短期抗生素暴露对氧化偶氮甲烷诱导小鼠结直肠癌前病变相关指征变化的影响

目的探讨短期抗生素暴露对氧化偶氮甲烷(Azoxymethane,AOM)诱导小鼠结直肠癌前病变相关指征变化的影响。方法40只3~4周龄SPF级雄性ICR小鼠随机分为4组(10只/组):对照组(Control组)、AOM干预组(AOM组)、抗生素+AOM干预组(Antibiotics+Azoxymethane,AbxAOM组)以及抗生素组(Antibiotics,Abx组)。AbxAOM组和Abx组灌胃抗生素溶液(氨苄西林100 mg/kg+新霉素100 mg/kg+甲硝唑100 mg/kg+万古霉素50 mg/kg+两性霉素B 1 mg/kg),Control组和AOM组灌胃等体积纯水,2次/天,连续14 d。灌胃结束后,AOM组和AbxAOM组腹腔注射AOM溶液(10 mg/kg·bw),Control组和Abx组腹腔注射相应体积的无菌0.9%NaCl溶液,1次/周,连续4周。HE染色观察小鼠结直肠组织病理学改变;RT-qPCR法检测结直肠组织中VCAM-1、ICAM-1、Ki-67、IL-1β、IL-6、TNF-α、VEGF-A、TLR4、MyD88、NF-κB p65及COX-2的mRNA表达水平;免疫组化法观察结直肠组织中Ki-67、NF-κB p65蛋白表达。结果与Control组相比,AOM组小鼠结肠病理组织学评分显著升高(P<0.01),IL-6、TLR4、NF-κB p65及COX-2的mRNA表达显著升高(P<0.05)。与AOM组比较,AbxAOM组异常隐窝灶(Aberrant crypt foci,ACF)数量增多(P<0.05),ICAM-1、IL-1β、NF-κB p65的mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论AOM处理可导致结肠病理损伤及ACF形成,可能与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活有关。抗生素暴露在短期内有加剧AOM所致结肠损伤和TLR4/MyD88/NF-κB信号通路进一步激活的趋势,但此变化趋势还需在长期实验基础上进一步探讨。

芥菜籽对氧化偶氮甲烷诱导小鼠结直肠癌的影响

背景与目的:结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,在我国发病率和死亡率呈不断上升趋势。文献报道芥菜籽具有抗肿瘤的活性,本研究旨在观察在氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)诱发昆明种小鼠发生结直肠癌的过程中,通过芥菜籽(mustard seed,MS)进行饮食干预能否预防肿瘤的发生。方法:选择6周龄昆明种雌性小鼠,随机分为AOM组、AOM+5%MS干预组、AOM+10%MS干预组和正常对照组。小鼠皮下注射AOM(10mg/kg体质量),每周1次,连续3周。32周时颈椎脱臼处死小鼠,分离结直肠,用预冷的0.9%NaCl溶液冲洗肠内容物。观察记录各组小鼠有无肿瘤发生及发生数目、大小和位置,计算肿瘤发生率。结果:正常对照组小鼠未发现肿瘤,AOM模型组小鼠结直肠肿瘤发生率为86.7%,5%MS干预组及10%MS干预组小鼠结直肠肿瘤发生率分别为60.0%和41.7%,与模型组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。AOM模型组小鼠荷瘤数为(2.2±1.2)个,而5%MS干预组和10%MS干预组小鼠荷瘤数分别为(1.1±1.1)个和(0.7±0.9)个,与AOM模型组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:通过芥菜籽饮食干预能够抑制AOM诱导的小鼠结直肠癌的发生发展,可进一步用于结直肠癌防治的研究。

