基于网络药理学方法和动物实验探讨五福健膝方治疗膝骨关节炎的作用机制

目的:探讨五福健膝方治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的作用机制。方法:①网络药理学研究。采用网络药理学方法筛选五福健膝方治疗KOA的靶点。②动物实验。将18只10周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为3组,每组6只。模型组和五福健膝方组小鼠采用内侧半月板失稳术在右后肢构建KOA模型,假手术组小鼠仅切开对应区域皮肤和关节囊后缝合。造模手术后第2天,五福健膝方组小鼠以五福健膝方汤剂(生药浓度1.1 g·mL^(-1))灌胃,每次0.6 mL,每天1次,连续灌胃8周;模型组和假手术组小鼠以等量生理盐水灌胃。药物干预结束后,收集小鼠右后肢膝关节,分别进行股骨远端Micro-CT扫描、组织病理学观察(阿尔新蓝-苏木素/橙黄G染色)及免疫组织化学染色。免疫组织化学染色主要针对Ⅱ型胶原蛋白与网络药理学研究确定的核心靶点蛋白,测量Ⅱ型胶原蛋白表达阳性区域的厚度(视为软骨厚度),同时计算核心靶点蛋白阳性细胞百分比。结果:①网络药理学研究结果。通过网络药理学研究确定的五福健膝方治疗KOA的关键靶点基因15个,其中TP53为核心靶点基因,其对应的蛋白为P53蛋白。②动物实验结果。股骨远端Micro-CT检查结果显示,模型组较假手术组骨表面积骨体积比值降低(P=0.028)、骨体积分数升高(P=0.003),五福健膝方组较模型组骨表面积骨体积比值升高(P=0.004)、骨体积分数降低(P=0.048)。膝关节软骨组织阿尔新蓝-苏木素/橙黄G染色显示,模型组小鼠软骨缺失明显,五福健膝方组小鼠软骨丢失较模型组明显改善。免疫组织化学染色结果显示,模型组小鼠膝关节软骨厚度较假手术组减小(P=0.001),五福健膝方组小鼠膝关节软骨厚度较模型组增加(P=0.048);模型组小鼠膝关节软骨组织中P53阳性细胞百分比较假手术组增加(P=0.000),五福健膝方组小鼠膝关节软骨组织中P53阳性细胞百分比较模型组减少(P=0.000)。结论:五福健膝方能够有效延缓KOA模型小鼠的软骨退变,其机制可能与其抑制P53蛋白表达有关。

壮骨健膝方对巨噬细胞极化的影响及作用机制研究

目的:探讨壮骨健膝方对巨噬细胞经典活化型(M1)/替代活化型(M2)极化的影响及作用机制。方法:佛波酯诱导人单核白血病细胞分化为非活化巨噬细胞(M0),脂多糖刺激M0复制M1极化模型,将细胞分为空白组(M0+空白血清)、模型组(M1+空白血清)、抑制剂组(M1+NF-κB抑制剂+空白血清)、壮骨健膝方组(M1+含药血清)。干预24 h后,检测各组M1标志分子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1),M2标志分子分化簇206、163、209(CD206、163、209)mRNA表达,炎症介质白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α),抗炎因子IL-4、IL-10水平及mRNA表达,核因子κB(NF-κB)信号通路中节点蛋白核内NF-κBp65、NF-κBp50及NF-κB抑制蛋白α(IκBα)表达。结果:模型组M1标志分子、炎症介质及NF-κBp65、NF-κBp50蛋白均高于空白组(P<0.05),CD206、IL-4 mRNA及IκBα蛋白,IL-4水平均低于空白组(P<0.05);抑制剂及壮骨健膝方组M1标志分子、炎症介质及NF-κBp65、NF-κBp50蛋白均低于模型组(P<0.05),M2标志分子、抗炎因子及IκBα蛋白均高于模型组(P<0.05);壮骨健膝方组MHC-Ⅱ、MCP-1 mRNA及炎症介质均低于抑制剂组(P<0.05),CD206、CD209、IL-10 mRNA及IL-4、IL-10水平均高于抑制剂组(P<0.05)。结论:壮骨健膝方可抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1极化,促进M2极化,其机制可能与降低细胞中NF-κB信号通路活性有关。

