催乳素受体基因外显子10多态性及其与济宁青山羊高繁殖力关系的研究

设计5对引物,采用PCR-SSCP技术检测催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)基因外显子10及部分3′非翻译区在高繁殖力山羊品种(济宁青山羊)和低繁殖力山羊品种(辽宁绒山羊、波尔山羊和安哥拉山羊)中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对济宁青山羊高繁殖力的影响。结果表明:首次拼接出的山羊PRLR基因外显子10及部分3′非翻译区的核苷酸序列长度为1,118bp,与已公布的绵羊、牛、人PRLR基因mRNA相应序列的同源性分别为98.33%、93.92%、74.52%,与已公布的羊驼PRLR基因部分序列的同源性为78.29%。引物P1、P2与P4扩增片段具有多态性,其余2对引物的扩增片段不存在多态性。对于P1扩增片段,在济宁青山羊和辽宁绒山羊中检测到AA型和AB型,在安哥拉山羊中检测到AA型和AC型,在波尔山羊中只检测到AA型;克隆测序表明AB型与AA型相比有两处突变(186G→A和220T→C),分别导致氨基酸由天冬氨酸变为天冬酰胺、亮氨酸变为脯氨酸;AC型与AA型相比有1处突变(140A→G),该突变没有导致氨基酸变化;济宁青山羊AA和AB基因型之间产羔数的最小二乘均值差异不显著(P>0.05)。对于P2扩增片段,在济宁青山羊、辽宁绒山羊和波尔山羊中都检测到DD型和DE型,而在安哥拉山羊中只检测到DD型;克隆测序表明DE型和DD型相比有两处突变(52G→A和122G→A),其中122bp处的突变导致氨基酸由精氨酸变为甘氨酸;济宁青山羊DD和DE基因型之间产羔数的最小二乘均值差异不显著(P>0.05)。对于P4扩增片段,在济宁青山羊中检测到FF型和FG型,在辽宁绒山羊中检测到FF型和GG型,在波尔山羊中只检测到FF型,在安哥拉山羊中检测到FF型、FG型和GG型;克隆测序表明GG型和FF型相比在扩增片段的143bp处发生1处碱基突变(A→G),并导致氨基酸由蛋氨酸变为缬氨酸;FG基因型济宁青山羊产羔数最小二乘均值比FF基因型的多0.76只(P<0.05)。研究结果初步表明:PRLR基因可能是控制济宁青山羊多胎性能的一个主效基因或是与之存在紧密遗传连锁的一个标记。

绵羊催乳素受体基因PCR-SSCP分析

采用PCR-SSCP技术分析了催乳素受体基因(PRLR)在小尾寒羊、萨福克羊、多赛特羊、多赛特公羊×小尾寒羊母羊F1代杂种羊4个绵羊群体中的多态性。结果表明:PRLR基因在3对引物扩增片段中均存在PCR-SS-CP多态性。对于引物1,4个绵羊群体均检测到AA基因型,AB基因型只出现在小尾寒羊、多赛特羊和萨福克羊中,仅在多赛特羊中检测到BB基因型。对于引物2,4个绵羊群体均检测到AA和AB基因型,只有萨福克羊没有BB型。对于引物3,4个绵羊群体均检测到AA、AB和BB基因型。在4个绵羊群体中,A等位基因频率均明显高于B等位基因频率。

母猪哺乳初期的母性行为与催乳素受体基因多态性关系的初探

应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对民猪和长白猪的催乳素受体(Prolactinreceptor,简称PRLR)基因进行了单核苷酸多态性分析,以研究PRLR基因影响母猪母性行为性状的可能性。结果发现在PRLR基因的cDNA第1620位点处存在NaeⅠ多态性。测序表明,该点存在一个T→C的单碱基突变,属沉默突变。对3种基因型与部分行为性状进行最小二乘分析,结果表明,AB型母猪与其他两种基因型母猪相比,表现出较低的侧卧转为其他姿势的频率以及由母猪结束哺乳的频率(P<0.05),其他行为性状在基因型间不显著。因此,推测等位基因A可能是影响母猪母性行为的不良基因。