硒对氧化偶氮甲烷所致大鼠结肠癌形成过程中垂体远侧部促肾上腺皮质激素阳性细胞的影响

目的观察硒对致癌剂氧化偶氮甲烷(AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,垂体远侧部ACTH阳性细胞的影响。方法随机将20只3周龄SPF级断乳雄性SD大鼠分为正常对照组、实验对照组、致癌剂前补硒组、致癌剂后补硒组。用AOM(15mg/kg)每周腹腔注射,连续2周,诱导大鼠结肠癌形成。亚硒酸钠(Na2SeO3)水溶液(4mg/L)分别在AOM前、后干预,并持续至实验结束。各组均于34周后取大鼠垂体,用免疫组织化学SP法,观察垂体远侧部ACTH阳性细胞的形态结构及免疫组织化学反应强度,并进行图像分析。结果亚甲基蓝染色光镜下观察,可见AOM腹腔注射的大鼠结肠黏膜出现异常隐窝(AC)和异常隐窝灶(ACF)。免疫组织化学法显示,实验对照组大鼠垂体远侧部ACTH阳性细胞与正常对照组比较,阳性反应显著性增强(P<0.01);硒干预的各组与实验对照组相比,ACTH阳性细胞的阳性反应进一步增强(P<0.01)。结论硒可增强AOM所致大鼠结肠癌形成过程中垂体远侧部ACTH阳性细胞的功能。

氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠模型在炎症性肠病和癌形成物质的生物测定运用

生物测定(bioassay)是一种利用生物体检测物质作用的科学实验,借助动物模型是生物测定的重要手段之一。氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠模型是基于致癌剂和致炎剂联合发展而来的鼠类模型,模拟了炎症性肠病向直结肠癌发展的全过程。利用氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠探索防治或促进炎症致癌相关物质的生物检测研究很多,本文就该模型及其在生物测定运用作一综述。

硒对氧化偶氮甲烷所致结肠癌模型大鼠睾丸精原细胞P16蛋白表达的影响

目的观察硒对氧化偶氮甲烷(AOM)所致结肠癌大鼠睾丸精原细胞P16蛋白表达的影响。方法随机将20只3周龄断乳雄性SD大鼠分为:正常对照组、实验对照组、AOM致癌前喂食亚硒酸钠水组、AOM致癌后喂食亚硒酸钠水组。每周腹腔注射AOM 15 mg/kg,持续2周,造成大鼠结肠癌模型。用4 mg/L Na2SeO3水溶液分别在AOM致癌前、后开始进行干预,并持续至实验结果。各组均于34周后取两侧睾丸,用免疫组织化学方法,观察大鼠睾丸精原细胞内P16蛋白的表达,并进行图像分析。结果正常组大鼠的睾丸内未见精原细胞表达P16蛋白,而实验对照组、硒干预AOM致癌组(AOM致癌前、后喂食亚硒酸钠水)的精原细胞P16均呈阳性表达,阳性产物呈深棕色,定位于细胞核中,细胞质内仅有少量表达。实验对照组、AOM致癌前、后喂食亚硒酸钠水组阳性表达逐渐增强,组间具有显著性差异(P<0.05)。结论硒可增强AOM所致结肠癌大鼠精原细胞P16蛋白的表达。

硒对氧化偶氮甲烷所致大鼠结肠癌形成过程中垂体远侧部促甲状腺激素阳性细胞的影响

目的:观察硒对氧化偶氮甲烷(AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,垂体远侧部促甲状腺激素(TSH)阳性细胞的影响。方法:SD大鼠随机分为正常对照、实验对照、致癌剂前补硒和致癌剂后补硒组。34周取垂体,用免疫组织化学SP法和SAP法,观察其远侧部TSH阳性细胞的形态结构及免疫组织化学反应强度,并进行图像分析。结果:亚甲蓝染色光镜下观察,可见AOM腹腔注射的大鼠结肠黏膜出现异常隐窝和异常隐窝灶。免疫组织化学显示,与正常对照组相比,实验对照组TSH阳性细胞反应显著减弱;硒干预各组与实验对照组相比,TSH阳性细胞的阳性反应进一步减弱。结论:硒参与了AOM所致大鼠结肠癌形成过程中,垂体远侧部TSH阳性细胞功能变化的调节。

氧化偶氮甲烷和葡聚糖硫酸钠致肠炎相关性结直肠癌小鼠模型的建立

目的:建立肠炎相关性结直肠癌的小鼠模型。方法:给予小鼠单次小剂量腹腔注射氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)联合2%葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulpate,DSS)自由饮用,建立肠炎相关性结直肠癌小鼠模型。对照组小鼠给予PBS腹腔注射后普通饮水。每天观察症状,2%DSS 5 d,普通饮水16 d,此21 d为1个循环,共进行4个循环,结束后,断颈处死小鼠,取脾脏、肠系膜淋巴结、结肠,观察并比较两组小鼠脾脏,肠系膜淋巴结大体改变和结肠HE染色情况。结果:与对照组比较,实验组小鼠脾脏、肠系膜淋巴结明显增大,结肠远端出现肿瘤。HE染色结果显示,实验组发病小鼠结肠黏膜层及黏膜下层出现广泛的炎症细胞浸润,腺体组织结构紊乱、破坏,出现腺管样结构,具有组织异型性。结论:单剂量AOM与DSS联合使用可在短期内诱导小鼠结肠肿瘤的发生。