股骨远端截骨术联合强筋健膝方治疗膝关节外侧单间室骨性关节炎的临床观察

目的:观察股骨远端截骨术联合自拟方强筋健膝方治疗膝关节外侧单间室骨性关节炎的临床疗效,并探讨其作用机制。方法:选取2020年10月—2022年12月赣州市中医院24例符合纳入标准的膝关节单间室骨性关节炎患者随机分为对照组和观察组,各12例。对照组选用股骨远端截骨术治疗,观察组在对照组基础上加用强筋健膝方。比较2组治疗前后患者疼痛VAS评分与膝关节HSS评分,并通过酶联免疫吸附试验检测2组患者血清中肿瘤细胞坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)表达水平。结果:术后2组患者疼痛VAS评分较术前均显著降低(P<0.05),膝关节HSS评分较术前均显著升高(P<0.05),血清中IL-6、TNF-α均明显降低,观察组上述指标改善均优于对照组(P<0.05)。结论:股骨远端截骨术联合强筋健膝方可明显改善膝关节外侧单间室骨性关节炎的症状与外翻畸形,提高疗效,其作用机制可能与抑制TNF-α、IL-6表达相关。

内服钱氏健膝方联合中药离子导入治疗早期肝肾亏虚型膝关节骨性关节炎的疗效观察

目的观察内服钱氏健膝方联合中药离子导入治疗早期膝关节骨性关节炎(肝肾亏虚型)的临床效果。方法选取浙江中医药大学附属金华中医院2021年1月至2023年12月骨科门诊收治的59例(59膝)早期膝关节骨性关节炎(肝肾亏虚型)患者为研究对象,采用内服钱氏健膝方联合外用中药离子导入治疗10 d,观察治疗前后的视觉模拟评分法(VAS)评分、膝关节功能Lysholm评分、中医症候评分。结果总有效率为94.9%,治疗前后疼痛VAS评分均较治疗前降低,Lysholm评分均较治疗前升高,中医症状明显好转(P<0.05)。结论内服钱氏健膝方联合中药离子导入治疗早期膝关节骨性关节炎(肝肾亏虚型),疗效明显,可减轻患者疼痛,改善关节功能。

基于LXRs/NF-B通路探讨壮骨健膝方对兔膝骨关节炎滑膜组织炎症的影响

目目的的:从兔滑膜组织的炎症调控及LXRs/NF-κB通路关键节点蛋白的表达情况探讨壮骨健膝方对兔膝骨关节炎(KOA)滑膜组织炎症的干预效应及机制。方法:制备兔空白血清及含药血清以备滑膜组织干预使用。将22只兔按照随机数字表法分为造模组16只和空白组6只,造模组予右后肢膝关节腔注射木瓜蛋白酶制备KOA模型,模型鉴定成功后,无菌操作下切取兔右后肢膝关节内滑膜组织,将其剪碎成大小约1~2 mm3小块,收集60小块,随机分为4组,即模型组、壮骨健膝方组、LXRα抑制剂组和N-CoR抑制剂组,每组15个组织块,每孔3块,每组5孔,置于6孔板中培养,分别给予10%空白血清、10%含药血清、10%含药血清+5CPPSS-50、10%含药血清+ML-792干预;空白组滑膜同法制备,给予10%空白血清培养,5孔。7 d后收集滑膜组织,各组取2孔滑膜组织块行HE染色,剩余滑膜组织行Western blot和ELISA检测相关指标。结果果:(1)在形态学方面,与空白组比较,模型组HE染色可见滑膜内衬层细胞增生且排列紊乱明显、大量炎性细胞浸润及纤维组织增生等改变,形态学评分显著升高(P<0.05);与模型组比较,壮骨健膝方组可见滑膜内衬层细胞轻度增生排列紊乱、稀疏散在炎性细胞浸润及少量纤维组织增生等改变,形态学评分显著降低(P<0.05);分别与LXRα抑制剂组及N-CoR抑制剂组比较,壮骨健膝方组病理改变形态学评分显著降低(P<0.05)。(2)在炎症相关指标方面,干预后与空白组比较,模型组IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量显著升高(P<0.05);与模型组比较,LXRα抑制剂组、N-CoR抑制剂组、壮骨健膝方组上述指标含量均显著降低(P<0.05);分别与LXRα抑制剂组及N-CoR抑制剂组比较,壮骨健膝方组上述指标含量均显著降低(P<0.05);壮骨健膝方组干预前后比较,IL-1β、TNF-α含量显著降低(P<0.05)。(3)在通路相关蛋白表达方面,与空白组比较,模型组LXRα、N-CoR蛋白表达显著下降(P<0.05),P50、P65蛋白表达显著上升(P<0.05);与模型组比较,LXRα抑制剂组LXRα及N-CoR蛋白、N-CoR抑制剂组N-CoR蛋白无显著降低(P>0.05),P50、P65蛋白表达显著下降(P<0.05),壮骨健膝方组LXRα、N-CoR蛋白表达显著升高(P<0.05),P50、P65蛋白显著降低(P<0.05);分别与LXRα抑制剂组及N-CoR抑制剂组比较,壮骨健膝方组LXRα、N-CoR蛋白表达显著升高(P<0.05),P50、P65蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:壮骨健膝方可改善滑膜内衬层细胞增生及排列紊乱、炎性细胞浸润及纤维组织增生等病理表现,减少组织中炎症相关指标的含量,从而减轻兔KOA滑膜组织炎症反应,这可能与其上调滑膜组织中滑膜细胞LXRs/NF-κB通路上LXRα、N-CoR蛋白表达,从而下调P50、P65蛋白,降低通路的活性,进而减少IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13等下游产物有关。

