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固定化假丝酵母99-125脂肪酶催化酯化脂肪酸低碳醇酯反应条件的研究 被引量:15
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作者 邓利 刘柳 +1 位作者 董贤 谭天伟 《现代化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第9期30-33,37,共5页
以硅藻土和纺织品为载体 ,采用吸附法制备固定化脂肪酶 ,研究了固定化假丝酵母 99 1 2 5脂肪酶在有机溶剂中催化脂肪酸低碳醇酯酯化合成过程中 ,有机溶剂性质、脂肪酸与低碳醇的结构、pH值、反应温度和体系含水量、低碳醇的抑制作用等... 以硅藻土和纺织品为载体 ,采用吸附法制备固定化脂肪酶 ,研究了固定化假丝酵母 99 1 2 5脂肪酶在有机溶剂中催化脂肪酸低碳醇酯酯化合成过程中 ,有机溶剂性质、脂肪酸与低碳醇的结构、pH值、反应温度和体系含水量、低碳醇的抑制作用等因素对酯化过程的影响。试验结果表明 :底物低碳醇需要采用流加方式加入体系 ,石油醚是最适宜的有机溶剂 ,脂肪酸与醇的碳链越长 ,越易于酯化 ;固定化脂肪酶对直链醇的选择性优于支链醇。以石油醚为有机溶剂 ,在反应温度为 40℃、pH值为 7时 ,硬脂酸与甲醇的酯化率达 95 % ;反应后期应除去体系中的水以避免酶失活。固定化酶间歇催化油酸与甲醇的酯化时 ,重复使用 1 5次 (每次 2 4h) ,其操作半衰期约为 360h。 展开更多
关键词 固定化 假丝酵母99-125脂肪酶 催化 酯化 脂肪酸低碳醇酯 应条件 研究
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大孔型纤维素硫酸钠-聚二甲基二烯丙基氯化铵微胶囊固定假丝酵母产脂肪酶 被引量:2
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作者 季艳艳 姚善泾 +2 位作者 张俊 关怡新 林东强 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第11期2162-2165,共4页
In order to produce macromolecules by using the immobilized cells in microcapsules, a novel macro-porous NaCS-PDMDAAC capsules system was used to immobilize Candida valida in a semi-continuous culture mode for produci... In order to produce macromolecules by using the immobilized cells in microcapsules, a novel macro-porous NaCS-PDMDAAC capsules system was used to immobilize Candida valida in a semi-continuous culture mode for producing lipase. It was found that the encapsulation system had no negative effect on the growth and lipase productivity, and the lipase produced inside capsules could diffuse freely to the media outside capsules. The cultivation with the capsules was carried out for 15 batches and the lipase in each batch had almost the same activity. In comparison with free cell cultivation, the immobilized cell fermentation shortened obviously the period of glucose consumption from 24 hours to 8 hours and increased lipase productivity. 展开更多
关键词 脂肪酶 细胞固定化 大孔型微胶囊 纤维素硫酸钠-聚二甲基二烯丙基氯化铵微胶囊 酵母
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南极假丝酵母脂肪酶B催化3-(4-氟苯基)戊二酸酐不对称醇解
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作者 贾义刚 杨震炯 +3 位作者 刘维明 张洋 黄和 胡燚 《生物加工过程》 CAS 2015年第4期58-62,共5页
