基于网络药理学探讨健脾化浊调脂方治疗动脉粥样硬化合并肠道菌群失调的机制

目的 基于网络药理学探讨健脾化浊调脂方治疗动脉粥样硬化合并肠道菌群失调的机制。方法 通过TCMSP、BATMAN-TCM等数据库筛选出健脾化浊调脂方活性成分及相应靶点,GeneCards数据库收集动脉粥样硬化、肠道菌群的相关靶点,Venny平台筛选活性成分与疾病的共同靶点,Cytoscape 3.8.1软件、STRING数据库构建相关网络图并得到关键靶点,将靶点输入DAVID数据库进行GO和KEGG富集分析,再将排名前六活性成分与PPI中关键靶点进行分子对接。采用免疫组织化学和蛋白免疫印迹对关键靶点进行验证。结果 共筛选得到147种活性成分,包括槲皮素、木犀草素等;与疾病共同作用的靶点有46个,其中IL-10、JUN、INS、TP53、PTGS2、TNF为关键靶点。GO功能富集分析得到2 095个生物过程,KEGG通路富集筛选得到144条通路,包括MAPK、NF-κB、cAMP等,分子对接结果显示与健脾化浊调脂方结合性较好。健脾化浊调脂方能降低ApoE小鼠主动脉IL-1β、PTGS2、c-Jun表达。结论 健脾化浊调脂方可通过多靶点、多通路来改善动脉粥样硬化合并肠道菌群失调。

健脾化浊调脂方调控NOX/ROS/NF-κB通路对动脉粥样硬化大耳兔的抗氧化应激损伤作用研究

目的研究健脾化浊调脂方(Jianpi Huazhuo Tiaozhi Recipe,JHTR)对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)大耳兔氧化应激损伤的影响,探讨JHTR抗AS的可能机制。方法60只大耳兔随机分为空白对照组、模型对照组、JHTR(低、中、高)剂量组、阳性对照组各10只。除空白对照组外,其余5组均喂以高脂饲料制备AS兔模型。JHTR低、中、高剂量组分别予1,2,4g/(kg·d)JHTR灌胃,阳性对照组予阿托伐他汀2mg/(kg·d)灌胃。药物干预10周后,ELISA法测定血清氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,化学荧光法测定胸主动脉ROS含量,Western blot法和qPCR法分别检测胸主动脉NOX4、p22phox蛋白表达和IKK-α、IKK-β、NF-κB mRNA表达。结果JHTR能够降低ox-LDL、MDA含量,提高SOD活性,并且下调NOX/ROS/NF-κB通路中NOX4、p22phox的蛋白表达,ROS含量,IKK-α、IKK-β、NF-κB mRNA表达。结论JHTR对AS大耳兔起抗氧化应激损伤的作用,这种保护作用可能与其抑制NOX/ROS/NF-κB通路有关。

健脾化浊调脂方通过NOX/ROS-NF-κB通路对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖抑制作用研究

目的:基于NADPH氧化酶(NOX)/活性氧(ROS)/核转录因子kappa B(NF-κB)信号通路探讨健脾化浊调脂方(JHTG)对氧化应激损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:将VSMC分为空白对照组,模型对照组,2.5%、5%、10%JHTG组,抑制剂组和阳性对照组。除空白对照组外,其他各组在ox-LDL刺激后分别予以2.5%、5%、10%含药血清,NF-κB抑制剂和阿托伐他汀干预。采用MTT法检测细胞增殖水平,ELISA法检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD),荧光探针法测定ROS,qPCR法和Western Blot法分别对NOX和NF-κB通路相关参数的表达进行检测。结果:与空白对照组相比,模型对照组表现VSMC过度增殖和氧化应激损伤,NOX/ROS-NF-κB通路的表达上调(P<0.05);与模型对照组相比,JHTG各组、阳性对照组和抑制剂组能抑制VSMC增殖,且10%JHTG抑制效果最佳(P<0.05);同时JHTG呈浓度依赖性地降低MDA水平,提高SOD活性,降低ROS、IKK-α、IKK-β、NF-κB表达和抑制NOX4、p22phox蛋白表达(P<0.05)。结论:JHTG能够提高细胞的抗氧化能力,并可能通过抑制NOX/ROS-NF-κB信号通路减少氧化应激导致的VSMC增殖,对动脉粥样硬化的病变起到防治的作用。

基于LC-MS的健脾化浊调脂方治疗动脉粥样硬化小鼠的肝脏代谢组学研究

目的 基于液相色谱-质谱联用(LC-MS)研究健脾化浊调脂方对动脉粥样硬化(AS)小鼠肝脏内源性代谢物的调节机制。方法 采用高胆碱饮食诱导小鼠AS模型,观察小鼠肝脏组织病理变化,运用LC-MS技术分析小鼠肝脏样品代谢轮廓,结合主成分分析(PCA)、正交最小偏二乘判别分析(OPLS-DA)等手段鉴定并筛选出小鼠肝脏差异代谢物及代谢通路。结果 健脾化浊调脂方可改善AS小鼠肝脏脂质蓄积情况,并回调12种与AS相关的潜在生物标志物以及6条代谢通路(甘油磷脂代谢、嘌呤代谢、β-丙氨酸代谢、泛酸和辅酶A生物合成、组氨酸代谢以及苯丙氨酸代谢)。结论 健脾化浊调脂方可能通过干预AS小鼠肝脏脂质代谢、氨基酸代谢以及能量代谢等过程发挥抗AS作用。