运用网络药理学和实验验证探讨补肝健膝方治疗膝骨关节炎的作用机制

目的:运用网络药理学与实验验证方法研究补肝健膝方治疗膝骨关节炎的潜在作用机制。方法:通过多个数据库筛选补肝健膝方的活性化合物及其治疗膝骨关节炎的相关靶点;检索GeneCards数据库、OMIM数据库、TTD数据库、CTD数据库获取膝骨关节炎的靶点;采用交集法进而获得补肝健膝方与膝骨关节炎的相关靶点;利用Cytoscape软件构建活性成分-交集靶点调控网络,并对交集靶点进行网络拓扑分析;利用Metascape数据库对交集靶点进行GO和KEGG富集分析;制备膝骨关节炎新西兰兔模型,观察补肝健膝方干预效果,检测核心靶点在关节液中的表达。结果:补肝健膝方中筛选活性成分靶点593个,膝骨关节炎靶点824个,药物-疾病共同靶点138个,关键靶点涉及TNF-α、IL1B、MMP9、TP53、VEGFA、ALB、AKT1、EGF等。GO功能富集分析GO条目6 076个,主要涉及细胞迁移的正调控、防御反应、对脂多糖的反应、炎症反应、细胞黏附的调节等;KEGG通路富集分析得到251条信号通路,包括AGE-RAGE信号通路、JAK-Stat信号通路、NF-κB信号通路、TGF-β信号通路等。动物实验结果显示,与空白组比较,模型组新西兰兔关节液中TNF-α、IL-1β含量显著升高(P<0.05);与模型组比较,独活寄生汤组和补肝健膝方组TNF-α、IL-1β表达水平均有不同程度下降(P<0.05)。结论:补肝健膝方可能通过多靶点、多通路调节细胞生存周期、抗氧化、抗炎等发挥治疗膝骨关节炎的作用。

壮骨健膝方治疗肝肾亏虚、风寒湿痹型膝骨关节炎76例临床观察

目的观察壮骨健膝方治疗肝肾亏虚、风寒湿痹型膝骨关节炎的临床疗效。方法将152例膝骨关节炎患者采用随机数字表分为2组,治疗组76例给予壮骨健膝方,对照组76例给予美洛昔康片;3周后,观察2组临床疗效及治疗前后各症状评分变化情况。结果治疗组总有效率为94.7%,对照组总有效率为84.2%;治疗组治疗后休息痛、运动痛、压痛症状评分与对照组无显著差异,而肿胀、僵硬及行走能力评分显著低于对照组(P<0.05);胃肠道的不良反应发生率治疗组明显低于对照组。结论壮骨健膝方能有效改善肝肾亏虚、风寒湿痹阻证型膝骨关节炎患者疼痛、肿胀及运动功能障碍等症状,且胃肠道不良反应小,值得临床推广应用。