采用分子模拟技术,研究了南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)催化3-(4-氟苯基)戊二酸酐(3-FGA)不对称醇解的分子机制。首先借助力场修改的Autodock 4.2软件将过渡态底物与CALB进行对接,根据对接自由能差异解析了CAL... 采用分子模拟技术,研究了南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)催化3-(4-氟苯基)戊二酸酐(3-FGA)不对称醇解的分子机制。首先借助力场修改的Autodock 4.2软件将过渡态底物与CALB进行对接,根据对接自由能差异解析了CALB催化3-FGA与不同醇反应的立体选择性差异,得到的S型底物结合能小于R型底物;其次,基于扭转角机制分析发现,S型底物扭转角小于R型底物,从分子水平上揭示了CALB对S型底物选择性优于R型底物的机制。 展开更多
关键词 南极酵母 脂肪酶 3-(4-氟苯基)戊二酸酐 分子对接 分子动力学 对映选择性
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(±)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯的脂肪酶酶促水解拆分方法 被引量:5
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作者 黄丽琴 杨红 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期135-139,共5页
酶法拆分(±)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯,其反应体系为:在含1 mmol(±)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯的100 mL 0.2 mol.L-1磷酸缓冲液(PBS)中,添加2 g聚乙二醇(PEG-6000),并用皱落假丝酵母脂肪酶(Candida rugo... 酶法拆分(±)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯,其反应体系为:在含1 mmol(±)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯的100 mL 0.2 mol.L-1磷酸缓冲液(PBS)中,添加2 g聚乙二醇(PEG-6000),并用皱落假丝酵母脂肪酶(Candida rugosalipases,CRL)拆分,反应后分离得到R-(+)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯。进一步采用高效液相色谱检测酶促反应的转化率,采用250 mm×4.6 mm,5μHypersil(ODS色谱柱,以甲醇与水混合液(体积比为80∶20)为流动相,230 nm为检测波长,外标法峰面积定量。(±)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸和其甲酯的回收率在91.5%-96.1%之间。 展开更多
关键词 (±)-N-(2 6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯 皱落酵母脂肪酶 拆分 转化率 HPLC
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Candida rugosa脂肪酶催化(R,S)-2-辛醇酯交换反应的对映选择性 被引量:1
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作者 石贤爱 娄文勇 +2 位作者 宗敏华 郭养浩 孟春 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第12期30-34,共5页
考察了皱落假丝酵母脂肪酶(CRL)在有机溶剂、反胶束和离子液体中催化(R,S)-2-辛醇不对称酯交换反应的对映选择性,发现反应介质和酰基供体对CRL的对映选择性有显著的影响。在甲苯中,CRL催化氯乙酸乙酯与(R,S)-2-辛醇酯交换反应的对映体... 考察了皱落假丝酵母脂肪酶(CRL)在有机溶剂、反胶束和离子液体中催化(R,S)-2-辛醇不对称酯交换反应的对映选择性,发现反应介质和酰基供体对CRL的对映选择性有显著的影响。在甲苯中,CRL催化氯乙酸乙酯与(R,S)-2-辛醇酯交换反应的对映体选择率E颇高(E=92.2);在CTAB/丁醇/异辛烷/水反胶束体系中,以乙酸乙烯酯为酰基供体时,CRL的对映选择率很高(E》100);在离子液体1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐中,CRL的对映选择率很低。 展开更多
关键词 皱落酵母脂肪酶 2-辛醇 酯交换反应 对映选择性 反应介质
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交联酶聚集体与仿生硅化技术结合制备固定化脂肪酶 被引量:5
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作者 姜艳军 王旗 +2 位作者 王温琴 周丽亚 高静 《催化学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2012年第5期857-862,共6页
