吸虫病（Schistosoma japonicum）是严重危害人类健康的人畜共患寄生虫病，目前主要流行于中国、菲律宾与印尼，中间宿主为钉螺（Oncomelania）。据估算，目前有1亿多人口和几千万头家畜受威胁，感染者近100万，感染牛20万头，其中中国血吸虫病疫情数度出现反复，局部地区疫情回升明显，是一个重要的公共卫生问题。

捻转血矛线虫ZJ株疫苗候选抗原H11亚型基因H11-4的克隆及序列分析

微粒体氨肽酶H11天然提取物是目前捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)防治研究中最好的疫苗候选抗原之一,但其重组形式均不能提供有效的免疫保护效果;同时报道H11蛋白存在多种亚型,推测其某种亚型或亚型组合可能在天然提取物参与免疫保护中起了关键作用。本试验参考NCBI公布的H.contortus H11-4基因序列,设计2对特异性引物,以H.contortus ZJ株总RNA为模板,利用RT-PCR技术分段扩增出该基因的部分片段,并进行T-A克隆。测序正确后,利用含有不同片段的阳性质粒经BamHⅠ/NcoⅠ消化,连接后获得H11-4基因的全长cDNA序列。测序结果显示成功获得H11-4基因,开放阅读框大小为2 916bp,与NCBI中公布的核苷酸序列同源性为97.8%,氨基酸序列同源性为97.6%。生物信息学分析,已获得的H11-4与H11(H11-3)亚型氨基酸序列高度同源,且具有保守糖基化位点、相对保守的跨膜区与微粒体氨肽酶活性中心锌指基序。为进一步分析H11天然提取物各亚型在参与免疫保护的机制和角色分工奠定了基础。

长角血蜱的免疫研究进展

以长角血蜱疫苗候选抗原为例,从长角血蜱蛋白水解酶、蜱生殖和发育相关分子及RNA干扰技术、IgG结合蛋白技术几方面概述了近年来国内外有关蜱疫苗的研究现状,并展望了蜱疫苗的发展趋势。

布鲁氏菌免疫相关抗原研究进展

布鲁氏菌病是世界范围内存在的一种人畜共患传染病,目前许多学者对此展开研究并总结一些瓶颈问题:其一,在动物检疫方面,无法确定被检动物是疫苗接种还是自然感染,这对畜牧业经济造成了很大影响;其二,在疫苗接种方面,人类预防布鲁氏菌感染没有理想的疫苗,使得感染率增加,再加之短时间内临床症状不典型,使得病情极易被延误。针对这两个问题本研究主要介绍了一些布鲁氏菌病诊断相关抗原、疫苗候选抗原和一些热点关注抗原。

幽门螺杆菌ureB在乳酸菌中的表达和抗原活性鉴定

在幽门螺杆菌疫苗研究中，尿素酶（Ure）是研究最多、最理想的疫苗候选抗原。目前研究常以减毒沙门菌作为活菌载体，但活的减毒沙门菌在人体及动物体内仍有一定的毒性，而不能用于体质弱的群体如婴幼儿、年老者及免疫缺陷者。以乳酸乳球菌（Lactococcus lactis，L．lactis）作为活菌疫苗载体，可以避免上述问题。

免疫蛋白质组学技术筛选布鲁菌高免疫原性膜蛋白

目的建立布鲁菌免疫蛋白质组学方法,从羊布鲁菌膜蛋白中筛选免疫候选抗原。方法提取羊布鲁菌16M膜蛋白,进行双向电泳(2-DE)分离,分别用牛、羊布鲁菌感染的阳性血清进行Westernblot分析,筛选出的免疫显性蛋白点进行LC-MS/MS质谱鉴定,并进行生物信息学分析。结果筛选出56个免疫显性蛋白点,鉴定成功35个,其中有12个蛋白是能够被牛、羊2种血清共同识别的抗原。数据检索显示,这些蛋白主要涉及布鲁菌的能量代谢,蛋白质、氨基酸合成,脂肪酸代谢及糖和辅酶的合成等生物过程。结论利用免疫蛋白质组学技术成功筛选出羊布鲁菌高免疫原性膜蛋白,为布鲁菌亚单位疫苗的研制提供了大量的候选抗原。

恶性疟原虫肝素结合蛋白质PF3D71104400的原核表达与多克隆抗体的制备

为研究肝素结合蛋白质PF3D7_1104400的功能以及其作为疟疾疫苗候选抗原的可行性,通过PCR方法扩增目的基因,并将其与p ET-28a和p GEX-4T-1表达载体连接构建重组表达质粒。将构建成功的重组表达质粒转化入大肠杆菌BL21-Condon Plus(DE3)-RIPL中诱导表达,利用亲和层析的方法纯化His-tag和GSTtag重组蛋白质。用His-tag重组蛋白质免疫家兔制备多克隆抗体,以该抗体为一抗,利用Western blot检测该抗体的特异性以及PF3D7_1104400蛋白质在虫体内是否表达。结果表明:成功构建重组表达质粒PF3D7_1104400-p ET和PF3D7_1104400-p GEX,诱导表达并纯化出特异性好、纯度高的重组蛋白。制备的多克隆抗体能够特异性识别虫体天然蛋白,PF3D7_1104400蛋白质在恶性疟原虫体内全长表达。