一甲胺中偶氮甲烷的气相色谱分析

本文研究了一甲胺中偶氮甲烷的气相色谱分析方法。实验表明,在使用涂有三乙醇胺和聚乙二醇混合固定液的6201担体作色谱柱时,当固定液与担体比为28.5:100,三乙醇胺与聚乙二醇比为1:1(均为重量比)时,偶氮甲烷、氨、二甲胺和一甲胺均获得良好的分离。采用工作曲线法,偶氮甲烷的定量分析结果令人满意。

气相色谱分析偶氮甲烷的校正因子计算

在以前的工作中,我们讨论了一甲胺中偶氮甲烷的气相色谱分析法。色谱柱采用涂有三乙醇胺和聚乙二醇-400混合固定液的6201担体,固定液与担体的比为28.5∶100,三乙醇胺与聚乙二醇-400的比为1∶1(均为重量比)。在下述操作条件下,一甲胺、二甲胺、氨与偶氮甲烷均获得良好的分离(图1)。

抗性淀粉对氧化偶氮甲烷诱导的大鼠结(直)肠癌前病变预防作用研究

目的研究抗性淀粉(resistant starch,RS)对大鼠结(直)肠癌前病变的预防作用。方法将50只雄性Wistar大鼠随机分为阴性对照、阳性对照组及RS低、中、高剂量组。阳性对照组大鼠从实验第2w开始腹腔注射氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM),1/w,连续2w。阴性对照组注射生理盐水。各剂量组用致癌剂处理与阳性对照组,并分别自由摄食含7.6%、15.2%及22.8%RS的饲料。对照组大鼠摄食普通饲料。于首次注射AOM后13w断头处死各组所有动物,观察并计数结肠变性隐窝病灶(aberrant crypt foci,ACF)发生情况。并取大肠组织标本,包埋后做石蜡切片,用SABC免疫组化法测量生物标记物增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)标记指数(PCNA-LI)、核仁组成区嗜银蛋白(argyrophilic nucleolar,organizer region protein,AgNORs)颗粒数目,以及Bcl-2蛋白(B-cell lymphomaleukemia-2,Bcl-2)、Bax蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bcl-2)表达情况。结果与阳性对照组相比,各RS处理组ACF数目和AgNORs数目均显著降低(P<0.01),高剂量组增殖细胞核抗原标记指数(PCNA-LI)显著减少(P<0.05);此外,RS还抑制了Bcl-2蛋白的表达,诱导了Bax蛋白的表达。结论短期RS对AOM诱发的大鼠结(直)肠癌前病变具有预防作用,可使ACF和AgNQR3显著减少即其机制可能与抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡有关。[营养学报,2013,35(2):158-161,166]

硒对氧化偶氮甲烷诱导大鼠结肠黏膜癌变影响的观察

目的:探讨高硒摄入对氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)诱发的大鼠结肠黏膜癌变的影响。方法:给3周龄断乳SD雄性大鼠腹腔注射AOM(1次/周),连续2周以构建大鼠结肠黏膜癌动物模型,分别在注射前及2次注射后开始给动物自由饮用含亚硒酸钠(Na2SeO3,浓度为4μg/mL)水。利用亚甲基蓝染色及HE染色观察大鼠结肠黏膜病变。结果:注射AOM的实验组大鼠自注射第10周起结肠黏膜内均可见异常隐窝灶(aber-rant crypt foci,ACF)。在第32周起,致癌前或致癌后补硒组大鼠结肠黏膜均出现癌前病变标志-大异常隐窝灶,且均显著高于实验对照组(6.00±1.67,10.60±3.37,2.20±0.55)。ACF的异形性随时间延长显著增加,致癌前或致癌后补硒组大鼠结肠黏膜出现腺瘤数均显著高于实验对照组(4,4,0)。结论:饮用含高亚硒酸钠水可促进AOM诱发大鼠结肠黏膜癌变,可能是硒的胰岛素模拟作用所致。