将交联酶聚集体(CLEAs)与仿生硅化技术相结合,制备了交联脂肪酶Candidasp.99-125杂化生物催化剂.以京尼平为交联剂,在最佳条件下制得的脂肪酶CLEAs的酶活达771U/g,回收率达75%;保护剂聚乙烯亚胺(PEI)与Candidasp.99-125脂肪酶共沉淀制备... 将交联酶聚集体(CLEAs)与仿生硅化技术相结合,制备了交联脂肪酶Candidasp.99-125杂化生物催化剂.以京尼平为交联剂,在最佳条件下制得的脂肪酶CLEAs的酶活达771U/g,回收率达75%;保护剂聚乙烯亚胺(PEI)与Candidasp.99-125脂肪酶共沉淀制备P/CLEAs,其酶活达897U/g,回收率约88%;利用PEI的诱导作用,在P/CLEAs表面形成氧化硅涂层,制得的脂肪酶CLEAs(Coated-CLEAs)显示出良好的稳定性,特别是其抗蛋白酶水解能力、有机溶剂耐受能力、重复使用性能等方面明显提高. 展开更多
关键词 交联酶聚集体 仿生硅化 酵母脂肪酶Candida sp. 99-125 京尼平 固定化酶
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酵母脂肪酶分子进化及催化合成(S)-1,4-苯并二烷
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作者 张琦 唐璐瑶 +4 位作者 何远志 张凯 祝加伟 崔莉 冯雁 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期35-44,共10页
目的:1,4-苯并二烷是普罗克生、多沙唑嗪等抗高血压和MCK-242等抗抑郁药物的手性中间体,在医药领域具有广泛应用。目前化学合成具有产量高的优势,然而存在环境污染和生产安全性低等问题。应用脂肪酶进行催化合成提供了1,4-苯并二烷... 目的:1,4-苯并二烷是普罗克生、多沙唑嗪等抗高血压和MCK-242等抗抑郁药物的手性中间体,在医药领域具有广泛应用。目前化学合成具有产量高的优势,然而存在环境污染和生产安全性低等问题。应用脂肪酶进行催化合成提供了1,4-苯并二烷的绿色合成新途径。研究发现天然酶存在对映体选择性低的局限,因此针对南极假丝酵母脂肪酶B进行分子进化,并建立了1,4-苯并二烷催化合成的技术路线。方法:首先,针对南极假丝酵母脂肪酶B活性中心参与底物结合和转化的关键氨基酸残基进行分析,并构建了相互作用位点协同进化的饱和突变库,通过HPLC检测,筛选获得了系列转化效率高和对映选择性强的突变体,最后对影响最佳突变体D223N/A225K催化效率的反应条件进行系统优化。结果:来自D223和A225位点突变体(D223N/A225K和D223G/A225W等)偏向于合成(S)-型产物;而E188和I189位点突变体(E188D/I189M等)表现出偏向于合成(R)-型产物。与野生型相比,最佳突变体D223N/A225K合成(S)-1,4-苯并二烷的ee值从11.9%提升到29.3%。对反应条件系统优化后,突变体D223N/A225K在37℃、正丁醇/磷酸盐缓冲液(20∶80,V/V)两相溶剂中反应50 min后对底物(R,S)-1,4-苯并二烷-2-甲酸甲酯的转化率为(47.5±2.33)%,ee值达(93.9±0.16)%。结论:通过分子改造与条件优化,成功实现对(R,S)-1,4-苯并二烷-2-甲酸甲酯的高效动力学拆分,为蛋白质工程技术创制新酶提供了新例证,也为酶法高效催化合成(S)-1,4-苯并二烷类分子提供了理论和技术基础。 展开更多
关键词 南极酵母脂肪酶B 蛋白质工程 1 4-苯并二烷 手性拆分
原文传递
动态动力学拆分高效制备(R)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸
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作者 汤灵娇 詹晓 +2 位作者 杨立荣 钱明心 吴坚平 《化学反应工程与工艺》 CAS 北大核心 2019年第1期55-63,共9页
利用固定化的南极假丝酵母脂肪酶B(CAL-B)实现外消旋底物1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸酯[(±)-1]的动态动力学拆分高效制备(R)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸[(R)-1-TIC]。考察了不同来源CAL-B制剂的催化效果,以及关键反应条件对底物稳... 利用固定化的南极假丝酵母脂肪酶B(CAL-B)实现外消旋底物1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸酯[(±)-1]的动态动力学拆分高效制备(R)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸[(R)-1-TIC]。考察了不同来源CAL-B制剂的催化效果,以及关键反应条件对底物稳定性和酶催化速率的双重影响。结果表明:商品化脂肪酶制剂QLlip-9提供了最佳的催化效果;反应温度提高至30℃、醋酸铵缓冲液的初始pH值提高至8.0时,虽然底物稳定性略微下降,但完全转化所需时间大幅缩短,整体催化效率明显提高;pH值恒定控制策略则加快了反应后期无效底物的消旋化速率,从而进一步提高催化效率。当(±)-1浓度为20 g/L时,QLlip-9浓度降至10 g/L基本不影响催化效果,最佳酶/底物比率(酶与底物的质量比)达到1:2。在上述优化条件下,反应时间缩短至6h,转化率不低于99%,产物的对映体过量值(enantiomeric excess of product, e.e.p)为96%,生产速率达到0.24 g/(h·g酶),为目前文献报道最高水平的8倍。在此基础上,实现了8批次的重复利用,并在300 mL,1 000 mL和20 L体系中实现了逐级规模放大,最终通过浓缩结晶法提取获得e.e.p≥99%的(R)-1-TIC晶体(分离收率不低于80%)。以上研究不仅大幅提高了该反应的整体催化效率,并且降低了酶的使用量。 展开更多