蠲痹健膝方联合关节镜手术对膝骨关节炎的疗效

目的:探讨蠲痹健膝方联合关节镜手术对膝骨关节炎的疗效。方法:选择膝骨关节炎病人80例作为研究对象,按照随机数字表法分为观察组和对照组,各40例。2组病人均接受关节镜手术治疗,对照组病人术后单纯接受功能锻炼,观察组病人术后给予蠲痹健膝方结合功能锻炼。采用Lysholm膝关节评分评价病人膝关节功能,采用疼痛视觉模拟评分评价病人疼痛程度,比较2组病人疗效,并比较治疗前后2组病人白细胞介素(IL)-1和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平变化。结果:治疗后2组病人Lysholm评分和VAS评分均较治疗前明显改善(P<0.01),且观察组均明显优于对照组(P<0.01)。2组病人治疗后IL-1和TNF-α水平均较治疗前明显下降(P<0.01),且观察组病人IL-1、TNF-α水平均明显低于对照组(P<0.01)。观察组治疗总有效率为95.00%(38/40),对照组为72.50%(29/40);观察组疗效优于对照组(P<0.05)。结论:蠲痹健膝方联合关节镜手术治疗膝骨关节炎疗效较好,并能有效降低炎症因子水平,值得临床推广。

壮骨健膝方含药血清对经IL-1β诱导的大鼠膝关节退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路抑制因子蛋白表达的影响

目的观察壮骨健膝方含药血清对大鼠膝关节退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路抑制因子Dkk-1、sFRP-3蛋白表达的影响,揭示该方保护膝关节软骨细胞的可能分子机制。方法取清洁级2周龄SD大鼠膝关节软骨细胞,采用含10 ng/mL IL-1β的10%FBS/DMEM培养,干预24 h后制备退变软骨细胞模型,模型鉴定成功后随机分为空白血清组和含药血清组,分别采用含10%大鼠空白血清、10%壮骨健膝方大鼠含药血清的DMEM进行干预,干预24、36、48、72 h时分别采用Western blot法检测软骨细胞Dkk-1、sFRP-3蛋白的表达水平。结果空白血清组DKK-1、sFRP-3蛋白表达水平随着干预时间延长而逐渐下降,干预48 h和78 h均显著低于24 h(P均<0.05);含药血清组DKK-1、sFRP-3蛋白表达水平随着干预时间延长而逐渐增强,其中干预36 h高于24 h(P<0.05),干预48 h和72 h显著高于24 h(P均<0.01),干预48 h和72 h高于36 h(P均<0.05);与空白血清组同一时间点比较,含药血清组DKK-1、sFRP-3蛋白表达水平在干预36 h、48 h和72 h时均显著增高(P<0.05或0.01)。结论壮骨健膝方含药血清可能通过提高Dkk-1、sFRP-3蛋白的表达水平,抑制Wnt/β-catenin信号通路激活,从而对经IL-1β诱导退变的大鼠膝关节软骨细胞起保护作用,其效果在一个细胞培养换液周期内随培养时间延长而增强。

健膝方结合物理疗法对类风湿性关节炎的临床疗效及不良反应的影响分析

目的研究对类风湿性关节炎的患者而言在治疗当中采用健膝方结合物理疗法的效果及不良反应观察分析。方法将在我2014年5月~2017年5月时期,收治150例首次诊断为类风湿性关节炎,接受常规类风湿西药治疗患者,分为对照组70例与实验组80例。实验组予健膝方结合物理疗法,两组均行15天治疗。将两组的临床治疗有效率、晨僵持续时间、关节压痛评分、生活能力评分、满意度评分及不良反应发生率进行对比分析。结果疗程结束后实验组总有效率95. 00%,对照组82. 86%。实验组晨僵时间、关节压痛评分明显低于对照组,而生活能力与满意度评分明显高于对照组,对照组不良反应率28. 57%。实验组不良反应率5%。差异具有统计学意义(P <0. 05)。结论健膝方结合物理疗法可提高临床疗效、满意程度,降低不良反应发生,效果理想。

