宁波沿海陆源排污口假单胞菌属(Pseudomonas)分布特点

采用高通量454焦磷酸测序方法对宁波沿海2个重点排污口、8个一般排污口的20个站位水样进行分析,得到2011年3月、5月、8月、10月份各排污口假单胞菌属的分布情况。结果表明,宁波沿海陆源排污口中存在较多的假单胞菌属。在检出的假单胞菌属中,维罗纳假单胞菌(Pseudomonas veronii)和莓实假单胞菌(Pseudomonas fragi)的含量相对较多,分别占56.72%、13.904%;排污口中假单胞菌属的数量存在季节性差异,3月份、5月份假单胞菌的数量相对较多,8月份和10月份较少,推测与季节性温度变化有关;假单胞菌属的含量与排污口的主要污染物有关,氨氮含量较高的排污口假单胞菌属的含量更高。

假单胞菌Pseudomonas promysalinigenes RW10S1次级代谢产物研究

目的研究假单胞菌Pseudomonas promysalinigenes RW10S1的次级代谢产物。方法采用MCI柱色谱及半制备高效液相色谱法对发酵产物进行分离纯化,通过HR-ESI-MS、NMR等多种波谱学技术鉴定化合物的化学结构。结果从假单胞菌Pseudomonas promysalinigenes RW10S1的液体发酵物乙酸乙酯萃取部位分离得到了3个化合物,分别鉴定为promysalin(1)、promynicotin(2)、dihydrodeoxypromynicotin(3)。结论化合物2和3为新化合物。

一种假单胞菌Pseudomonas sp.导致的侧耳属细菌病害

假单胞菌属(Pseudomonas)的多个种均能造成多种食用菌子实体褐变及腐烂,是食用菌栽培中的主要细菌性病害的病原菌,给食用菌栽培带来极大损失。从云南一家栽培场发生褐变和腐烂的平菇(Pleurotus ostreatus)及杏鲍菇(Pleurotus eryngii)子实体中分离得到细菌病原菌株2株。经分析2株病原菌的16S rDNA序列完全一致,表明它们为同一物种。其16S rDNA序列在GeneBank中blastn分析显示与假单胞菌属菌种较为相似,有最高为99.56%的相似性。聚类结果表明该菌与常见的病原菌托拉斯假单胞菌(Pseudomonas tolaasii Paine)为不同种,后续需要进行生理生化实验以确定其在假单胞菌属中的分类地位,该种的鉴定为食用菌病害的防治研究奠定重要的基础。

溶无机磷假单胞菌鉴定及对黑麦草生长的影响

【目的】研究假单胞菌属的溶解无机磷能力,以获得性状优良的菌株资源。【方法】将从植物根际分离的8株细菌接种于PKO培养基,采用钼锑钪比色法定量分析、分子生物学鉴定和半固体植物接种试验,探究了细菌溶无机磷能力和对黑麦草的促生作用,并对菌株进行初步鉴定。【结果】8株细菌在PKO液体培养基培养10 d后,溶解无机磷量在329.39~479.09μg/mL,其中菌株MPD4溶磷量最高;8株细菌均归属于假单胞菌属(Pseudomonas sp.)。【结论】与对照相比,8株细菌均可有效促进黑麦草的生长发育。

一株红树林来源施氏假单胞菌的分离及其在水质净化中的应用

随着水产养殖业的快速发展,养殖水环境日趋恶化,养殖动物病害频发。益生菌因其对环境友好和安全而被广泛应用于养殖水环境的改善中。但细菌易受外界环境影响,稳定性不高,这严重制约了其在养殖水环境中的应用。固定化微生物技术可以大幅提高优势菌种在水环境中的稳定性,为细菌在水质净化应用提供了方向。该研究从三亚白鹭公园红树林根际土壤中筛选出一株高降解亚硝酸盐的菌株X1,该菌株在第4 d时亚硝酸盐降解率可达到97.18%。经16S rRNA基因的系统发育树分析表明,该菌株属于施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)。将该菌株与海藻酸钠-壳聚糖复合载体结合形成固定化小球,投入到养殖废水中,亚硝酸盐降解率在第2天就可以达到98.15%,第3天和第4天降解率保持平稳,并无亚硝酸盐积累,在第5天达到98.35%。该研究结果证实了施氏假单胞菌能够高效、快速且安全地降解水体中的亚硝酸盐,使用固定化技术能够更好地提高该菌株的降解速率及其稳定性,这为固定化施氏假单胞菌应用于水体净化提供了一定的参考。