关键词 (R)-1 2 3 4-四氢异喹啉-1-羧酸 南极酵母脂肪酶 B 动态动力学拆分 催化效率
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Surfactant-coated Candida rugosa Lipase as Catalyst for Hydrolysis of Olive Oil in Solvent-Free Two-Phase System
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作者 宋宝东 丁辉 +3 位作者 吴金川 Hayashi Y. Talukder MMR 王世昌 《Chinese Journal of Chemical Engineering》 SCIE EI CAS CSCD 2003年第5期601-603,共3页
The surfactant-coated Candida rugosa lipase was used as catalyst for hydrolysis of olive oil in two-phase system consisting of olive oil and phosphate buffer without organic solvent. For both the coated and native lip... The surfactant-coated Candida rugosa lipase was used as catalyst for hydrolysis of olive oil in two-phase system consisting of olive oil and phosphate buffer without organic solvent. For both the coated and native lipases,the optimal buffer/oil volume ratio of 1.0, aqueous pH 6.8 and reaction temperature 30℃ were determined. The maximum activity of the coated lipase was ca 1.3 times than that of the native lipase. The half-life of the coated lipase in olive oil and the native lipase in phosphate buffer was ca 9 h and 12 h, and the final residual activity was 27% and 20% of their initial values, respectively. The final substrate conversion by the coated lipase was ca 20% higher than that of the native lipase. 展开更多
关键词 表面活性剂包覆酵母-玫瑰脂肪酶 催化剂 无溶剂条件 油水两相体系 橄榄油 催化 水解
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酶法催化乙酯甘油酯酯交换制备富含EPA和DHA的甘油酯 被引量:5
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作者 郭正霞 孙兆敏 +2 位作者 张芹 王静凤 薛长湖 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第20期176-180,共5页
采用国产固定化假丝酵母脂肪酶,催化乙酯型和甘油酯型鱼油酯交换制备富含EPA和DHA的甘油酯型鱼油,得到EPA和DHA总量超过45%的甘油酯。以5g甘油酯型鱼油为反应底物之一,考察了反应温度、时间、酶加量、底物质量比及加水量五个因素对酯交... 采用国产固定化假丝酵母脂肪酶,催化乙酯型和甘油酯型鱼油酯交换制备富含EPA和DHA的甘油酯型鱼油,得到EPA和DHA总量超过45%的甘油酯。以5g甘油酯型鱼油为反应底物之一,考察了反应温度、时间、酶加量、底物质量比及加水量五个因素对酯交换反应的影响,利用正交实验优化,得到最佳反应条件为:反应温度60℃,反应时间24h,底物质量比为5:4,加酶量为80U,不向反应体系中加入水分。在该条件下得到的甘油酯中EPA和DHA的含量分别为33.40%和13.10%,并且脂肪酶重复利用7次仍能达到工艺目标。 展开更多
关键词 无溶剂体系 酵母脂肪酶 N-3多不饱和脂肪 -酯交换
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