傣药咪多领(云南琵琶甲)对增生性瘢痕中表皮干细胞干性及Hedgehog信号通路的影响

目的探讨傣药咪多领(云南琵琶甲)对增生性瘢痕中表皮干细胞干性及Hedgehog信号通路的影响。方法构建新西兰大耳兔增生性瘢痕模型,并分离增生性瘢痕组织中表皮干细胞。将动物随机分为对照组、模型组、阳性对照组(PC组,用复方肝素钠尿囊素凝胶干预)及傣药咪多领0.667、1.334、2.668 g/kg组;表皮干细胞分为对照组,傣药咪多领0.025、0.05、0.1 g/mL组。RT-qPCR和Western blot测各组表皮干细胞标志物(Nanog和Oct4)及Hedgehog信号通路相关基因(SHH、Patch、Smo和Gli-1)mRNA和蛋白的表达水平,进一步通过免疫荧光检测SHH、Patch、Smo和Gli-1的表达水平。CCK-8法检测表皮干细胞增殖活力。流式细胞仪检测各组CD49F、CD29和CK19阳性细胞比率。结果傣药咪多领对增生性瘢痕具有良好的治疗效果,且显著抑制增生性瘢痕组织中Nanog和Oct4及SHH、Patch、Smo和Gli-1的表达水平,此外,2.668 g/kg剂量傣药咪多领与15 mg/kg剂量复方肝素钠尿囊素凝胶治疗效果相近。傣药咪多领限制抑制表皮干细胞中Nanog和Oct4及SHH、Patch、Smo和Gli-1的表达水平。结论增生性瘢痕中表皮干细胞干性增强,且Hedgehog信号通路相关蛋白表达上调,而傣药咪多领可逆转这一过程,并对增生性瘢痕具有良好的治疗效果。

傣药咪多领通过Wnt/β-catenin/c-myc信号通路对增生性瘢痕表皮干细胞干性的作用机制

目的探讨傣药咪多领(云南琵琶甲)通过Wnt/β-catenin/c-myc信号通路对增生性瘢痕表皮干细胞干性的影响。方法构建增生性瘢痕动物模型,分为NC组、Model组、PC组、LD组、MD组和HD组。分离并鉴定Model组中表皮干细胞,分为control组、LD-cell组、MD-cell组和HD-cell组。HE染色观察各组增生性瘢痕组织;Western blot、RT-qPCR及免疫荧光检测Integrinβ1、p63、Wnt、β-catenin和c-myc的表达水平;CCK-8检测各组表皮干细胞增殖活力;干细胞成球实验检测各组表皮干细胞成球效率。结果体内实验发现,傣药咪多领可显著下调增生性瘢痕的瘢痕增生指数(hypertrophic indx,HI)(P<0.05),且减少增生性瘢痕中成纤维细胞数量和胶原密度。体内和体外实验均发现,Integrinβ1、p63、Wnt、β-catenin和c-myc在增生性瘢痕组织和表皮干细胞中异常高表达,且傣药咪多领能恢复它们的表达水平(P<0.05)。进一步发现,傣药咪多领能够抑制Wnt/β-catenin/c-myc通路激活剂LiC1的作用,进而下调表皮干细胞增殖活力和成球效率(P<0.05)。结论傣药咪多领通过抑制Wnt/β-catenin/c-myc信号通路激活,从而抑制表皮干细胞干性,进而对增生性瘢痕具有良好的治疗效果。

傣药咪多领通过miR-27b-3p/GDF-6分子轴对增生性瘢痕成纤维细胞的作用机制

目的探讨傣药咪多领通过miR-27b-3p/GDF-6分子轴对增生性瘢痕成纤维细胞的影响。方法收集增生性瘢痕(hypertrophic scar,HS)组织及其配对正常皮肤组织,并分别分离两组织中的成纤维细胞HSFs和NSFs。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-27b-3p及GDF-6、COL1a2、COL3a1和α-SMA mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)实验检测GDF-6、COL1a2、COL3a1和α-SMA蛋白的表达水平;CCK-8和EdU检测HSFs细胞的增殖活力;使用ANNEXIN V-FITC/PI试剂盒检测HSFs细胞的凋亡水平。结果傣药咪多领可以下调HSFs细胞中GDF-6、COL1a2、COL3a1和α-SMA的表达水平,并抑制HSFs细胞增殖(P<0.05)。miR-27b-3p在HS组织和HSFs细胞中异常低表达,且傣药咪多领能上调miR-27b-3p的表达(P<0.05)。miR-27b-3p靶向负调控GDF-6的表达水平(P<0.05)。敲降miR-27b-3p或过表达GDF-6上调HSFs细胞中GDF-6、COL1a2、COL3a1和α-SMA的表达水平,并促进HSFs细胞增殖(P<0.05)。结论傣药咪多领通过上调miR-27b-3p抑制GDF-6的表达水平,从而抑制增生性瘢痕成纤维细胞HSFs中GDF-6、COL1a2、COL3a1和α-SMA的表达水平并抑制HSFs细胞增殖。