基于ERK5信号通路探讨薯蓣健脾益智合剂对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:探讨薯蓣健脾益智合剂对血管性痴呆(VaD)大鼠海马神经元凋亡的影响以及相关作用机制。方法:采用改良双侧颈总动脉结扎(2-VO)法建立VaD大鼠模型,将120只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和治疗组,每组30只。治疗组予以10 mL/(kg·d)薯蓣健脾益智合剂灌胃,正常组、假手术组、模型组给予等量生理盐水灌胃,持续8周。观察大鼠一般状态,并于造模后第7天及造模后治疗4、8周分别进行行为学检测,苏木精-伊红(HE)染色观察海马神经元组织学改变,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色观察海马神经元凋亡情况,免疫组织化学法检测丝分裂原活化蛋白激酶K2(MEKK2)、丝分裂原活化蛋白激酶K3(MEKK3)和丝裂原激活蛋白激酶5(MEK5)、细胞外信号调节激酶5(ERK5)表达的变化,蛋白免疫印迹法检测MEKK2、MEKK3和MEK5、ERK5的蛋白表达。结果:与正常组及假手术组比较,模型组行为学表现差异显著,变性神经元增加,神经元凋亡率增加(P<0.01),MEKK2、MEKK3和MEK5、ERK5的表达减少;与模型组比较,治疗组行为学表现改善,变性神经元减少,神经元凋亡率降低(P<0.05或P<0.01),MEKK2、MEKK3和MEK5、ERK5表达增加。结论:薯蓣健脾益智合剂可能通过上调ERK5信号通路,抑制海马神经元凋亡,促进海马神经元的修复进而治疗VaD。

从肠道菌群探讨健脾益智法治疗缺血性脑卒中的机制研究

中医脾与脑相关理论是健脾益智法治疗缺血性脑卒中的理论基础,而肠道菌群-肠-脑轴是脾脑相关理论的微观机制体现。肠道菌群因定植于肠道,与中医脾脏有着天然的相关性:脾主运化与肠道菌群的消化、吸收作用相关,脾胃气机升降与肠道菌群促进肠蠕动相关;脾主为卫与肠道菌群促进免疫系统的发育与功能的成熟相关。肠道菌群属于中医脾藏功能范畴,为治疗缺血性脑卒中提供了新的思路。从肠道菌群的角度来看,健脾益智法治疗缺血性脑卒中具有坚实的理论及现实依据,健脾益智法治疗缺血性脑卒中值得展开深入研究。

醒脑灌肠液联合健脾益智胶囊对脑卒中大鼠TrkB表达、运动功能、Notch1信号的影响

目的探究醒脑灌肠液联合健脾益智胶囊对脑卒中大鼠原肌球蛋白受体激酶(Trk)B表达、运动功能、Notch1信号的影响。方法将所选取的大鼠随机为模型组(M组),对照组(D组),醒脑灌肠液组(X组),健脾益智胶囊组(J组),醒脑灌肠液联合健脾益智胶囊组(L组),剔除造模失败大鼠,每组6只。采用Carcia评分评价大鼠运动功能,Western印迹法检测Notch1蛋白含量,转角实验评价大鼠神经功能,组织免疫化学染色法检测TrkB蛋白阳性表达情况,qRT-PCR法检测TrkB、Notch1 mRNA表达量来探究醒脑灌肠液联合健脾益智胶囊对脑卒中大鼠TrkB表达、运动功能、Notch1信号的影响。结果建模成功后第1天,各组Carcia评分、运动功能评分差异无统计学意义(均P>0.05),随着时间的延长,D组转角Carcia评分及运动功能评分无明显改变,X组、J组Carcia评分明显上升,但两组评分差异无统计学意义(P>0.05)。与X组、J组相比较,L组评分出现明显升高(均P<0.05),D组、J组、L组运动功能评分出现明显好转,与X组、J组相比较,L组运动功能评显著升高(均P<0.05),X组、J组运动功能评分差异无统计学意义(P>0.05)。D组海马组织的TrkB阳性蛋白数、Notch1蛋白含量、TrkB、Notch1 mRNA表达量最高,M组最低,与X组、J组比较,L组海马组织中TrkB阳性数、Notch1蛋白含量、TrkB、Notch1 mRNA表达量显著升高(均P<0.05)。L组相比较,两组TrkB阳性数、Notch1蛋白含量、TrkB、Notch1 mRNA表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论醒脑灌肠液与健脾益智胶囊均对脑卒中模型大鼠存在一定的治疗效果,能够改善大鼠的运动、神经功能,但醒脑灌肠液与健脾益智胶囊两种药物联合效果更佳,改善指标更为显著,其作用机制可能为上调大鼠海马组织中TrkB、Notch1信号表达水平。

