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A群脑膜炎球菌多糖—精破类偶联抗原的制备及其主要特性 被引量:1
1
作者 郭豫谊 顾新星 陈静 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1989年第2期18-21,共4页
参照生物制品质量要求,连续制备3批脑膜炎球菌多糖-精破类偶联抗原,其多糖含量为19.8~24.4%(w/w),该种拟糖蛋白具有波长为245nm特征性的紫外光吸收谱,在Sepharose-CL 4B柱层析上Kd为0。偶联抗原中多糖的抗原性在火箭电泳上虽与单纯多... 参照生物制品质量要求,连续制备3批脑膜炎球菌多糖-精破类偶联抗原,其多糖含量为19.8~24.4%(w/w),该种拟糖蛋白具有波长为245nm特征性的紫外光吸收谱,在Sepharose-CL 4B柱层析上Kd为0。偶联抗原中多糖的抗原性在火箭电泳上虽与单纯多糖相似,但其免疫原性则明显增强。偶联抗原在4℃存放3年或在37℃存放8周,其免疫原性无明显改变。加温处理过的偶联抗原经Sepharose-CL4B和SDSPAGE检查表明,多糖与蛋白共价结合是相当稳定的。 展开更多
关键词 A群脑膜炎球菌 多糖-蛋白偶联抗原
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金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖偶联抗原的制备及免疫原性分析 被引量:4
2
作者 杨学云 吴建勇 +2 位作者 李建军 王登峰 王治才 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期299-303,共5页
为建立金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖(CP5)纯化与偶联技术方法,获得具有免疫原性的CP5偶联抗原,采用高压破碎菌体的方法释放荚膜多糖,酶处理去除核酸和蛋白质,通过离子交换层析进一步纯化,得到纯化的CP5,并对其纯度和反应原性进行检测;采... 为建立金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖(CP5)纯化与偶联技术方法,获得具有免疫原性的CP5偶联抗原,采用高压破碎菌体的方法释放荚膜多糖,酶处理去除核酸和蛋白质,通过离子交换层析进一步纯化,得到纯化的CP5,并对其纯度和反应原性进行检测;采用己二酸二酰肼(ADH)间桥法制备CP5-牛血清白蛋白(CP5-BSA)偶联抗原,加佐剂免疫小鼠,进行抗体水平测定。结果表明,纯化的CP5纯度为675.1g/kg,经用免疫琼脂双扩散试验检测,纯化多糖仅与同型菌株抗血清发生沉淀反应,偶联抗原CP5-BSA可以刺激小鼠产生CP5免疫应答。此研究结果为奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌亚单位疫苗的研制提供了试验依据。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 5型荚膜多糖 偶联抗原 免疫原性
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金黄色葡萄球菌336型多糖偶联抗原的制备及免疫原性
3
作者 吴建勇 杨学云 +2 位作者 李建军 王登峰 王治才 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期946-951,共6页
采用溶葡萄球菌酶消化菌体释放金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)336型多糖(Type 336polysaccharides,336PS),梯度乙醇浓度浸提和用不同酶消化进行粗提,通过凝胶过滤层析纯化得到了336PS多糖,并对其纯度进行检测。将336PS通过... 采用溶葡萄球菌酶消化菌体释放金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)336型多糖(Type 336polysaccharides,336PS),梯度乙醇浓度浸提和用不同酶消化进行粗提,通过凝胶过滤层析纯化得到了336PS多糖,并对其纯度进行检测。将336PS通过ADH间桥法与BSA连接制备偶联抗原,采用凝胶过滤层析纯化,200~400nm波长扫描鉴定,从层析波峰和检定波长判定偶联成功。加佐剂制备成疫苗免疫小鼠,进行抗体检测和小鼠免疫保护试验。结果表明,纯化的336PS纯度为685.1g/kg;偶联抗原波峰较BSA前移,其原最高吸收波峰为212nm,从206nm向280nm偏移。偶联抗原336PS-BSA可以刺激小鼠产生抗336PS的免疫应答反应,并能够对免疫小鼠提供免疫保护作用。 展开更多
