使用孕酮P4诱导雌鼠同步发情

目的 探索采用注射孕酮的方式诱导SD大鼠和BALB/c小鼠的雌鼠同步发情。方法 在实验第1天和第2天给8周龄SD大鼠和BALB/c小鼠的雌鼠注射孕酮激素和注射孕酮量分别为每只10 mg和2 mg,连续注射2 d,第4天合笼,分别在第5天、第6天和第7天进行检栓。利用见栓后的SD大鼠假孕鼠进行胚胎移植,选择发情雌鼠与结扎雄鼠交配得到的假孕鼠同步移植作为对照;利用见栓后的BALB/c小鼠雌鼠冲取囊胚用于胚胎干细胞(ESC)注射。结果 注射孕酮后的SD大鼠雌鼠单日最高见栓率可达到44%,整体见栓率能达到80%以上;注射孕酮后的BALB/c小鼠雌鼠单日最高见栓率可达到46%,整体见栓率能达到70%以上;注射孕酮单日见栓率是传统选择发情后合笼见栓的7~8倍,整体见栓率是传统方式的15倍以上,与传统方法相比,用于准备假孕的SD大鼠雌鼠和供体囊胚BALB/c小鼠雌鼠的基础雌鼠数量可降低10%~20%;SD大鼠假孕鼠的胚胎出生率较传统方法提高13%。结论 注射每只10 mg和每只2 mg孕酮可分别用于诱导8周龄SD大鼠雌鼠和BALB/c小鼠的雌鼠同步发情,可显著提高见栓率和SD大鼠雌鼠胚胎出生率。

假孕大鼠黄体萎缩过程中凋亡相关基因Fas/FasL,Bax/Bcl-2和Caspase-3的表达

以促性腺激素诱导的假孕大鼠为模型,用免疫组织化学、原位杂交、蛋白质印迹(Western blotting)和原位末端标记(TUNEL)方法研究了细胞凋亡相关分子Fas/FasL,Bax/Bcl-2和Caspase-3在不同时期黄体中的表达。结果显示:排卵后第8天前黄体内没有凋亡信号,第14天开始出现凋亡信号,持续到第21天;Fas在黄体中的各个时期都有表达,随黄体发育其表达水平增加。FasL在黄体各个时期都有表达,第14天明显上升,到第21天达到高峰;Bcl-2随黄体的形成、维持和萎缩过程其表达由强到弱,到第21天基本不表达;而Bax的表达正相反,排卵后第2天几乎不表达,第8天表达明显增加,到第21天表达最高;Caspase-3持续表达于各期黄体中,并随黄体的发育其表达由弱到强,第2天表达最低,到第21天表达最高。结果提示,大鼠黄体萎缩后期发生细胞凋亡。

热应激对黄体孕酮代谢通路的影响

[目的]以假孕大鼠为模型,探讨热应激对氯前列烯醇(PGF)诱导的黄体退化过程中孕酮水平及其代谢通路相关蛋白表达的影响。[方法]用PMSG/h CG(D0)联合处理50只大鼠,诱导假孕,然后随机分为非热应激(NHS)和热应激(HS)两组。每天在相同时间,将HS组置于40℃应激2 h。假孕第7天,热应激结束2 h后,各组大鼠以PGF分别处理0、1、2、8和24 h后屠宰,收集血清和卵巢组织。用酶联免疫法检测血清孕酮浓度,蛋白免疫印迹法和免疫组织化学法检测孕酮水平及其代谢通路相关蛋白的表达。[结果]热应激前、后假孕大鼠的直肠温度差异显著(P<0.05);PGF降低了两组大鼠血清孕酮浓度,热应激抑制了PGF诱导的孕酮浓度下降(P<0.05);PGF或热应激处理对PKA磷酸化底物、St AR、P450scc、3βHSD及NR4A1-F表达均无显著影响(P>0.05),但均诱导NR4A1-S表达上调(P<0.05),且热应激降低PGF诱导的NR4A1-S表达(P<0.05);PKA磷酸化底物主要在类固醇生成细胞的细胞核中表达,而St AR、P450scc、3βHSD和NR4A1-F均在类固醇生成细胞的细胞质表达。[结论]热应激降低了PGF诱导的假孕大鼠黄体退化过程中NR4A1-S的表达,提示NR4A1-S可能参与调控黄体退化过程中孕酮的代谢。