PPARγ配体扎鲁司特对氧化偶氮甲烷诱导的大鼠大肠癌的预防作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的合成配体扎鲁司特,对氧化偶氮甲烷(AOM)诱导的大鼠大肠畸变隐窝病灶(ACF)形成及大肠癌的化学预防作用。方法利用AOM诱导大鼠大肠癌模型,实验大鼠随机分为3组:对照组、AOM组(AOM诱癌)、扎鲁司特预防组(AOM诱癌+0.15%扎鲁司特)。应用美蓝染色法观察各组第12周大鼠大肠ACF、大肠畸变隐窝(AC)的数量以及计算各组第32周时大鼠大肠癌的发生率,并加以比较。结果实验第12周时除对照组外,AOM组及扎鲁司特预防组均有ACF形成,扎鲁司特预防组大肠ACF和AC的平均数明显低于AOM组(P均<0.05);实验第32周时除对照组外,AOM组、扎鲁司特预防组大鼠均检出大肠癌,大肠癌的发生率分别为72.22%(13/18)、42.11%(8/19),扎鲁司特预防组大肠癌的发生率明显低于AOM组(P<0.05)。结论扎鲁司特能抑制大鼠诱癌早期ACF的数量,对AOM诱导的大鼠大肠癌有明显的化学预防作用。

葡聚糖硫酸钠和偶氮氧甲烷建立小鼠溃疡性结肠炎癌变模型

目的建立溃疡性结肠炎癌变的小鼠模型。方法雌性BALB／c小鼠随机分为4组：正常对照组、偶氮氧甲烷（AOM）组、葡聚糖硫酸钠（Dss）组、AOM＋DSS组，AoM一次性腹腔注射，DSS喂养1周＋普通水2周，如此3个循环共9周。每周称量体重，记录精神状态、大便性状、体毛亮泽及死亡时间，9周末取血用ELISA法检测TNF-α水平，HE染色观察炎症及病理类型。结果①小鼠饮用DSS后可出现腹泻、血便、体重下降、精神不振、体毛凌乱等，后期可见肛口肿物脱出。AOM＋Dss组第4、7、8、9周末体重较正常对照组明显下降俨〈0．05）；②DSS两组血浆TNF-α水平显著升高（P〈0．05）；③HE染色，DSS两组可见炎细胞浸润和（或）淋巴滤泡形成。AOM＋DSS组存活小鼠全部成瘤，肿瘤多位于远段结肠，病理组织学诊断为高度不典型增生和（或）原位癌，另3组未见不典型增生或癌变。结论低剂量AOM一次性腹腔注射联合DSS三循环喂养可建立溃疡性结肠炎癌变模型，该方法时间较短，成瘤率高，病理类型稳定。

氧化偶氮甲烷-葡聚糖硫酸钠法诱导肠癌小鼠模型

结直肠癌(CRC)是消化道常见的恶性肿瘤,严重影响人类的生活和健康.多数研究应用细胞株实验探讨结直肠癌发生发展的特点,但构建原位肠癌动物模型,可以更好地还原肿瘤的发生发展过程,极大地提高基础实验的可信度.目前,氧化偶氮甲烷-葡聚糖硫酸钠(AOM-DSS)法所诱导的疾病模型在结直肠癌动物模型中被广泛应用,但在造模过程和疾病评价两个方面存在诸多不同.因此,本文将对AOM-DSS诱导的小鼠肠癌模型的制作过程及疾病评价做一简要综述,为初次制作此模型的科研人员提供参考.

水飞蓟宾对氧化偶氮甲烷诱导的A/J小鼠结肠肿瘤的抑制作用

鉴于结直肠癌是导致肿瘤相关死亡的第二大诱因,Ravichandran K、Velmurugan B、Gu M等人首次在活体内对水飞蓟宾对氧化偶氮甲烷（AOM）所致结肠癌的抑制作用进行了研究,结果显示,AOM能抑制增殖细胞核抗原和细胞周期蛋白D1表达,提高Cip1/p21水平表达,同时降低诱生型一氧化氮合酶、环氧化酶2及血管内皮生长因子的表达,提高细胞凋亡的半胱氨酸蛋白酶3和ADP聚合酶水平，

大芦荟全叶对氧化偶氮甲烷诱导的大鼠结肠直肠异常隐窝病灶的抑制作用

作者曾报道大芦荟 Aloe arborescensMiller var.natalensis Berger 提取物对小鼠十二指肠癌和皮肤癌的促进阶段有抑制作用。现作者报道大芦荟全叶对氧化偶氮甲烷(AOM)诱导大鼠结肠直肠异常隐窝病灶(ACF)形成的抑制。