关键词 336型多糖 金黄色葡萄球菌 偶联抗原 免疫原性
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半抗原-载体蛋白偶联物的三种电泳鉴定方法 被引量:9
4
作者 雷红涛 庞杰 +4 位作者 贺丽苹 杨金易 孙远明 秦毅兰 梁明标 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期565-570,共6页
【目的】建立一种简单方便的半抗原-载体蛋白偶联物电泳鉴定方法。【方法】选用SDS-PAGE、非变性琼脂糖凝胶电泳、高效毛细管区带电泳3种方法对载体蛋白、偶联剂变性的载体蛋白、半抗原-载体蛋白进行比较鉴定,同时与光谱法结果比较。【... 【目的】建立一种简单方便的半抗原-载体蛋白偶联物电泳鉴定方法。【方法】选用SDS-PAGE、非变性琼脂糖凝胶电泳、高效毛细管区带电泳3种方法对载体蛋白、偶联剂变性的载体蛋白、半抗原-载体蛋白进行比较鉴定,同时与光谱法结果比较。【结果】对分子量差异较小的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物,SDS-PAGE不能有效分辨;但偶联前后载体电荷有变化时,非变性琼脂糖凝胶电泳却能有效分辨游离的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物,相对SDS-PAGE表现出更高的分辨灵敏度;毛细管区带电泳能高效分辨载体和半抗原-载体蛋白偶联物,结果直观,但需较贵重的专用仪器。琼脂糖电泳和毛细管电泳法与可见-紫外光谱法鉴定结果一致。【结论】3种电泳方法各有优缺点,非变性凝胶电泳简便、廉价、有效,较适合普通实验室使用。 展开更多
关键词 抗原-载体蛋白 SDS-PAGE 非变性琼脂糖凝胶电泳 毛细管区带电泳
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荧光光谱法在半抗原-载体蛋白偶联物鉴定中的应用 被引量:2
5
作者 张丽芳 李伟岭 +3 位作者 江兆玲 王米 郑文丽 薛飞群 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第7期81-83,共3页
对苯甲酸-牛血清白蛋白偶联物和苯胺-牛血清白蛋白偶联物进行荧光光谱鉴定。结果显示,对苯甲酸-牛血清白蛋白偶联物和苯胺-牛血清白蛋白偶联物的荧光光谱与其半抗原和载体蛋白相比均发生变化,苯甲酸-牛血清白蛋白偶联物和苯胺-牛血清白... 对苯甲酸-牛血清白蛋白偶联物和苯胺-牛血清白蛋白偶联物进行荧光光谱鉴定。结果显示,对苯甲酸-牛血清白蛋白偶联物和苯胺-牛血清白蛋白偶联物的荧光光谱与其半抗原和载体蛋白相比均发生变化,苯甲酸-牛血清白蛋白偶联物和苯胺-牛血清白蛋白偶联物合成成功。研究表明,荧光光谱法是一种鉴定半抗原-载体蛋白偶联物的可行的方法。 展开更多
关键词 荧光光谱 抗原-载体蛋白
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海洋毒素大田软海绵酸完全抗原的制备与分析 被引量:2
6
作者 卢士英 周玉 +5 位作者 任洪林 霍方珍 潘风光 柳增善 于师宇 于光 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期46-49,54,共5页
为了建立大田软海绵酸(Okadaic acid,OA)的免疫学检测方法,利用活泼酯法将OA分子中的羧基与载体蛋白上的氨基偶联,人工制备OA的免疫抗原(OA-IgG)和检测抗原(OA-BSA),经电泳、动物实验及ELISA法进行了鉴定,完全抗原的偶联成功,为利用杂... 为了建立大田软海绵酸(Okadaic acid,OA)的免疫学检测方法,利用活泼酯法将OA分子中的羧基与载体蛋白上的氨基偶联,人工制备OA的免疫抗原(OA-IgG)和检测抗原(OA-BSA),经电泳、动物实验及ELISA法进行了鉴定,完全抗原的偶联成功,为利用杂交瘤技术制备OA的单克隆抗体和海产品OA免疫学检测方法奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 大田软海绵酸(okadaic ACID OA) 活泼酯法 抗原
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环丙氨嗪人工抗原的合成与鉴定 被引量:2
7
作者 罗芳琴 金邦荃 +1 位作者 侯翔 王冉 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第4期343-345,共3页