湖羊催乳素受体基因外显子10多态性及与其母性行为性状的关联分析

旨在研究催乳素受体(PRLR)基因在湖羊群体中的遗传多样性,以探讨其影响湖羊母性行为性状的可能性,为评价绵羊母性提供遗传学分析方法。以81只分娩母羊为研究对象(其中63只进行母性行为观察),采用PCR-SSCP技术检测湖羊PRLR基因外显子10基因序列的单链核苷酸多态性。运用正态分布检验、聚类分析及非参数检验法,研究湖羊母性行为分布规律和不同基因型的湖羊母性行为的差异性。结果显示,仅P3引物扩增片段存在多态性,所对应的基因型分别定义为AA、AB和BB,各基因型在群体中符合Hardy-Weinberg平衡;选取的4种母性行为:舔舐、哺乳、踩踏和拒绝哺乳的统计数据均不符合正态分布;各基因型与4种母性行为间的多个独立样本的非参数检验结果表明:舔舐、哺乳和踩踏3个母性行为在不同基因型个体间存在极显著差异(P<0.01),拒绝哺乳行为在不同基因型间则不存在显著性差异(P>0.05)。结果提示,PRLR基因外显子10部分序列存在多态性,且其与湖羊母性行为部分性状间存在一定的关联性。初步推断PRLR基因可作为湖羊母性行为的候选基因。

浙东白鹅催乳素受体基因的克隆及其表达特点的研究

本研究克隆了浙东白鹅催乳素受体基因(PRLR)的部分序列,并应用荧光定量PCR技术研究了浙东白鹅在产蛋期、就巢期和恢复期时PRLR基因在下丘脑、垂体和卵巢中的表达特点,结果表明,浙东白鹅PRLR基因的表达量在产蛋期、就巢期和恢复期差异显著(P<0.05),就巢期表达量最高,产蛋期次之,恢复期表达量最低。对不同组织PRLR的表达量分析,垂体最多,其次是下丘脑,卵巢中的表达量最低,垂体与卵巢中的表达量、卵巢与下丘脑的表达量均有极显著的差异(P<0.01),垂体与下丘脑中的表达量差异不显著(P>0.05)。

鹅催乳素受体基因克隆与表达

应用RACE-PCR技术,克隆了全长3159 bp鹅催乳素受体基因(gPRLR)cDNA。序列分析表明,cDNA含443 bp5-′UTR、2496 bp编码区(含终止密码子TAA)和220 bp 3-′UTR。比对鸡催乳素受体基因并将前330 bp看作第1外显子,则gPRLR基因可划分为14个外显子。推导的蛋白序列含831个氨基酸,与鸡、鸽及火鸡PRLR的同源性分别为87.7%、85.2%和84.8%,其N末端含24个氨基酸的信号肽,成熟蛋白含807个氨基酸。gPRLR mRNA在成年鹅睾丸、输精管、卵巢、输卵管、肾、大肠、小肠、脾组织中均有表达,其中以肾、睾丸、大肠及小肠中表达最为丰富。

猪催乳素受体基因对繁殖性能的影响

催乳素受体(PRLR)是细胞分裂素受体超家族的一个成员,与催乳素一起参与动物的繁殖过程。本文主要介绍催乳素受体基因对猪繁殖性能的影响。

大白猪、长白猪和杜洛克猪催乳素受体基因多态性及其与繁殖性能的关系

本试验通过PCR-RFLP技术对大白猪、长白猪和杜洛克猪的催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)基因第10外显子AluⅠ酶切位点进行多态性分析,并对各基因型母猪的第1至第3胎次产仔数、产活仔数、断奶仔猪数、初生窝重、21日龄窝重及断奶成活率进行测定,进而分析PRLR基因多态性与繁殖性能的关系。结果表明,PRLR基因在3个品种中均存在多态位点,且AA基因型都是其优势基因型。关联分析结果表明,大白猪AA基因型个体第1、2和3胎各繁殖性状均呈现出高于AB和BB基因型的趋势。在繁殖性能已经稳定的第3胎次AA基因型个体产仔数、产活仔数、断奶仔猪数、初生窝重及断奶成活率比BB基因型个体平均分别高出0.31头、0.63头、0.02头、0.65kg和0.43%,但差异均不显著(P>0.05)。