壮骨健膝方对兔膝骨关节炎滑膜炎症肝X受体/核因子κB通路的影响

目的:基于肝X受体/核因子κB信号通路观察壮骨健膝方对兔膝骨关节炎滑膜炎症模型的影响,探讨其对滑膜炎症的作用及机制。方法:将24只新西兰大白兔随机分为正常组6只和造模组18只。造模组行膝关节腔内注射木瓜蛋白酶建立兔膝骨关节炎滑膜炎症模型。造模成功后将模型兔随机分为模型组、扶他林组和壮骨健膝方组,每组6只。扶他林组和壮骨健膝方组分别给予扶他林混悬液、壮骨健膝方药液灌胃,模型组和正常组给予等量生理盐水灌胃。观察干预前后各组兔膝关节皮温、周径、Lequesne MG评分;膝关节液中IL-1β、TNF-α、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、MMP-13含量;滑膜组织评分;滑膜组织中LXRα、N-CoR、P50、P65 mRNA的表达情况。结果:与正常组比较,模型组兔一般情况差,膝关节皮温、周径、Lequesne MG评分、膝关节液中IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量、滑膜组织评分、P50和P65 mRNA表达均升高(均P<0.05),滑膜组织中LXRα和N-CoR mRNA表达降低(均P<0.05)。与模型组比较,壮骨健膝方组及扶他林组膝关节皮温、周径、Lequesne MG评分、膝关节液中IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量、滑膜组织评分、P50和P65 mRNA表达均较低(均P<0.05),壮骨健膝方组LXRα与N-CoR mRNA表达升高(均P<0.05),扶他林组LXRα与N-CoR mRNA表达差异无统计学意义(均P>0.05)。与扶他林组比较,壮骨健膝方组LXRα、N-CoR mRNA表达升高(均P<0.05),关节周径较小(P<0.05),其余指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:壮骨健膝方可能通过调控肝X受体/核因子κB信号通路的转导,减少下游炎症介质分泌,达到抑制膝骨关节炎滑膜炎症反应的作用。

基于血清药物化学、网络药理学及细胞实验探究壮骨健膝方治疗膝骨关节炎的药效物质

目的探究并验证壮骨健膝方(骨碎补、杜仲、秦艽、独活等组成)治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的药效物质。方法基于壮骨健膝方药物成分自建数据库,采用超高效液相串联三重四级杆质谱技术(ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)定性定量检测壮骨健膝方入血成分;通过TCMSP、SwissTargetPrediction、SEA和Batman-TCM数据库筛选入血成分靶点,以“knee osteoarthritis”为关键词在GeneCards、OMIM、Drugbank数据库搜索膝骨关节炎相关靶点,将二者取交集后,通过Cytoscape软件构建入血成分-膝骨关节炎作用靶点网络,STRING平台构建蛋白互作网络,寻找核心成分与靶点;通过DAVID数据库对靶点进行基因本体(GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;通过细胞实验,以核心成分在血清中的浓度干预炎症滑膜巨噬细胞、退变软骨细胞模型,ELISA法检测细胞上清中膝骨关节炎核心靶点指标的含量。结果在壮骨健膝方含药血清中定性定量检测出6种原型入血成分,各成分及浓度分别为龙胆苦苷(1002.02±51.60)ng·mL^(-1),佛手柑内酯(448.50±13.35)ng·mL^(-1),阿魏酸(225.60±9.61)ng·mL^(-1),獐牙菜苦苷(68.49±4.62)ng·mL^(-1),柚皮苷(2.34±0.09)ng·mL^(-1),柚皮素(1.69±0.07)ng·mL^(-1);6种入血成分靶点406个,膝骨关节炎疾病靶点2492个,交集靶点155个,度值排前3位的核心成分分别是阿魏酸、柚皮素、龙胆苦苷,核心靶点包括肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)、丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)等;功能富集分析表明,壮骨健膝方通过多途径发挥其在膝骨关节炎中的药理作用,主要涉及炎症反应、凋亡过程、脂多糖的反应等;细胞实验结果显示,与模型组比较,阿魏酸组、柚皮素组、龙胆苦苷组均可明显抑制炎症滑膜巨噬细胞上清中IL-1β、TNF-α表达(P<0.05);三者均可明显抑制退变软骨细胞上清中MMP-3、MMP-13表达(P<0.05)。结论通过血清药物化学、网络药理学及细胞实验三方面的相互印证,揭示了阿魏酸、柚皮素、龙胆苦苷可能是壮骨健膝方治疗膝骨关节炎的核心药效物质,为该方深入开发和应用提供了客观依据。

