一种新的有机磷降解酶的分离纯化及酶学性质研究

从农药厂被污染的土壤中分离到一株降解有机磷农药的高效菌株C2-1,经鉴定表明为假产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes).对其产生的有机磷降解酶OPHC2进行了分离和纯化,并对其酶学性质进行了研究.其降解甲基对硫磷的最适温度为65℃,最适pH为9,并且此酶具有很好的热稳定性和pH稳定性,对大多数金属离子和化学试剂不敏感.OPHC2氨基酸序列及其编码基因的核苷酸序列分析表明,OPHC2与目前发表的有机磷降解酶没有同源性.

一种新的有机磷降解酶基因ophc2的克隆与表达

将来源于假产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes)的有机磷降解酶OPHC2进行了N端及内肽的氨基酸序列测定, 根据得到的氨基酸序列设计合成了简并引物, 通过PCR和反向PCR从Pseudomonas pseudoalcaligenes中克隆出有机磷降解酶基因ophc2. 编码基因全长975 bp, (G+C)含量为63%, 有一个可读框, 编码324个氨基酸, 酶蛋白理论分子量为36 kD. 编码基因的核苷酸序列分析表 明,与目前发表的有机磷降解酶基因相比同源性很低, 最高的只有46.4%, 说明这是一个新的有机磷降解酶基因. 将克隆得到的带有信号肽编码序列的和不带信号肽编码序列的有机磷降解酶基因, 分别与载体pET-30a构建重组表达质粒, 得到的表达产物具有正常的生物学活性.