健脾益智汤对阿尔茨海默病大鼠脑内尿素循环酶含量的调控

目的 观察健脾益智汤调控阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的尿素循环相关酶的影响,探讨健脾益智汤改善模型大鼠脑内尿素代谢的可能机制。方法 采用SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、健脾益智汤组、吡拉西坦组。采用海马区注射Aβ1-40的方法制备AD动物模型,两个给药组大鼠分别灌胃健脾益智汤和吡拉西坦7、14、28 d,随后处死取出全脑。采用ELISA法检测尿素循环相关酶精氨酸酶(ARG),精氨基琥珀酸合成酶(ASS)和精氨酸代琥珀酸裂解酶(ASL)的含量。结果 在治疗7、14、28 d时,与对照组比较,模型组脑内ARG、ASS含量均明显升高,P<0.01或P<0.05。与模型组相比,在治疗7 d时,健脾益智汤组与吡拉西坦组ARG、ASS含量有所下降;在治疗14和28 d时,健脾益智汤组与吡拉西坦组ARG、ASS含量明显下降,P<0.01或P<0.05。结论 健脾益智汤可能通过下调ARG、ASS酶活性,使尿素生成减少或降低炎症细胞因子的表达水平而达到改善学习记忆障碍的作用。

健脾益智法对多发梗塞性痴呆大鼠脑组织乙酰胆碱酯酶活性的影响

[目的]探讨健脾益智法治疗多发梗塞性痴呆(MID)的作用机制。[方法]运用灌服小承气汤以及栓子注入的方法制作MID大鼠模型,检测比较各组大鼠脑组织中乙酰胆碱酯酶(AchE)活性。[结果]中药组大鼠脑组织中AchE活性明显降低,与手术组比较差异非常显著(P<0.01),与假手术组及西药组比较差异显著(P<0.05)。[结论]健脾益智法可以明显降低大鼠脑组织中AchE活性,从而改善中枢胆碱能神经系统的功能,起到治疗MID的目的。

健脾益智法对多发梗塞性痴呆大鼠海马组织形态学的影响

目的:探讨健脾益智法治疗多发梗塞性痴呆(MID)的作用机制。方法:运用灌服小承气汤以及栓子注入的方法制作MID大鼠模型,光镜下对比观察各组大鼠脑组织形态结构的病理变化。结果:与其他3组比较,中药组大鼠脑组织损伤情况明显减轻。结论:健脾益智法可能是通过提高脑细胞对缺血缺氧的耐受力,减轻海马区细胞以及其他脑细胞的损伤,从而起到治疗MID的目的。

巳时、申时健脾益智胶囊对AD大鼠全血AChE表达的影响

目的探讨巳时、申时健脾益智胶囊对老年性痴呆(AD)大鼠全血乙酰胆碱酯酶(ACh E)表达的影响,揭示"脾主巳时"理论的科学性。方法通过腹腔注射D-半乳糖,同时胃饲氯化铝(ALCL3)的方法塑造AD动物模型,设立正常对照组、模型组、中药申时组、中药巳时组,应用分光光度测定方法测TCh E活性,通过比较巳时和申时健脾益智胶囊对AD大鼠全血中ACh E表达的影响来揭示"脾主巳时"的科学性。结果 AD大鼠经过治疗,中药巳时组ACh E活性明显降低,与模型组和中药申时组比较有显著差异(P<0.05或P<0.01)。结论健脾益智胶囊可以降低全血ACh E活性,起到治疗AD的作用,而中药巳时组效果显著,从而验证"脾主巳时"理论的科学性。

健脾益智胶囊对MCAO大鼠海马β-catenin表达的影响

目的 :探讨健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠海马β-连环蛋白(β-catenin)基因与蛋白表达的影响。方法:SD大鼠120只,建立MCAO大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、西药组、中药组,模型组、假手术组给予0.9%氯化钠溶液,中药组、西药组分别给予健脾益智胶囊、尼莫地平混悬液灌胃。采用蛋白免疫印迹、实时荧光定量PCR法于术后7 d、14 d、28 d观察海马β-catenin蛋白及m RNA表达情况。结果:术后7 d,中药组β-catenin蛋白及m RNA表达均高于其他各组(P<0.05);术后14 d中药组蛋白及m RNA表达高于正常组、假手术组、模型组(P<0.05);术后28 d中药组β-catenin蛋白及m RNA表达高于模型组(P<0.05),低于中药组7 d、14 dβ-catenin蛋白及m RNA表达(P<0.05)。结论:健脾益智胶囊可提高β-catenin蛋白及基因的表达,提示健脾益智胶囊能可能通过激活Wnt通路以促进缺血后神经干细胞增殖分化。

