假型逆转录病毒载体介导的tPA转染对平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨假型逆转录病毒载体VSV-G/MuLV介导组织纤溶酶原激活物(tPA),lacZ基因转染兔平滑肌细胞(SMCs)后基因的表达和对SMCs增殖的效应.方法:利用携带tPA,lacZ基因的假型逆转录病毒载体VSV-G/MuLV分别转染兔SMCs(SMCs/tPA,SMCs/lacZ).通过检测tPA抗原和测定tPA的活性观察tPA基因的表达.通过x-gal染色检测β-gal的活性测定lacZ基因的表达.用放射性标记的脱氧胸腺嘧啶苷(3H-TdR)掺入法和细胞计数法测定SMCs的增殖.结果:在没有纤溶酶原时,SMCs/tPA与SMCs在增殖上无显著差异.在有纤溶酶原时,SMCs/tPA条件培养基诱导了SMCs增殖.结论:VSV-G/MuLV介导tPA,lacZ转染到SMCs并成功表达.tPA基因转染在纤溶酶原存在的条件下促进了SMCs的增殖.

假型逆转录病毒载体高效介导兔平滑肌细胞基因转染

目的构建假型逆转录病毒载体MuLV／VSV-G，并用于转染兔平滑肌细胞，为兔平滑肌细胞基因转染寻找一种高效的载体。方法构建含有报道基因lacZ的假型逆转录病毒载体MuLV／VSV—G，测定滴度，并转染兔平滑肌细胞，观察其转导效率。并与MuLV的转导效率进行比较。结果构建的MuLV／VSV-G载体，病毒滴度为6～7．8×10^6CFU，转染兔平滑肌细胞的效率是（92±12）％。而MuLV的转导效率为（24土5）％。结论成功构建了假型逆转录病毒载体MuLV／VSV-G载体，该载体作为一种高效的载体可用于兔平滑肌细胞基因转染。

假型逆转录病毒高效介导人乳腺癌细胞基因转移

目的 :探索假型逆转录病毒MuLV/VSV G在乳腺癌细胞基因转导的效率 ,为乳腺癌细胞基因转导找寻一种高效的载体。方法 :将含报道基因的假型逆转录病毒MuLV/VSV G转导入人乳腺癌MDA MB 435细胞 ,观察其转导效率 ,并与MuLV的转导效率进行比较。结果 :MuLV/VSV G的转导效率达 (92± 12 ) % ,MuLV的转导效率为 (2 4±5 ) % ,前者较MuLV转导效率提高 3.8倍。结论 :假型逆转录病毒MuLV/VSV G可作为一种高效的载体广泛应用于乳腺癌的基因治疗研究。

心肌成纤维细胞成为基因靶细胞的可行性研究

目的探索心肌成纤维细胞成为基因靶细胞的可行性。方法采用改良的差速贴壁法培养乳鼠心肌成纤维细胞并加以鉴定;利用携带新霉素抗性基因(neor)的假型逆转录病毒载体(VSV-G/MuLV)转导培养的乳鼠心肌成纤维细胞,用G418筛选法观察基因转导效果。结果成功建立高纯度心肌成纤维细胞培养模型;转基因后的心肌成纤维细胞经G418筛选后2周左右见大量克隆形成。结论假型病毒载体成功介导neor基因转导入心肌成纤维细胞,表明心肌成纤维细胞有望成为心血管疾病基因治疗的靶细胞。

转tPA基因血管内皮细胞的功能表达

目的 观察组织型纤溶酶原激活剂（tPA）基因转导血管内皮细胞后的功能表达。方法 利用携带tPA基因的假型逆转录病毒转导血管内皮细胞株ECV304，用G418筛选法观察基因是否成功转导，采用发色底物显色法检测转基因ECV304细胞培养上清液中tPA纤溶活性变化。结果 转tPA基因后的血管内皮细胞经G418筛选后2周左右见大量克隆形成；转tPA基因ECV304细胞培养上清液中tPA纤溶活性在转导24h后增高，48h后增高更明显，72-96h浓度达高峰。结论 假型逆转录病毒载体成功介导tPA基因转导血管内皮细胞，并呈有效功能表达，为心血管手术后预防血栓形成的基因治疗提供实验依据。