补肝健膝方对膝骨关节炎模型兔COMP、CTX-Ⅱ及炎性指标的影响

目的通过研究补肝健膝方对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型兔血清、关节腔积液中白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平以及血清中软骨寡聚基质蛋白(cartilage oligomeric matrix protein,COMP)和Ⅱ型胶原C端肽(C-telopeptide of typeⅡcollagen,CTX-Ⅱ)含量的影响,进一步揭示补肝健膝方对KOA的作用机制。方法采用木瓜蛋白酶关节注射法制作兔KOA模型。随机分为空白对照组、模型对照组、独活寄生汤组及补肝健膝方低、中、高剂量组,每组5只。造模4周后,空白对照组和模型对照组每日灌胃生理盐水1次;独活寄生汤组每日以独活寄生汤煎剂2.895 g/(kg·d)灌胃1次;补肝健膝方低、中、高剂量组每日以补肝健膝方煎液[1.962、3.924、7.848 g/(kg·d)]灌胃1次。治疗4周后,采用HE染色观察膝关节软骨的病理改变,Pelletier评分评估软骨损伤情况,ELISA检测血清、关节腔积液IL-1、TNF-α水平以及血清COMP、CTX-Ⅱ含量。结果与空白对照组相比,模型对照组软骨关节表面欠光滑,软骨局部可见黏液样变,软骨及深层细胞数目显著降低;Pelletier评分显著升高(P<0.05);血清及关节腔积液中的IL-1、TNF-α含量及血清中COMP、CTX-Ⅱ含量均升高(P<0.05)。与模型对照组相比,独活寄生汤组、补肝健膝方各剂量组软骨表面层次分布更为清晰,潮线结构完整;Pelletier评分降低(P<0.05);血清、关节腔积液IL-1、TNF-α水平以及血清中COMP和CTX-Ⅱ含量均降低(P<0.05)。与独活寄生汤组比较,补肝健膝方各剂量组软骨表面层次分布更为清晰,潮线结构更为完整;Pelletier评分升高(P<0.05);血清及关节腔积液IL-1、TNF-α及血清中COMP、CTX-Ⅱ含量降低(P<0.05)。结论补肝健膝方可有效改善KOA兔骨微结构、调节其膝关节滑膜细胞活性,可能与抑制血清、关节腔积液IL-1、TNF-ɑ水平以及血清中COMP和CTX-Ⅱ含量有关。

自拟补肾健膝方治疗肾虚寒凝型膝骨性关节炎50例临床观察

目的观察自拟补肾健膝方在肾虚寒凝型膝骨性关节炎非手术治疗中的疗效。方法采用自拟补肾健膝方(川乌、草乌、麻黄、桂枝、黄芪、杜仲、桑寄生、牛膝、白芍、独活、续断、三七、地龙、熟地、山药、狗脊、苎麻根、甘草)治疗肾虚寒凝型膝骨性关节炎症50例,并随机设对照组观察。结果总有效率治疗组90. 0%,对照组74. 5%,两组比较,疗效均较满意,但治疗组优于对照组(P <0. 05)。结论自拟补肾健膝方具有补肾益髓、温经散寒、祛风除湿、活血化瘀、强筋键骨的功效,对肾虚寒凝型膝骨性关节炎有显著疗效。