催乳素受体基因与羊驼繁殖性能关系的初探

通过氯仿/异戊醇法制备羊驼血液基因组DNA,采用PCR方法首次扩增出羊驼催乳素受体基因(prolactin receptor gene,PRLR)exon8-exon9序列(GenBank登录号为DQ198164),该片段长度为622bp。通过NCBI blast(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)比较,结果表明:该序列包括exon8的82bp、intron8全序列472bp和exon9的68bp。同源性比较发现,羊驼PRLR基因exon8和exon9核苷酸序列与其它哺乳动物的相应区域的同源性特高,均≥92%;同时还发现羊驼exon8引物后第19个碱基为G,而其它哺乳动物(猪除外)均为A,猪则是在羊驼exon8引物后的第34个碱基处由G变为A,通过推导氨基酸序列分析发现,这种单碱基的突变使得羊驼与其它哺乳动物相比,该处的氨基酸由亮氨酸取代了异亮氨酸;在羊驼exon9引物前第22个碱基处也发生了A-G碱基替换现象,但这个碱基的突变发生在密码子的第3个碱基上,编码的氨基酸均为脯氨酸。在这些动物中只有羊驼为单胎动物,羊驼exon8核苷酸序列中A-G的碱基替换并引起编码氨基酸序列发生改变是否与羊驼繁殖性能有关还有待进一步研究。

皖西白鹅催乳素受体基因表达特点的研究

采用荧光定量PCR法,研究了皖西白鹅催乳素受体基因(prolactin receptor,PRLR)在产蛋不同时期及生殖轴不同组织mRNA的表达特点。结果表明,在垂体、下丘脑和卵巢组织中,皖西白鹅产蛋前期PRLR表达水平较低,至产蛋期降至最低,抱窝期上升至极高水平,休产期再次下降至较低水平,且各组织均表现出相似的规律,但卵巢中的表达量相对较高;就巢期间,在就巢前、中、后期,PRLR mRNA表达量在各组织呈现不同的变化规律,垂体组织中表达量呈"V"形变化,在中期前下丘脑中PRLR mRNA维持稳定,到后期有所下降,卵巢中表达量呈梯形下降。PRLR mRNA表达量在不同周期及不同组织中的变化规律反应了PRLR对皖西白鹅就巢的影响,PRLR对鹅就巢的调控可能在转录时期已经开始。

猪催乳素受体基因第8内含子多态性及其对产仔性能的影响

采用PCR-SSCP技术检测了大白猪、长白猪、杜洛克猪、马身猪、山西黑猪和山西白猪等6个品种364头个体催乳素受体基因(prolactin,PRLR)第8内含子的多态性,并分析了多态位点对猪头胎产仔性能的影响。结果表明,猪PRLR基因第8内含子存在多态性,共检测到A、B、C 3个等位基因和AA、AB、AC、BB、BC和CC 6种基因型。在杜洛克猪、长白猪、山西黑猪和山西白猪群体中,A等位基因的频率最高,分别为0.8276、0.5439、0.5345和0.7669;而在大白猪和马身猪群体中,B等位基因的频率最高,分别为0.6894和0.7000;仅在大白猪、山西黑猪和山西白猪中检测到C等位基因,且频率较低,在0.0379～0.1385之间。PRLR基因型对母猪头胎产仔数有显著影响(P<0.05),对产活仔数的影响未达显著水平。AC基因型母猪的头胎产仔数和产活仔数显著高于BC基因型个体,而与AA、AB和BB基因型个体差异不显著。含有A等位基因的母猪的产仔性能优于不带有A等位基因的个体,表明A等位基因是有利于母猪产仔性能提高的等位基因,可应用于标记辅助选择来提高母猪的繁殖性能。

