甘薯储藏蛋白(sporamin)A基因在大肠杆菌中的表达研究

利用基因重组技术 ,将 PCR扩增获得的甘薯储藏蛋白 A基因的成熟肽编码区序列 ,插入到高效表达载体 p Trc His B中 ,构建成重组表达质粒 p THSPO- A.用限制酶切和 PCR分析均表明重组质粒与预期结果相符 .用 IPTG诱导重组质粒转化的大肠杆菌 TOP10 ,菌体总蛋白经 12 % SDS- PAGE分析 ,可观察到一个大小为 10 k D的蛋白质带 ,其分子量比预期值小 .

甘薯块根储藏蛋白(Sporamin)启动子克隆及功能验证

提取甘薯"川薯34"总DNA,设计引物,通过高保真PCR扩增获得了长为1144bp的甘薯储藏蛋白(Sporamin)基因启动子SpoA-p。PLACE在线分析表明:Sporamin启动子具有基本的启动子元件CAAT-box,并包含大量与储藏蛋白表达相关、抗逆相关及蔗糖表达相关的功能组件。构建植物表达载体pBI-SpoA-p::GUS、农杆菌工程菌株EHA105:pBI-SpoA-p::GUS后导入烟草及甘薯,分别得到15株烟草和10株甘薯的阳性转基因植株,GUS染色分析表明烟草各部位中只在根中有基因表达,甘薯根、茎和叶各部位未检测到活性。5%蔗糖诱导处理24h后,在烟草根、茎及叶均观察到GUS活性;在甘薯中只有根有GUS活性。因此,可以看出此启动子为甘薯根部特异的表达启动子,并受蔗糖诱导而表达。