壮骨健膝方含药血清对脂多糖诱导兔膝滑膜巨噬细胞炎症反应的效应浓度研究

目的探讨壮骨健膝方含药血清对脂多糖(LPS)诱导兔膝滑膜巨噬细胞炎症反应的效应浓度。方法将12只新西兰大白兔随机分为壮骨健膝方组6只和空白组6只,壮骨健膝方组予壮骨健膝方药液灌胃,空白组予生理盐水灌胃,持续3 d。于末次给药后1 h进行腹腔注射麻醉,行腹主动脉采血,离心后获得壮骨健膝方兔含药血清和空白血清。分别制备5%、10%、15%、20%、25%壮骨健膝方兔含药血清完全培养液(含药完培)与兔空白血清完全培养液(空白完培)备用。(1)筛选含药血清干预浓度实验:体外培养兔膝滑膜巨噬细胞,随机分为对照组、空白血清组及含药血清组,分别采用普通完全培养基、空白完培(5%、10%、15%、20%、25%)和含药完培(5%、10%、15%、20%、25%)培养24 h,采用CCK8法检测各组细胞活性。(2)筛选LPS诱导致炎时间实验:将兔膝滑膜巨噬细胞随机分为空白组和LPS组,空白组加入普通完培,LPS组加入含1.0μg/mL的LPS培养液,分别培养12、24、36、48 h后,收集各组细胞上清液,ELISA法检测IL-1β、TNF-α含量。(3)采用含1μg/mL的LPS培养液刺激兔膝滑膜巨噬细胞12 h诱导其炎症反应,诱导成功后随机分为模型组和5%、10%、15%含药血清组,另取正常兔膝滑膜巨噬细胞作为空白组。模型组采用10%兔空白完培干预,5%、10%、15%含药血清组分别采用5%、10%、15%壮骨健膝方兔含药完培干预,空白组采用10%兔空白完培干预,均干预24 h。ELISA法检测各组细胞上清中白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、MMP-13的含量。结果(1)筛选含药血清干预浓度实验结果显示,5%、10%、15%含药血清组细胞活性与同浓度下空白血清组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)筛选LPS诱导致炎时间实验结果显示,LPS组内各时间点比较,刺激12 h后滑膜巨噬细胞上清液中IL-1β、TNF-α的含量最高(P<0.05)。(3)与空白组比较,模型组IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,10%、15%含药血清组IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量均明显降低(P<0.05)。结论10%、15%壮骨健膝方兔含药血清为干预LPS诱导兔膝滑膜巨噬细胞炎症反应的效应浓度,以10%浓度更为经济适宜。

补肝健膝方对膝骨关节炎模型兔软骨Wnt信号通路的影响

目的:观察补肝健膝方对膝骨关节炎模型兔软骨Wnt信号通路的影响。方法:将36只新西兰兔随机分为正常组、模型组、阳性药物组、补肝健膝方低剂量组、补肝健膝方中剂量组、补肝健膝方高剂量组,每组各6只。采用木瓜蛋白酶关节腔注射方法制备兔膝骨关节炎模型,造模成功后,补肝健膝方低、中、高剂量组兔予相应剂量补肝健膝方灌胃,阳性药物组兔予独活寄生汤灌胃。正常组、模型组兔予等量生理盐水灌胃。给药4周后,采用ELISA法检测关节液白细胞介素(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平,取关节软骨及滑膜进行大体观察和光镜下显微形态观察,采用Western blotting法检测软骨组织Wnt3a、β-catenin、MMP-13蛋白相对表达量。结果:HE染色和大体观察显示补肝健膝方能减轻软骨退行性变,对软骨具有保护作用。模型组兔关节液中IL-1、TNF-α水平高于正常组(P<0.01),阳性药物组、补肝健膝方低剂量组、补肝健膝方中剂量组、补肝健膝方高剂量组兔关节液IL-1、TNF-α水平均低于模型组(P<0.01)。模型组兔关节软骨Wnt3a、β-catenin、MMP-13蛋白相对表达量高于正常组(P<0.01),补肝健膝方高剂量组兔关节软骨Wnt3a蛋白相对表达量低于模型组(P<0.05)。阳性药物组、补肝健膝方低剂量组、补肝健膝方中剂量组、补肝健膝方高剂量组兔关节软骨β-catenin蛋白相对表达量与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。阳性药物组、补肝健膝方中剂量组、补肝健膝方高剂量组兔关节软骨MMP-13蛋白相对表达量均低于模型组(P<0.05)。结论:补肝健膝方能抑制兔膝骨关节炎模型软骨Wnt信号通路,从而减轻炎症反应,维持细胞外基质的完整性,改善膝骨关节炎模型中的软骨形态。

