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抗Caspase-7锤头状核酶在原代肝细胞内的切割活性研究
1
作者
张韦华
谢青
+2 位作者
姜山
俞红
臧国庆
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第20期3063-3066,共4页
目的研究抗Caspase-7锤头状核酶在原代肝细胞内对靶基因的切割活性。方法构建含抗Cas-pase-7锤头状核酶的真核表达质粒pRz333。将其转染原代肝细胞后,用TNF-α和放线菌素D上调细胞内Caspase-7 mRNA的表达。RT-PCR和免疫印迹法检测Caspas...
目的研究抗Caspase-7锤头状核酶在原代肝细胞内对靶基因的切割活性。方法构建含抗Cas-pase-7锤头状核酶的真核表达质粒pRz333。将其转染原代肝细胞后,用TNF-α和放线菌素D上调细胞内Caspase-7 mRNA的表达。RT-PCR和免疫印迹法检测Caspase-7mRNA和蛋白酶原的表达。用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。结果与诱导组相比,核酶组肝细胞内Caspase-7 mRNA的表达降低了29.34%;Caspase-7蛋白酶原含量下降了32.12%;细胞凋亡率减低了11.75%。结论抗Caspase-7锤头状核酶在原代肝细胞内能够特异性切割靶基因,使目的基因的mRNA和蛋白质表达下调,并能够减少肝细胞凋亡。
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关键词
锤头状核酶
CASPASE-7
催化切割
凋亡
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职称材料
牛肠激酶轻链基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达
被引量:
5
2
作者
黄鹤
甘一如
孙彦
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第6期685-690,共6页
为克隆表达牛肠激酶(enterokinase)轻链(EKL)编码基因,以期应用于融合蛋白的切割与纯化,从市售北方黄牛十二指肠组织中提取总RNA,以RT PCR方法扩增其cDNA片段,将此片段克隆于pUCmT载体中,经过特异性限制性内切酶酶切分析片段正确后,进...
为克隆表达牛肠激酶(enterokinase)轻链(EKL)编码基因,以期应用于融合蛋白的切割与纯化,从市售北方黄牛十二指肠组织中提取总RNA,以RT PCR方法扩增其cDNA片段,将此片段克隆于pUCmT载体中,经过特异性限制性内切酶酶切分析片段正确后,进行全序列分析。结果表明,克隆的cDNA与GenBank上的序列相比完全一致,得到了编码正确的牛肠激酶轻链基因全序列。随后,将目的基因片段插入pET39b中,构建了融合型表达载体pET39b EKL,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。所获得的pET39b EKL经过酶切鉴定和测序,证实其插入方向、读码框架正确,所表达重组蛋白经SDS PAGE分析,相对分子量为65kDa,表达量达28%,通过镍亲和层析纯化得到融合蛋白DsbA rEKL的单一条带。该粗酶经脱盐后在适宜的缓冲体系中21℃温育过夜,显示出较高的自催化切割活性,为进一步进行重组牛肠激酶活性的研究及应用奠定了基础。
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关键词
牛肠激酶轻链
克隆
表达
自
催化切割
基因
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职称材料
抗PDGF受体β亚单位核酶的体外制备与活性鉴定
3
作者
陆翠华
卫立辛
等
《胃肠病学》
2001年第C00期209-209,共1页
关键词
抗PDGF受体β亚单位核酶
体外制备
活性鉴定
特异性
催化切割
活性
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职称材料
题名
抗Caspase-7锤头状核酶在原代肝细胞内的切割活性研究
1
作者
张韦华
谢青
姜山
俞红
臧国庆
机构
上海交通大学附属第六人民医院传染科
上海交通大学附属瑞金医院传染科
出处
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第20期3063-3066,共4页
基金
上海市卫生局青年科研基金项目(No:054Y03)
文摘
目的研究抗Caspase-7锤头状核酶在原代肝细胞内对靶基因的切割活性。方法构建含抗Cas-pase-7锤头状核酶的真核表达质粒pRz333。将其转染原代肝细胞后,用TNF-α和放线菌素D上调细胞内Caspase-7 mRNA的表达。RT-PCR和免疫印迹法检测Caspase-7mRNA和蛋白酶原的表达。用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。结果与诱导组相比,核酶组肝细胞内Caspase-7 mRNA的表达降低了29.34%;Caspase-7蛋白酶原含量下降了32.12%;细胞凋亡率减低了11.75%。结论抗Caspase-7锤头状核酶在原代肝细胞内能够特异性切割靶基因,使目的基因的mRNA和蛋白质表达下调,并能够减少肝细胞凋亡。
关键词
锤头状核酶
CASPASE-7
催化切割
凋亡
Keywords
hammerhead ribozyme
caspase-7
cleavage activity
apoptosis
分类号
R-331 [医药卫生]
R318.14 [医药卫生—生物医学工程]
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职称材料
题名
牛肠激酶轻链基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达
被引量:
5
2
作者
黄鹤
甘一如
孙彦
机构
天津大学生物工程系
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第6期685-690,共6页
基金
国家"九五"重点攻关项目(96 C02 01 04)资助
文摘
为克隆表达牛肠激酶(enterokinase)轻链(EKL)编码基因,以期应用于融合蛋白的切割与纯化,从市售北方黄牛十二指肠组织中提取总RNA,以RT PCR方法扩增其cDNA片段,将此片段克隆于pUCmT载体中,经过特异性限制性内切酶酶切分析片段正确后,进行全序列分析。结果表明,克隆的cDNA与GenBank上的序列相比完全一致,得到了编码正确的牛肠激酶轻链基因全序列。随后,将目的基因片段插入pET39b中,构建了融合型表达载体pET39b EKL,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。所获得的pET39b EKL经过酶切鉴定和测序,证实其插入方向、读码框架正确,所表达重组蛋白经SDS PAGE分析,相对分子量为65kDa,表达量达28%,通过镍亲和层析纯化得到融合蛋白DsbA rEKL的单一条带。该粗酶经脱盐后在适宜的缓冲体系中21℃温育过夜,显示出较高的自催化切割活性,为进一步进行重组牛肠激酶活性的研究及应用奠定了基础。
关键词
牛肠激酶轻链
克隆
表达
自
催化切割
基因
Keywords
bovine enterokinase light chain
cloning
expression
autocatalytic cleavage
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
抗PDGF受体β亚单位核酶的体外制备与活性鉴定
3
作者
陆翠华
卫立辛
等
机构
第二军医大学长征医院消化科
国际肿瘤合作研究所
出处
《胃肠病学》
2001年第C00期209-209,共1页
关键词
抗PDGF受体β亚单位核酶
体外制备
活性鉴定
特异性
催化切割
活性
分类号
R977.3 [医药卫生—药品]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗Caspase-7锤头状核酶在原代肝细胞内的切割活性研究
张韦华
谢青
姜山
俞红
臧国庆
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
0
下载PDF
职称材料
2
牛肠激酶轻链基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达
黄鹤
甘一如
孙彦
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2003
5
下载PDF
职称材料
3
抗PDGF受体β亚单位核酶的体外制备与活性鉴定
陆翠华
卫立辛
等
《胃肠病学》
2001
0
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职称材料
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