基于脾主长夏探讨健脾益智胶囊对AD大鼠TChE、GFAP表达的影响

目的探讨健脾益智胶囊对阿尔茨海默病(AD)大鼠的作用机理。方法通过腹腔注射D-半乳糖,同时胃饲氯化铝(ALCL_3)的方法塑造AD动物模型,设立空白对照组、模型组、长夏组、非长夏组,采用酶联免疫法(Elisa)法检测其尾血血清中乙酰胆碱酯酶TChE,应用免疫组化法测定给药后AD大鼠海马区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的阳性细胞数。结果给药后,与非长夏组、模型组比较,长夏组TChE活性明显降低(P<0.01)以及GFAP表达明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论健脾益智胶囊能够抑制TChE活性,间接提高血清中乙酰胆碱的含量,并通过升高大鼠海马区GFAP阳性表达,促进星形胶质细胞的激活,达到治疗AD的作用,从而验证"脾主长夏"理论的科学性。

健脾益智胶囊对MCAO大鼠海马NT3及学习记忆能力的影响

[目的]探讨健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠海马神经营养素3(NT3)及学习记忆能力的影响。[方法]建立MCAO大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、西药组、中药组。采用免疫组化法、Bederson评分、Morris水迷宫实验、跳台实验于术后7 d、14 d、28 d观察MCAO大鼠海马NT3的表达及学习记忆能力的改善情况。[结果]随着术后时间的增加,模型组、西药组、中药组大鼠Bederson评分逐渐减少,组内各时间点的评分均有显著性差异(P<0.05);与模型组比较中药组与西药组同时间点评分差异显著(P<0.05),且中药组评分优于西药组(P<0.05)。随着术后时间的增加,Morris水迷宫实验中模型组、中药组、西药组逃避潜伏期逐渐缩短,穿越原平台次数逐渐增多;跳台实验潜伏期逐渐延长,错误次数逐渐减少(P<0.05)。中药组均较同时间点模型组、西药组水迷宫实验逃避潜伏期缩短,穿越次数增多;跳台实验潜伏期延长,错误次数减少(P<0.05)。免疫组化实验显示,术后7 d中药组NT3阳性细胞数明显多于模型组、西药组(P<0.05);术后14 d中药组NT3阳性细胞数与西药组无明显差异(P>0.05);术后28 d中药组NT3阳性细胞数明显多于模型组、西药组(P<0.05)。[结论]健脾益智胶囊可促进MCAO大鼠学习记忆能力的恢复,促进MCAO大鼠海马NT3表达增加,提示健脾益智胶囊可能通过诱导NT3表达以达到恢复脑缺血后学习记忆能力的目的。

健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞大鼠脑组织自由基代谢的影响

目的:探讨健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠脑组织自由基代谢的影响。方法:建立90只MCAO大鼠模型,随机分为正常组、模型组、中药组各30只。于术后6h、12h、1d、3d、7d分别检测丙二醛(malonaldehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。结果:与模型组比较,中药组的MDA含量除了术后1 d外均显著低于模型组(P<0.05);而SOD活性除了术后3 d外,均显著高于模型组(P<0.05);CAT含量在术后3d、7d时与模型组比较有显著性差异(P<0.05);GSH-Px含量除了术后6h外均显著高于模型组(P<0.05)。结论:健脾益智胶囊可促进SOD、GSH-Px、CAT表达增加,减少MDA的产生,抑制脂质过氧化反应,对大脑中动脉栓塞大鼠脑组织损伤有明显保护作用。