西藏沙棘根瘤内生菌假单胞菌属的分离与鉴定

【目的】获取西藏沙棘根瘤内生菌中具有生物学活性的假单胞菌。【方法】采用细菌纯培养方法,从西藏沙棘根瘤中分离假单胞菌,通过细菌染色镜检、生化试验及16S rDNA基因序列分析等方法进行鉴定,通过生长曲线、耐受性、解磷及固氮能力定性筛选等实验对分离菌株生物学特性进行检测。【结果】分离菌株在YMA培养基上呈白色或乳白色,革兰氏阴性菌,杆状,16S rDNA序列比对结果表明分离株与参考假单胞菌属同源性为99%,命名为QY-X8。QY-X8在pH为5~8、氯化钠浓度0%~2%仍能存活,具有较强的抗逆性,溶解无机磷和有机磷的溶磷圈/菌圈均大于2 mm,具有较好的溶磷能力,但不具有固氮能力。【结论】QY-X8菌株具有较强的耐受性和解磷作用,可为研发生物菌肥提供基础材料。

假单胞菌属中新型Inc_(pGRT1)质粒的遗传特性及其潜在传播风险

目的 分析来自假单胞菌的Inc_(pGRT1)质粒的基因组结构和遗传特征,阐明其潜在的传播风险。方法 对临床分离菌株15420352进行分纯和保种后提取基因组DNA,随后进行全基因组测序。测序获得了质粒p420352-strA的完整序列,并对其进行质粒型别判断。对所有5个已测序的同型别质粒进行了骨架区和外源插入区的精细注释,其中包括本研究中测序的1个质粒p420352-strA和来自GenBank的4个质粒。主要通过RAST、Plasmidfinder、Blast、ResFinder和ISfinder等核定质粒的ORFs并筛查耐药毒力等相关的关键基因。结果 5个质粒被划分为新的Inc_(pGRT1)型质粒。它们均存在保守的IncpGRT1骨架标记,除主复制子repAInc_(pGRT1)外,还筛查到这些质粒均获取了一个辅复制子。5个IncpGRT1质粒携带了至少3个不同的主要外源插入区:srp区域、msr区域、Tn5053家族转座子。这些质粒中共发现3个已知的涉及2类抗生素耐药和重金属抗性的基因:strA、strB、mer。并发现在这些质粒里携带了至少1种毒力因子msr和5种关键的转运蛋白srp、emrE、mod、phn及lpt。结论 IncpGRT1型质粒已经成为一些耐药基因及毒力基因在假单胞菌属中积累和传播的重要载体,并提高了菌株的环境适应性。

降解烃类的假单胞菌Pseudomonas sp.超微结构的研究

本文报道了对生长于两种培养基上的降解烃类的假单胞菌Pseudomonas sp.的电镜观察结果。实验表明实验组与对照组细菌的外形与内部结构有明显的差异,生长于含有烃类基质上的实验组菌的外表有许多折皱和纤毛,菌体内有大小不等的油滴累积,油滴没有膜的界限。某些实验组菌体细胞膜上有膨胀的突起部分。整个观察表明,实验组细菌将烃类基质由菌体表面吸收入菌体,进而在体内累积,最终由胞内酶降解。

南极海洋假单胞菌Pseudomonas sp.NJ-013的化学成分

本研究进行了一株南极假单胞菌Pseudomonas sp.NJ-013代谢产物多样性分析、化学成分的分离和结构鉴定,以探讨其产物结构类型。菌株NJ-013甲醇提取物经LC-TOF MS测试分析其代谢产物多样性;还经柱层析和半制备高效液相色谱制备得到4个化学成分;化合物结构经TOF MS、1H-和13C-NMR等波谱学方法和文献数据对照鉴定。假单胞菌Pseudomonas sp.NJ-013的代谢产物主要类型为含氮的生物碱或寡肽类,分离得到的化合物1-4分别鉴定为环(4'-羟基苯丙氨酸-脯氨酸)(1)、环(4-羟基脯氨酸-亮氨酸)(2)、环(4-羟基脯氨酸-苯丙氨酸)(3)、环(异亮氨酸-脯氨酸)(4)。结构较为复杂的微量成分尚待进一步富集、研究。

