2型猪链球菌假想转运蛋白89k/pTP与毒力的相关分析

目的:构建2型猪链球菌假想转运蛋白89k/pTP的基因插入失活突变体并进行毒力相关分析。方法:首先将同源臂片段克隆到pSET4s质粒上,构建插入失活载体pSET4s-pTP,并通过对单交换的筛选获得89k/pTP的基因插入失活突变体,再用小鼠腹腔感染模型对突变株和野生株的毒力进行比较。结果:获得了89k/pTP的基因插入失活突变体,并发现其毒力与野生型相比明显下降。结论:2型猪链球菌假想转运蛋白89k/pTP与其毒力有关,其作用和机制值得进一步分析。

人假想镁离子转运蛋白在胃癌细胞耐药中的生物学作用

目的 制备人假想镁离子转运蛋白(HPT)抗血清并检测其在胃癌耐药细胞中的表达 ,以观察其在胃癌耐药发生中的作用。方法 克隆编码HPT蛋白的cDNA并测序鉴定 ;构建原核表达载体pRSETB HPT ,诱导表达 6×His与HPT的融合蛋白 ;用含融合蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒免疫小鼠 ,以Westernblot检测小鼠血清的抗体活性 ;以所制备的抗血清检测HPT蛋白在胃癌各细胞系中的表达。结果 DNA测序结果证实所克隆的基因片段与预计相符 ;利用原核系统表达出 1条约 5 5kD的新生蛋白带 ,Westernblot证实其为与6×His融合的蛋白 ;该融合蛋白免疫血清仅结合SGC790 1细胞中约 5 0kD的单一蛋白带 ;利用该血清检测发现SGC790 1 /ADR中HPT蛋白表达水平高于SGC790 1。结论 成功地制备了鼠抗人HPT蛋白抗血清 。