健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞大鼠海马Hes1表达的影响

目的:探讨健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠转录因子发状分裂相关增强子1(hairy and enhancer of s Plit,Hes1)表达的影响。方法:建立MCAO大鼠模型,随机分为正常对照组、模型对照组、假手术组、西药组(予尼莫地平)和中药组(予健脾益智胶囊)。采用Western Blotting(蛋白免疫印迹)、RT-PCR(实时荧光定量)方法于灌胃后7 d、14 d、28 d观察各组大鼠海马Hes1的蛋白及mRNA的表达情况。结果:MCAO大鼠造模后Hes1m RNA的含量和Hes1蛋白含量均明显降低,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05);经健脾益智胶囊和尼莫地平干预后,不同时间点中药组和西药组的Hes1蛋白和mRNA含量均明显高于模型对照组(P<0.05),其中28 d时中药组的Hes1蛋白和mRNA含量均高于西药组(P<0.05)。结论:健脾益智胶囊能够提高MCAO大鼠海马Hes1蛋白及基因的表达,提示健脾益智胶囊可能通过调控Hes1在大鼠海马中的含量以促进缺血后神经干细胞的增殖分化。

健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞大鼠脑梗死体积和ATP酶活性的影响

[目的]探讨健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠脑梗死体积和ATP酶活性的影响。[方法]选取135只SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组,采用线栓法建立MCAO大鼠模型,中药组予健脾益智胶囊干预,各组于术后6 h、12 h、1 d、3 d、7 d,采用TTC染色法计算脑梗死体积,采用定磷法测定大鼠脑组织中Ca2+-ATP酶和Na+-K+-ATP酶的活性水平。[结果]中药组梗死体积与模型组比较显著缩小,模型组术后1 d的梗死体积最大(P<0.05);术后6 h、12 h、1 d、3 d,与正常组相比,模型组术后Na+-K+-ATP酶活性显著降低(P<0.05);术后6 h、12 h、7 d,与模型组相比,中药组Na+-K+-ATP酶活性显著增强(P<0.05)。术后6 h、12 h、3 d与正常组相比,模型组Ca2+-ATP酶活性显著降低(P<0.05);术后6 h、3 d、7 d,与模型组相比,中药组Ca2+-ATP酶活性显著增强(P<0.05)。[结论]健脾益智胶囊可缩小大鼠脑梗死体积,可能与增加ATP酶活性有关。

健脾益智方治疗急性缺血性卒中临床观察

目的探讨健脾益智方对急性缺血性卒中患者血清氧自由基水平的影响。方法按照随机数字表法将72例患者随机分为中药组和对照组各36例。2组患者均给予常规治疗,中药组在此基础上加用健脾益智方。2组疗程均为3周。对比分析2组患者疗效、血清氧自由基水平变化。结果中药组患者经3周治疗后总有效率为88.89%,明显高于常规治疗组66.67%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后中药组SOD水平升高,MDA水平降低,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论中药健脾益智方联合西医常规治疗急性缺血性卒中疗效显著,可有利于患者神经功能恢复和氧自由基含量下降,值得推广。

健脾益智法对阿尔茨海默病大鼠海马区脑肠肽NPY mRNA表达水平的影响

目的:研究健脾益智法对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马区脑肠肽神经肽Y(NPY)m RNA表达水平的影响及其作用机制。方法:采用右侧海马注射凝聚态Aβ1-40的方法制作AD大鼠模型,以健脾益智混悬液、吡拉西坦片、0.9%氯化钠溶液分组灌胃给药连续治疗4周,采用半定量RT-PCR法检测比较各组大鼠海马区脑肠肽NPY m RNA的表达水平。结果:行为学评价分析得出,与模型对照组比较,中药组可以缩短Morris水迷宫实验逃避潜伏期,增加跨越平台次数。中药组AD大鼠海马区脑肠肽NPY m RNA表达水平明显高于模型对照组和西药组。结论:健脾益智法可以上调大鼠海马区脑肠肽NPY m RNA的表达水平,且上调作用明显优于西药组,对AD大鼠的学习记忆能力有明显的调节作用,为进一步研究及临床应用中医药防治AD提供实验依据。

健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞大鼠海马神经干细胞增殖及Notch1、Jagged1表达的影响

目的:探讨健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖及Notch1、Jagged1基因与蛋白表达的影响。方法:建立MCAO大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、西药组、中药组。采用免疫组化、Western Blotting、Real-Time RT-PCR法于术后7d、14d、28d观察海马NSCs增殖,Notch1、Jagged1蛋白及mRNA表达情况。结果:术后7d中药组NSCs、Notch1、Jagged1蛋白及mRNA表达显著高于模型组、西药组(P<0.05)。术后28d中药组NSCs表达显著高于模型组、西药组(P<0.05);Notch1蛋白及mRNA低于正常、假手术组,但高于模型组、西药组(P<0.05)。结论:健脾益智胶囊可促进BrdU阳性细胞数量增加,提高Notch1、Jagged1蛋白及基因的表达,提示健脾益智胶囊能可能通过激活Notch通路以促进缺血后神经干细胞增殖分化。