绵羊催乳素受体基因外显子10的多态性分析

将催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)基因作为绵羊高繁殖力的候选基因,对其外显子10设计2对引物,采用PCR-SSCP技术检测其在常年发情的湖羊及季节性发情的中国美利奴羊、罗米丽羊和罗米丽×中国美利奴(新疆军垦型)中的单核苷酸多态性。结果表明,引物P1、P2的扩增片段均有多态性。与已知序列相比,P1扩增片段的AB型在第53 bp处出现A→G突变、在81 bp处出现G→A突变,BB型在该片段第53 bp处发生A→G的突变;对于P2扩增片段,CC、DD、CE和EF型均在第89 bp处发生C→T的突变,导致氨基酸由脯氨酸变为亮氨酸(Pro→Leu),DD型还在146 bp处出现了C→G的突变,此突变导致氨基酸由丙氨酸变为甘氨酸(Ala→Gly);CE型在该片段第132 bp处发生G→A的突变,未导致氨基酸的改变;EF型还在第132 bp处和第167 bp处分别发生了G→A、C→T突变,第167 bp处的突变导致氨基酸由脯氨酸变为亮氨酸(Pro→Leu)。通过卡方独立性检验结果发现,4种绵羊在P1、P2引物扩增片段上各基因型的构成与品种间有极显著差异(P<0.01),说明PRLR基因对绵羊的繁殖性状有一定的影响。

羊驼催乳素受体基因(PRLR)exon10的克隆与序列分析

通过氰仿／异戊醇法从羊驼血液和组织中提取羊驼基因组DNA，首次扩增出羊驼PRLR基因（Prolactin Receptor，PRLR）exon10序列（GenBank登录号为DQ206831），并与其它动物相应区域作了同源性比较，结果表明：羊驼PRLR基因exon10的开放阅读框为1133bp，包括1046bp的编码区和87bp的拖尾区；同源性比较显示，羊驼PRLR基因exon10的核苷酸序列与哺乳动物（牛、绵羊、猪、狗、兔、大鼠等）的同源性较高，达80％，氨基酸序列的同源性则≥66％，而与鱼类的同源性则较低，仅为40％～45％。

山羊催乳素受体基因部分片段的克隆与序列分析

采用PCR技术扩增出济宁青山羊催乳素受体基因长892 bp的片段,该片段含有97 bp的部分外显子8序列(外显子8全长为100 bp)、683 bp的内含子8、70 bp的外显子9及42 bp的部分内含子9。将该片段克隆到pGEM-T Easy质粒中,重组质粒用PCR进行阳性克隆鉴定,然后测定核苷酸序列,并推导其氨基酸序列。该序列与绵羊、母牛、人、大鼠、小鼠的催乳素受体基因mRNA的对应序列的核苷酸同源性分别为99.4%、97.01%、89.22%、89.22%、88.02%,氨基酸同源性分别为100%、94.55%、81.88%、81.82%、83.64%。

鹅催乳素受体基因3′-末端序列克隆

通过比对鸡、火鸡、鸽、猪、大鼠5种动物及人催乳素受体(PRLR),并根据它们的基因cDNA保守区设计兼并引物,先扩增了鹅催乳素受体基因(gPRLR)cDNA一段606 bp保守区序列,再以此设计基因特异性引物,利用3′-RACE技术克隆了gPRLRcDNA3′-末端序列。序列分析表明,获得的gPRLRcDNA 3′-末端长1 876 bp,含编码区后1 656 bp的编码核苷酸、终止密码子TAA和220 bp的3′-UTR。参照鸡催乳素受体基因(cPRLR),此gPRLRcDNA3′-末端序列可分成6个外显子,其长度分别为148 bp、170 bp、145 bp、100 bp、70 bp和1 243 bp,与cPRLRcDNA最后6个外显子高度同源,终止密码子位于最后1个外显子的1 021 bp处。编码区后1 653 bp编码的551个氨基酸gPRLR C-末端与鸡PRLR同源部分的同源性达到87.7%。