健膝方结合物理疗法对类风湿性关节炎的临床疗效及不良反应的影响

目的:探讨中西医结合治疗方法对类风湿性关节炎的长期临床疗效和不良反应的影响,为临床类风湿性关节炎的治疗的不良反应控制提供基础依据。方法:选择我院就诊治疗的类风湿性关节炎患者90例,随机分为两组,对照组接受常规西药治疗,治疗组在常规西药治疗的基础给与本院自主研发的中药健膝方和物理疗法结合治疗,持续治疗2个月,对两组患者晨僵时间、血沉和类风湿因子进行比较,之后比较两组患者治疗前与治疗后治疗效果和不良反应反生情况。结果:两组患者治疗后晨僵时间均有所缩短,血沉和类风湿因子水平均有所降低。治疗组患者治疗后晨僵时间较治疗前及对照组治疗后相比大为缩短,差异具有统计学意义。治疗前后治疗组患者血沉比较及治疗组与对照组治疗后血沉比较有明显的统计学差异,治疗组患者治疗后类风湿因子水平较治疗前明显降低,较对照组也有明显降低,组间比较具有统计学差异。治疗组患者治疗后总有效率为91.1%。对照组患者总有效率64.4%,与治疗组相比差异具有统计学意义。对照组不良反应发生率为20%,治疗组不良反应发生率仅为4.4%。结论:在常规西医治疗的基础上,采用微波照射加本院自主研制的健膝方治疗可有效缩短类风湿性关节炎患者的晨僵时间,降低血沉和类风湿因子水平,提高临床治疗效率,降低不良反应发生情况。

自拟二仙健膝方治疗膝骨关节炎经验举隅

目的:总结导师朴勇洙教授运用二仙健膝方治疗成人斯蒂尔病的经验。方法:分析朴勇洙教授对膝骨关节炎病因病机的认识,剖析二仙健膝方的组成和功效,总结在临床实践中的使用依据,并附临床医案验证。结果:朴勇洙教授认为本病的基本病机为肝肾亏损,营卫不和。本病的形成多由于患者正虚于内,肝肾亏损,精血不能濡养筋骨,卫气不固,又容易导致风寒湿侵袭,从而引起邪气痹阻经络,气血运行不畅发为痹证。肝肾的充足、营卫的和调是筋骨强盛、关节滑利的重要因素,所以在治疗上应补益肝肾,调和营卫以达到阴阳平衡的作用。结论:朴勇洙教授运用二仙健膝方治疗膝关节炎疗效显著,其经验值得临床学习和传承,且对于疾病无论新久、寒热均可以运用。

三仙健膝方治疗膝骨关节炎的临床研究

膝骨关节炎作为中老年人常见、多发的一类疾病,治疗方法多样,各有优缺点。重庆市沙坪坝区名中医杨昌国主任继承前辈经验,总结自身得失,结合现代医学研究,创制内服外敷三仙健膝方的方法治疗该病,获得满意疗效。

健膝方结合物理疗法治疗类风湿关节炎的临床观察

目的:观察健膝方结合物理疗法治疗类风湿关节炎的临床疗效。方法:选择150例类风湿关节炎患者,随机分为观察组和对照组,每组75例。对照组给予常规西药及物理疗法治疗,观察组在对照组治疗基础上加用健膝方治疗。观察两组临床疗效、不良反应发生率及中医症状评分、晨僵时间、症状缓解时间。结果:观察组临床总有效率为96.00%,高于对照组的84.00%(P<0.05)。观察组不良反应发生率为4.00%,低于对照组的13.33%(P<0.05)。治疗后,两组中医症状评分、晨僵时间均较治疗前降低(P<0.05),且观察组中医症状评分、晨僵时间、症状缓解时间均低于对照组(P<0.05)。结论:对类风湿关节炎患者给予健膝方联合物理疗法治疗的临床疗效显著,安全性较高。