健脾益智胶囊对MCAO大鼠海马NT-3、GAP-43、SYP-P38、PKA表达的影响

目的:探讨健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠海马神经营养因子-3(NT-3)、神经生长相关蛋白-43(GAP-43)、空触囊泡蛋白-p38(SYP-P38)、蛋白激酶A(PKA)表达的影响。方法:建立MCAO大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、西药组、中药组。采用免疫组化法于术后7、14、28d观察海马NT3、GAP-43、SYP-P38、PKA表达情况。结果:术后7d,中药组NT-3、GAP-43、SYP-P38、PKA阳性细胞数多于模型组、西药组(P<0.05);术后14d,中药组GAP-43、PKA阳性细胞数多于模型组、西药组(P<0.05),中药组SYP-P38与模型组、西药组比较明显减少(P<0.05),NT3与西药组无差异;术后28d,中药组NT3、GAP-43、SYP-P38、PKA阳性细胞数多于模型组(P<0.05),NT-3、SYP-P38表达多于西药组(P<0.05),GAP-43、PKA表达与西药组无差异。结论:健脾益智胶囊可促进NT3、GAP-43、SYP-P38、PKA表达增加,提示健脾益智胶囊能可能通过诱导突触再生,特别是新生的轴突形成突触联结以促进缺血后神经功能恢复。

健脾益智胶囊联合丰富康复训练对缺血性脑卒中大鼠梗死灶周围皮质神经生长相关蛋白43表达的影响

目的探讨健脾益智胶囊联合丰富康复训练对缺血性脑卒中大鼠运动功能的影响及可能作用机制。方法 72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、康复组、综合康复组,每组18只。除假手术组外其余各组采用热凝闭大脑中动脉法复制缺血性脑卒中大鼠模型。造模成功后第3天开始康复组给予丰富康复训练治疗,每日1次;综合康复组在康复组的基础上给予健脾益智胶囊混悬液15 ml/(kg·d)灌胃,每日1次。各组大鼠分别于造模成功后7、14、21天进行Longa评分、平衡木行走实验评分、转棒上行走实验评分,并检测脑组织梗死灶周围皮质神经生长相关蛋白43(GAP-43)表达。结果各时间点综合康复组Longa评分及平衡木行走实验评分、转棒上行走实验评分均较模型组降低,大鼠脑组织梗死灶周围皮质GAP-43阳性细胞数较模型组增加,且优于康复组(P<0.05或P<0.01)。结论健脾益智胶囊联合丰富康复训练的综合治疗方法可有效地促进缺血性脑卒中大鼠的神经功能恢复,其机制可能与增加大鼠脑组织梗死灶周围皮质GAP-43表达有关。

健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞大鼠海马BDNF、EGF、bFGF表达的影响

目的:探讨健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响。方法:建立MCAO大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、西药组、中药组。采用免疫组化法于术后7、14、28d观察海马BDNF、EGF、bFGF表达情况。结果:术后7d,中药组BDNF、EGF、bFGF表达显著高于模型组、西药组(P<0.05)。术后14d,中药组BDNF、EGF表达显著高于模型组、西药组(P<0.05);bFGF表达与西药组无差异。术后28d,中药组BDNF、bFGF表达显著高于模型组(P<0.05),与西药组无差异;EGF表达无差异。结论:健脾益智胶囊可促进BDNF、EGF、bFGF阳性细胞数量增加,提示健脾益智胶囊能可能通过诱导BDNF、EGF、bFGF以促进缺血后神经干细胞增殖分化。

健脾益智胶囊法对AD大鼠血清中AchE及海马区GFAP的影响

目的:探讨健脾益智胶囊法治疗阿尔兹海默病(AD)的作用机制。方法:通过β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)定位注射的方法复制AD大鼠模型,分为空白对照组、假手术组、模型组、中药组、西药组5组,采用酶联免疫法(ELISA)法检测造模4周后和给药4周后血清中乙酰胆碱酯酶(AchE)含量,免疫组化法检测给药后大鼠海马区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数。结果:给药4周后,与模型组比较,中药组和西药组AchE明显降低(P<0.01),GFAP明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:健脾益智胶囊能够抑制AchE的活性,间接提高大鼠鼠血清中Ach含量,并通过升高大鼠海马区GFAP阳性表达,促进星形胶质细胞(As)的激活,达到治疗AD的目的。