基于网络药理学和体外实验探讨健脾疏肝清化方治疗非酒精性脂肪性肝病的机制

目的:运用网络药理学和体外实验寻找健脾疏肝清化方的主要活性成分及其潜在作用靶点和通路,初步探讨其治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的机制。方法:在TCMSP数据库中筛选健脾疏肝清化方中中药的主要成分和靶点,同时在GeneCards、OMIM、TTD数据库筛选NAFLD相关靶点,两者取交集后得到健脾疏肝清化方治疗NAFLD的潜在靶点,并通过Cytoscape绘制网络图;String数据库获得蛋白交互作用网络网,利用Cytoscape寻找核心基因;同时运用R语言clusterProfiler包进行GO、KEGG富集分析;利用AutoDock Tools进行分子对接模拟靶点蛋白与活性成分的相互作用;运用棕榈酸、油酸构建AML12脂肪变性细胞模型,通过细胞油红O染色、细胞内甘油三脂(TG)测定以及核心靶点的mRNA相对水平验证健脾疏肝清化方治疗NAFLD的疗效及机制。结果:①11种中药通过口服利用度(OB)和类药性(DL)筛选后,有效活性成分共210种,其中槲皮素、山柰酚、木犀草素、异鼠李亭、β-谷甾醇及柚皮素为主要活性成分;②健脾疏肝清化方治疗NAFLD的潜在靶点有119个,其中TNF、AKT1、IL-6、IL-1β、PPARG、TP53为核心靶点;③GO分析显示活性氧代谢过程的调节(GO:2000377)、对脂多糖的反应(GO:0032496)、活性氧代谢过程(GO:0072593)、对细菌来源分子的反应(GO:0002237)、对药物的反应(GO:0042493)起关键作用;KEGG富集分析显示肿瘤坏死因子信号通路、NAFLD、Toll样受体通路、胰岛素抵抗通路等通路可能在治疗中起关键作用;④分子对接显示槲皮素和IL-1β的结合较好。⑤体外细胞实验表明,健脾疏肝清化方可以降低肝细胞油红O红染(脂滴)面积以及细胞内TG水平,同时RT-qPCR表明健脾疏肝清化方能够调控核心靶点的表达。结论:基于网络药理学和体外实验,健脾疏肝清化方治疗NAFLD可能是槲皮素、山柰酚、木犀草素作用于TNF、AKT1、IL-6、IL-1β、PPARG、TP53等靶点,通过TNF信号通路、Toll样受体通路、胰岛素抵抗通路发挥作用,是多组分、多靶点、多通路相互交互的结果。

孙明瑜教授运用一气周流理论治疗NAFLD用药规律探讨

目的 基于对黄元御“一气周流”理论的认识,探讨孙明瑜教授治疗NAFLD的用药规律及临床经验。方法 采用回顾性研究设计,对孙师脂肪肝门诊就诊的NAFLD患者的基本信息、证型、方药、辅助检查进行归纳总结,对其进行疗效评价,并寻找肝郁脾虚型NAFLD的核心用药。结果 本研究共纳入153例NAFLD患者,其中肝郁脾虚型最为常见;治疗前后患者谷丙转氨酶、谷草转氨酶、y-谷氨酰转移酶、总胆固醇均有所下降(P<0.05),肝郁脾虚型患者中医症状较治疗前改善;核心药物复杂网络图显示,肝郁脾虚型核心药物为柴胡、白芍、北沙参、白术、茯苓、陈皮、甘草、垂盆草、山楂、丹参、金银花。结论 运用黄元御“一气周流”理论总结出健脾疏肝清化方治疗肝郁脾虚型NAFLD,其临床疗效显著。