红球姜中的球姜酮对氧化偶氮甲烷诱导的大鼠异常隐窝病灶的化学预防作用

异常隐窝病灶(ACF)是结肠腺癌癌前病变。作者研究了从红球姜 Zingiber zerum-bet Smith 根茎中分得的球姜酮(zerumbone)对氧化偶氮甲烷(AOM)诱导的结肠 ACF 的抑制作用。雄性 F344大鼠分为5组:1～3组每天皮下注射15 mg/kg 的 AOM,共3周,其中第2和3组在注射 AOM 前1周开始每天分别喂饲含0.01%和0.05%球姜酮的饲料。

化学试剂诱导炎性结直肠癌动物模型的研究进展

炎症性肠病是导致结直肠癌发生的直接因素.结合炎症相关结直肠癌的发病分子机制,对现有化学试剂诱导的结肠癌动物模型进行系统的整理和比较.发现AOM/DSS诱导的结直肠癌是目前应用最广泛,操作较简单,成模率较高,病理表现、机制与临床CRC特征更为相似的良好模型之一.

两种小鼠结直肠癌动物模型的特点比较与应用

目的 建立炎症诱导和基因突变诱导结直肠癌小鼠模型并比较其特点。方法 采用氧化偶氮甲烷(azoxymethane, AOM)联合葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate, DSS)建立炎症诱导结直肠癌小鼠模型,使用KPC小鼠建立携带Kras基因突变和Apc条件敲除的转基因结直肠癌小鼠模型。观察小鼠体质量、粪便性状和便血等大体状况,根据建模时间点取材小鼠结直肠标本并观察其成瘤情况。HE染色及Ki67免疫组化评估病理变化。使用tdTomato标记CDX2阳性上皮细胞。培养并比较两种结直肠癌类器官与正常结肠类器官的差异。结果 AOM/DSS建模周期约50 d,其结直肠癌主要位于远段近肛门处和结肠中段;KPC模型形成结直肠癌约需8 d,肿瘤主要位于结肠近段。AOM/DSS模型中远段肿瘤部位组织结构紊乱,KPC模型中近段结肠黏膜层增厚且组织紊乱,存在大量未分化上皮细胞。AOM/DSS模型肿瘤组织内Ki67阳性细胞较癌旁组织中明显增多,KPC模型内近段结肠癌中存在大量Ki67阳性肿瘤细胞,远段结肠增殖水平正常。表达CDX2的tdTomato阳性上皮细胞主要位于结肠近段。两种模型均能培养得到增殖旺盛的肿瘤类器官。结论 AOM/DSS结肠癌模型具有慢性炎症所致结直肠癌特点,适用于慢性炎症相关结直肠癌的研究;KPC模型产生肿瘤的肠段及细胞增殖活性可能与CDX2高表达密切相关,适合Kras基因突变结直肠癌研究,两种结直肠癌模型可互为补充。

一种溃疡性结肠炎相关性结肠癌小鼠模型的建立

目的建立一种简单易行的溃疡性结肠炎相关的结肠癌小鼠模型。方法 5周龄C57BL/6J雄性小鼠被分为实验组(n=10)和对照组(n=7)。实验组小鼠腹腔注射致癌剂氧化偶氮甲烷(AOM)10 mg/kg后给于致炎剂2%葡聚糖硫酸钠(DSS)饮水4 d,之后换为普通饮水17 d为1个周期,共3个周期结束;对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。解剖镜大体观察结肠,并对结肠进行炎症评分、黏膜息肉评分和肿瘤病理评分,评分结果采用非配对t检验,检验水准取ɑ=0.05。结果实验组小鼠腹腔注射AOM后无明显变化,给予DSS后有50%小鼠出现血便,且逐渐加重,试验结束时小鼠表现为反应迟钝,活动减少,出现血便的小鼠均有脱肛。对照组小鼠无异常表现。实验组小鼠较对照组体重增长明显减缓。试验结束时,所有实验组小鼠远端及中段大肠出现不典型增生/癌变,大体解剖镜炎症评分、息肉评分和病理切片肿瘤评分均显著高于对照组(P<0.05)。结论致癌剂AOM和致炎剂DSS可诱导小鼠建立溃疡性结肠炎相关的结肠癌模型。