2021至2023年不动杆菌属细菌的临床分布和耐药性分析

不动杆菌属是革兰阴性杆菌,多为球杆形,不发酵糖类,对营养要求一般,可广泛存在于自然界和医院环境中^([1-2])。痰液、尿液、血液、脓汁等标本中均可分离培养出不动杆菌属,是仅次于假单胞菌属的引起院内感染的重要致病菌^([3-4])。近年来,不动杆菌属的分离率呈不断上升趋势,该菌属除了本身固有耐药机制,还可产生获得性耐药机制,因此容易对多种抗菌药物产生耐药性,临床用药的选择严重受限^([5-7])。

实时荧光定量PCR法检测环境假单胞菌属细菌丰度

应用实时荧光定量PCR法，建立了总细菌及假单胞菌属的标准曲线，并以环境样本中假单胞菌属与总细菌的比值反映其细菌丰度．应用该方法评价人工除藻反应器中组合填料、无纺布、弹性填料等介质对太湖水中溶藻细菌之一的假单胞菌属的富集情况．结果显示：该方法对总细菌的检测范围为10^3～10^8个基因拷贝/μL（R^2=0．997）；假单胞菌属的检测范围为1～10^5个基因拷贝／μL（R^2=0．994）．对除藻反应器溶藻细菌富集效果的评价显示，所建立的方法能有效检测反应器中填料对该类溶藻细菌的富集程度．初步证明所建立的方法可有效定量假单胞菌属在环境样本中的丰度．

假单胞菌属细菌中整合子的分布及其可转移耐药性研究

目的研究临床分离假单胞菌属细菌中Ⅰ、Ⅱ类整合子分布及其可转移耐药情况。方法将Ⅰ、Ⅱ类整合酶基因通用引物置于同一反应体系,对假单胞菌属细菌以多重PCR法检测其整合子的分布,并对整合酶基因阳性菌进行接合转移,最后对接合转移成功菌以平板稀释法测其临床株和接合子MIC值。结果Ⅰ类和Ⅱ类整合酶基因在临床分离假单胞菌属细菌中检出率分别为38.1%和2.2%,含整合酶基因的接合子在转移成功接合子中所占比率为13.6%。结论Ⅰ类整合子在假单胞菌感染的临床分离株中所占比例已相当高,但水平传播率还较低。

根据16SrRNA序列对假单胞菌属分类学的研究进展

假单胞菌属是植物病原细菌中一个重要的属 ,而 1 6SrRNA序列分析是当前细菌分类中最精确的一种技术 ,应用这一技术对假单胞菌属进行分类有助于解决目前假单胞菌属分类的混乱 ,弄清假单胞菌属的系统进化关系。

几株红假单胞菌属细菌的表观特征及其遗传多样性研究

采用变性梯度胶电泳 (DGGE)分析方法和传统的表型特征研究方法、化学方法、核酸杂交方法等技术对 1 4株紫色非硫细菌进行了多相研究。它们均具有红假单胞菌属(Rhodopseudomonas)的基本特征 :具片层状光合内膜结构 ,出芽分裂 ,含细菌叶绿素α和正常的螺菌黄素等。根据形态大小、黑暗条件下能否形成好氧菌落及碳源利用上的差异可将 1 4株菌分为T群和 g c群两群。用一对引物 341f～ 90 6r扩增 3株标准菌株Rps.palustrisATCC 1 70 0 1、Rps.rutilaR1、Rps.juliaATCC 51 1 0 5和 1 4株分离株的 1 6SrRNA基因片断 ,作DGGE分析 ,结果发现 ,1 7株菌中有 5个遗传型 :g c型、R1型、T型、pal型、jul型。 3个标准菌株分别是R1型、pal型、jul型 ,而 1 4株分离菌株除包括R1型外 ,另有 2个新的遗传型 :T型和 g c型。几个代表菌株的总DNA的杂交结果表明 ,T型和 g c型可能代表 2个新的种群。

一株托拉斯假单胞菌(Pseudomonas tolaasii)G86的鉴定及其对亚硝酸盐的降解作用

从河北邯郸某虹鳟养殖场的底泥中分离得到一株革兰氏阴性菌,对其形态特征及16S rRNA基因序列进行测定分析并做生理生化鉴定,确定为一株托拉斯假单胞菌(Pseudomonas tolaasii),编号为G86。经发酵培养试验得到优化后的培养基和培养条件为:温度10℃,pH 6,转速180 r/min。以亚硝酸钠为唯一氮源,在上述培养条件下在72 h对总氮和亚硝酸盐氮的去除率分别为33.05%和31.85%。本次分离得到的托拉斯假单胞菌G86可以作为养殖生产上降解亚硝酸盐的备选菌株。