本研究拟通过抗原合成、多克隆抗体制备等途径建立快速的环丙氨嗪酶联免疫检测方法。主要采用戊二醛桥连法,偶联半抗原环丙氨嗪和载体牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA),制备酶联检测的免疫抗原和包被抗原。经紫外光谱和气相-... 本研究拟通过抗原合成、多克隆抗体制备等途径建立快速的环丙氨嗪酶联免疫检测方法。主要采用戊二醛桥连法,偶联半抗原环丙氨嗪和载体牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA),制备酶联检测的免疫抗原和包被抗原。经紫外光谱和气相-傅里叶-红外光谱鉴定,在紫外265ntll波长处得到环丙氨嗪-BSA吸收峰;在红外3350-3300cm^-1、1660—1500cm^-1和1695~1665cm^-1波长处分别得到环丙氨嗪-BSA和环丙氨嗪-OVA特征性偶联吸收峰,证实本试验人工合成的2对抗原均偶联成功。免疫抗原和包被抗原的偶联比分别达到25.9:1、23.1:1,为进一步制备抗血清和酶联检测方法的建立奠定了工作基础。 展开更多
关键词 环丙氨嗪 人工抗原 光谱鉴定 抗原 戊二醛桥连法
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蒜氨酸抗原性探讨
8
作者 韩志俊 颜俊文 李明强 《湘南学院学报》 2021年第5期13-17,共5页
用蒜氨酸、蒜氨酸与卵清蛋白偶联物免疫动物实验探讨蒜氨酸免疫原性.蒜氨酸抗原、蒜氨酸与卵清蛋白偶联抗原,常规免疫小鼠;用蒜氨酸包被"O"型人红细胞进行玻片与微量稀释法间接血凝试验检测蒜氨酸抗体;用蒜氨酸抗原片和蒜氨... 用蒜氨酸、蒜氨酸与卵清蛋白偶联物免疫动物实验探讨蒜氨酸免疫原性.蒜氨酸抗原、蒜氨酸与卵清蛋白偶联抗原,常规免疫小鼠;用蒜氨酸包被"O"型人红细胞进行玻片与微量稀释法间接血凝试验检测蒜氨酸抗体;用蒜氨酸抗原片和蒜氨酸组织切片进行免疫荧光试验鉴定蒜氨酸抗体.研究结果表明,蒜氨酸免疫小鼠,没有产生蒜氨酸抗体;蒜氨酸与卵清蛋白偶联抗原免疫小鼠,获得蒜氨酸抗体,间接血凝效价达到1∶32;免疫荧光结果与蒜氨酸体内分布特点相符,蒜氨酸为半抗原物质. 展开更多
关键词 蒜氨酸 偶联抗原 免疫原性 抗体 抗原
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石房蛤毒素单克隆抗体的制备及其特性研究 被引量:4
9
作者 闫东明 于师宇 +5 位作者 任洪林 周玉 孟宪梅 林超 柳增善 卢士英 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第3期73-76,共4页
将石房蛤毒素(Saxitoxin,STX)与牛血清白蛋白(BSA)偶联构建完全抗原STX-BSA,免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得1株稳定分泌抗STX单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类为IgM。体内诱生法收集腹水单抗,间接ELISA方法测定抗体效价为1∶1024... 将石房蛤毒素(Saxitoxin,STX)与牛血清白蛋白(BSA)偶联构建完全抗原STX-BSA,免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得1株稳定分泌抗STX单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类为IgM。体内诱生法收集腹水单抗,间接ELISA方法测定抗体效价为1∶102400,抗体亲和常数为3.71×106L/mol。 展开更多
关键词 石房蛤毒素 抗原 单克隆抗体 亲和常数
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大黄素-BSA不同表位构型的免疫原性和特异性研究 被引量:14
10
作者 李丽华 刘文泰 +4 位作者 戴军 窦玉红 王茹 刘艳臣 彭洋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期419-422,共4页
目的:研究不同偶联法制备大黄素-BSA的大黄素表位构型及其免疫原性和特异性。方法:用重氮化对氨基苯甲酸偶联法和琥珀酸酐偶联法制备两种不同表位构型的大黄素-BSA1和大黄素-BSA2抗原,免疫小鼠制备抗血清,用醋酸纤维素膜双向免疫扩散法... 目的:研究不同偶联法制备大黄素-BSA的大黄素表位构型及其免疫原性和特异性。方法:用重氮化对氨基苯甲酸偶联法和琥珀酸酐偶联法制备两种不同表位构型的大黄素-BSA1和大黄素-BSA2抗原,免疫小鼠制备抗血清,用醋酸纤维素膜双向免疫扩散法检测免疫原性及其抗体特异性。结果:大黄素-BSA1和大黄素-BSA2抗血清与大黄素反应的抗体效价分别为1∶144 0±357.771和1∶440±219.089,二者有极显著性差异(P=0.006)。分别与大黄素等五种蒽醌类化合物反应,前者对大黄素有较高特异性,抗原结合效价可达1∶1 843.2±457.947。后者对大黄素的特异性较低,结合效价仅为1∶8.8±4.382。结论:两种偶联法制备大黄素-BSA的表位构型不同,其免疫原性和特异性存在着显著差异。重氮化对氨基苯甲酸偶联法制备大黄素-BSA的免疫原性较高、大黄素特异性较强。 展开更多