催乳素受体基因多态性及其与猪繁殖性能的相关性

催乳素受体(PRLR)通过与催乳素结合,介导包括动物泌乳和繁殖在内的多种生理功能。近年来,PRLR基因作为猪产仔数候选基因,国内外对其开展了广泛的研究。该文综述了PRLR基因多态性及其与猪繁殖性能的相关性,重点讨论了PRLR基因多态性对猪产仔数的影响,并对PRLR基因研究中存在的问题进行了分析,为进一步阐明其遗传机理,以及为采用候选基因法寻找猪重要经济性状的遗传标记提供参考。

SD-大白鼠催乳素受体基因的克隆与表达

应用RACE-PCR技术,克隆了全长2743 bp的SD-大白鼠催乳素受体基因(gPRLR)cDNA。序列分析表明,cD-NA含421 bp 5′-UTR、1357 bp编码区和218 bp 3′-UTR。比对奶牛催乳素受体基因并将前217 bp看作第1外显子,则gem基因可划分为13个外显子。推导的蛋白序列含763个氨基酸,与奶牛、鸽及猪PRLR的同源性较高,其N末端含23个氨基酸的信号肽,成熟蛋白含789个氨基酸。gPRLR mRNA在成年鼠睾丸、输精管、卵巢、输卵管、肾、大肠、小肠、脾组织中均有表达。

疆岳驴催乳素受体基因多态性及其与泌乳性状间的相关性分析

试验旨在研究疆岳驴催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)基因多态性及其与泌乳性状间的关系,探寻可用于疆岳驴选育的分子遗传标记。随机选取120头疆岳驴,对疆岳驴的泌乳性能指标进行测定,并运用PCR-SSCP方法对疆岳驴PRLR基因侧翼区进行多态性分析。结果显示,PRLR基因在疆岳驴群体中存在2种基因型:AA和AB,A为优势等位基因;测序结果显示,PRLR基因的碱基突变位置为g.29764584C>G,该突变为同义突变,没有导致编码的氨基酸发生改变;经关联分析,PRLR基因AB基因型个体平均日泌乳量显著高于AA基因型(P<0.05),AA基因型个体乳蛋白率显著高于AB基因型(P<0.05),在乳糖率上差异不显著(P>0.05)。疆岳驴PRLR基因突变与泌乳性状存在关联性,推测PRLR基因可以作为疆岳驴乳用型选育的分子遗传标记之一。

绵羊催乳素受体基因外显子10多态性及其与产羔数相关分析

采用PCR-SSCP技术检测催乳素受体(PRLR)基因外显子10在湖羊、小尾寒羊、洼地羊和阿勒泰羊中的单核苷酸多态性,研究该基因与湖羊高繁殖力的关联性。结果表明:4个绵羊品种在P2引物扩增区域均符合Hardy-Wenberg平衡,但P3引物只有阿勒泰羊符合Hardy-Wenberg平衡。P2扩增片段的不同基因型分布频率在4个品种间差异不显著(P>0.05);而除阿勒泰羊P3扩增片段的基因型分布与其余3个品种间存在极显著差异(P<0.01)外,其余各品种间基因型分布差异不显著(P>0.05)。4个绵羊品种间产羔数存在极显著差异(P<0.01),但不同基因型间产羔数差异不显著(P>0.05);湖羊不同引物不同基因型产羔数的差异亦均不显著(P>0.05)。本研究表明,PRLR基因不能作为湖羊高繁殖力的候选基因。

4个群体母猪催乳素受体基因与母性行为关系的研究

母猪的母性行为是指母猪在分娩前后所表现出来的一系列行为性状,如衔草做窝、哺乳、杀婴行为、踩压仔猪，对人类攻击及躲避行为等。母猪母性行为的失败将导致其拒绝哺乳，甚至咬死、踩死和压死仔猪，给养猪业和仔猪福利带来严重影响。