西藏沙棘根瘤内生假单胞菌的分离鉴定及促生性研究

【目的】获取西藏沙棘根瘤内生菌中具有多重生物学活性的假单胞菌属菌株,探究筛选所得菌株的促生作用,为研发高效生物菌肥提供基础材料。【方法】利用纯培养方法,从西藏沙棘根瘤中分离假单胞菌,通过形态、生理生化及16S rDNA序列比对鉴定菌株,测定菌株溶磷、产IAA、产铁载体及产降解纤维素酶的能力,接种宿主植物验证其促生效果。【结果】4株根瘤内生菌与参考假单胞菌属同源性为99%以上,鉴定为假单胞菌属。溶磷和产IAA的定性及定量结果表明,4株菌均具有溶解无机磷和产IAA的能力,其中溶解无机磷能力较强的菌株是QY-X10和QY-X22,均达到400 mg·L^(-1);菌株QY-X4产IAA能力较其他菌株强,达1.9 mg·L^(-1);4株菌株具有产铁载体的能力,除QY-X10以外,均具产降解纤维素酶的能力;促生试验结果表明,QY-X6可有效促进种子的萌发;QY-X6、QY-X10处理组叶片数显著高于对照;QY-X6、QY-X10处理组苗长显著高于对照;QY-X10、QY-X22处理组最大叶片长显著高于对照。【结论】分离筛选出4株假单胞菌,均可溶解无机磷和产IAA,兼具产铁载体;3株兼具产降解纤维素的能力;接种试验发现,4株菌株处理组可有效促进植株的生长发育,分离菌株可为研发生物菌肥提供基础材料。

口腔综合治疗台水路系统中假单胞菌属污染状况的检测

目的:采用细菌培养技术与Miseq测序技术检测牙科综合治疗台水路系统(dental unit waterlines,DUWLs)中的假单胞菌属,以综合评估假单胞菌属在DUWLs中的污染情况。方法:选择南京医科大学附属口腔医院25台口腔综合治疗台作为研究对象。在医院开诊前收集三用枪水样400 mL,平均分为2份,一份用于细菌培养。另一份用于提取细菌基因组总DNA,经细菌通用引物PCR扩增后构建宏基因组文库,用于Miseq测序和生物信息学分析。结果:25个样本在不同浓度条件下经细菌培养法均未检出假单胞菌属。16个样本成功构建宏基因组文库,经Miseq测序均检测到假单胞菌属存在,检出率为100%,假单胞菌属在16个样本中的丰度为(3.02±2.12)%。结论:DUWLs中存在低水平的假单胞菌属污染,但假单胞菌属大部分可能处于死亡或"活的非可培养"状态,不具有较大的生物危害性。与传统细菌培养法相比,Miseq测序技术在特定病原菌的检测方面表现出了较高的敏感性,但无法区分样本中细菌的活性,若要将高通量测序技术用于活性病原菌的检测还需要进一步的研究。

一株产褐藻酸多糖的海洋假单胞细菌 Pseudomonass P．QDA的筛选和鉴定

根据已获褐藻酸多糖生物合成基因簇中褐藻胶裂解酸基因(algL)的序列设计特异性引物，利用PCR技术从海洋微生物中筛选到1株能够分泌胞外多糖的细菌。采用形态学观察和DNA序列分析鉴定该菌株，结果为假单胞属细菌，命名为Pseudomonassp．QDA；系统发育树显示该菌株与P.purida亲缘关系最近。菌株产生的胞外多糖可被褐藻胶裂解酶(AlgL)降解，并在紫外234nm处检测到特征性吸收，初步证明含有褐藻酸多糖。

假单胞菌属No.2120生产D-甘露糖异构酶发酵培养基的优化

通过单因子实验、Plackett-Burman实验设计、响应面分析法对假单胞菌属No.2120产D-甘露糖异构酶的培养基进行优化,确定发酵优化条件:果糖15.26 g/L,牛肉膏20 g/L,酵母膏2 g/L,K2HPO42 g/L,MgSO4.7H2O0.5 g/L,NaCl 0.5 g/L,Tween-80 1.54 g/L。采用优化配方异构酶比酶活可以达到68.28 U/mL。