关键词 抗原抗体反应 双向免疫扩散法 大黄素 抗原-载体 表位
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Synthesis of Citrinin Artificial Antigen and Its Coupling Ratio Determination 被引量:3
11
作者 李娇 钟理 +5 位作者 田世民 金涌 崔艳芬 任香夫 祁淑红 刘畅 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第8期169-172,共4页
[Objective] This study was to establish a method for the rapid and accurate detection of the coupling ratio of artificial antigen. [Method] Artificial synthetic antigen of citrinin (CIT) was first conjugated with ve... [Objective] This study was to establish a method for the rapid and accurate detection of the coupling ratio of artificial antigen. [Method] Artificial synthetic antigen of citrinin (CIT) was first conjugated with vector protein bovine serum albumin (BSA) and then identified by SDS-PAGE electrophoresis,and its coupling ratio was measured by UV absorption and mass spectrometry. [Result] The identification result showed that artificial antigen of CIT was successfully coupled,and the coupling ratio was 8.4 by UV absorption while 6.0 by mass spectrometry. [Conclusion] The comparison experiment showed that mass spectrometry could rapidly identify the artificial antigen and accurately detect its coupling ratio. This study provided basis for the preparation of CIT antigen as well as the establishment of an for enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for citrinin determination. 展开更多
关键词 CITRININ Artificial antigen Coupling ratio Mass spectrometry
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SARS冠状病毒3CL蛋白酶多克隆抗体的制备及纯化 被引量:2
12
作者 童国珍 单玉飞 +2 位作者 丁建芳 许根俊 赵辅昆 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2008年第5期543-546,共4页
SARS病毒(SARS-CoV)3CL蛋白酶在病毒的复制过程中起到关键作用,是抗病毒药物设计的重要靶标。本工作用在大肠杆菌中表达并纯化的SARS-CoV 3CL蛋白酶免疫新西兰大耳兔,获得了多克隆抗体血清;利用抗原偶联柱对血清进行了亲和纯化。SDS-PAG... SARS病毒(SARS-CoV)3CL蛋白酶在病毒的复制过程中起到关键作用,是抗病毒药物设计的重要靶标。本工作用在大肠杆菌中表达并纯化的SARS-CoV 3CL蛋白酶免疫新西兰大耳兔,获得了多克隆抗体血清;利用抗原偶联柱对血清进行了亲和纯化。SDS-PAGE以及Western-Blot结果显示纯化后的抗体纯度较高,特异性较强,为免疫学方法检测SARS-CoV 3CL在宿主细胞内的活动打下了基础。 展开更多
关键词 SARS 3CL蛋白酶 多克隆抗体 抗原 亲和纯化
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