光谱法、量热法以及分子对接研究酸枣仁皂苷A与中心蛋白的作用

目的研究酸枣仁皂苷A(jujuboside A,JuA)与八肋游仆虫中心蛋白(Euplotes octocarinatus centrin,EoCen)的相互作用。方法采用圆二色光谱(circular dichroism spectroscopy,CD)以及三维荧光光谱研究EoCen的构象变化;采用稳态荧光光谱与等温滴定量热法(isothermal titration calorimetry,ITC)研究JuA与EoCen作用的机制;分子对接技术模拟JuA与EoCen的结合位点。结果JuA以摩尔比1:1结合于EoCen的C端(二者反应的结合常数约为10^(5)L/mol),由ITC拟合结果可知,JuA与EoCen复合物的形成是放热的过程,熵变对自由能的贡献较小,主要由焓变驱动。EoCen与JuA结合后,构象发生变化,α-螺旋含量减少,酪氨酸残基的微环境变化,EoCen的C端不再结合蜂毒素。结论JuA主要通过范德华力与EoCen结合,从而改变EoCen的构象,抑制其与靶蛋白的结合。

光谱法、量热法以及分子对接技术研究阿霉素与中心蛋白的作用

目的:研究阿霉素(doxorubicin,DOX)与八肋游仆虫中心蛋白的N-端部分(N-terminal domain of Euplotes octocarinatus centrin,N-EoCen)的相互作用。方法:采用圆二色光谱以及三维荧光光谱法研究N-EoCen的构象变化,采用稳态荧光光谱法与等温滴定法(ITC)研究DOX与N-EoCen的作用机制,采用分子对接技术模拟DOX与N-EoCen的结合位点。结果:N-EoCen与DOX结合后,构象发生变化,α-helix含量减少。DOX以摩尔比1∶1与N-EoCen结合,结合常数约为105 L/mol。该反应为放热反应,熵变对自由能的贡献较小,反应主要由焓变驱动。结论:DOX主要通过疏水作用、范德华力以及氢键等多种作用与N-EoCen结合,从而使N-EoCen的构象发生改变。

王熙凤与平儿虚实主仆关系探考

《红楼梦》作为一部鸿篇巨著,刻画了形形色色的人物形象,不同人物之间又构成了交叉混合的复杂关系,其中主仆关系钩织了不同的人物关系网,男女主人与仆人的关系变化推动了小说情节的发展。王熙凤与平儿两人从根本上来说属于主仆关系,但是由于贾琏的存在,她们又是妻和妾的关系。二人的关系比较复杂,有虚有实,不同于普通的主仆关系,这与平儿的特殊的品性有关。平儿虽出身低微,但有着出色的才能和高尚的品德,她在整部小说中反仆为主,成为自己精神的主人。

唐初仆射与宰相名号关系探究

仆射,是唐代的百官之长,也是唐初公认的宰相,位高权重。但随着三省制逐渐演变为中书门下体制,仆射的宰相地位便成了体制内的较大问题,唐初统治者对这一问题有不同的解决措施,但最终的结果都是仆射被排除出宰相机构。仆射被正式排除出宰相机构的时间,是景云二年。然而,仆射并非是在这一年立即失去宰相的身份,而是先在神龙元年正式失去了正宰相的身份,而后才于景云二年被排除出宰相机构。

身体力行,传承中国传统文化 知行合一,诠释先进教育理念——走访冲上热搜的“凤标小学”

去年,一则小学生在课间“切磋功夫”的短视频受到了众多网友的关注。先是小姑娘做了几遍武术动作,几个男孩子也跟着比划起来,一边比划,一边探讨,像极了武侠小说中的高手在切磋武艺,研究功法。孩子们马步扎得稳,冲拳有力量,挥臂拍地气势十足,马步架打、仆步穿掌……小表情认真严肃,每个武术动作都做得一丝不苟。

不同盐度、饵料和光照条件培养下拟伍氏游仆虫的种群动力学响应

为探究不同盐度、饵料和光照条件培养下拟伍氏游仆虫(Euplotes parawoodruffi)的种群动力学响应,本实验采用酵母和杜氏盐藻2种不同类型的饵料喂食拟伍氏游仆虫,在一系列盐度梯度(5、10、15、20、25)及2种光照条件[光照(14 L∶10 D)、全黑暗]下,测定了拟伍氏游仆虫的种群动力学参数变化。使用种群动力学参数(环境容纳量K、种群内禀增长率r、及世代时间G)评价盐度胁迫和不同培养条件对拟伍氏游仆虫的影响。结果表明:在盐度15处理组拟伍氏游仆虫的环境容纳量达到峰值,高盐度下(20~25)拟伍氏游仆虫的环境容纳量显著下降(P<0.05)。随盐度变化,杜氏盐藻组拟伍氏游仆虫的种群内禀增长率呈先上升后下降的趋势,酵母组种群内禀增长率呈先下降后上升的趋势;酵母组喂养的拟伍氏游仆虫环境容纳量高于杜氏盐藻喂养组,内禀增长率低于杜氏盐藻喂养组。光照条件下拟伍氏游仆虫的环境容纳量高于全黑暗条件,内禀增长率低于全黑暗条件。拟伍氏游仆虫对盐度胁迫的响应敏感,可作为环境监测的指示生物,在盐度为15,光照条件(14 L∶10 D)下使用酵母投喂,可实现拟伍氏游仆虫高密度的培养。

黄色伪角毛虫和扇形游仆虫对盐度的适应性

为了阐明原生动物纤毛虫对盐度变化的适应性,在(25±1)℃下,将生活在盐度30下的黄色伪角毛虫(Pseudokeronopsis flava)和扇形游仆虫(Euplotes vannus)分别接种于容积3 mL海水的六孔培养板中,虫体密度为10 ind.·mL-1,由高温灭菌的蒸馏水与海水晶配成盐度为10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65,及70的海水。每组3个平行,每24 h对两种纤毛虫进行计数并测量其体长和体宽,观察其种群密度变化和生态学变化。7 d的实验发现,两种纤毛虫在盐度10~70中均可存活,40盐度组生长率最高,随着盐度升高,黄色伪角毛虫的停滞期延长,而扇形游仆虫的停滞期下降;盐度高于55时,两种纤毛虫的细胞均皱缩,黄色伪角毛虫的长轴、短轴分别下降68.17%和69.26%,虫体变为圆形、梭形或其他不规则形状;盐度由55升至60时,扇形游仆虫的长轴下降了69.88%,短轴下降了72.01%;盐度升高至65后,虫游动减慢甚至停止,食物泡逐渐扩大直至充满整个虫体,体色改变;盐度70时,虫体变为圆型。两种纤毛虫的最适生长盐度为40。本研究结果可为水生生物适应海洋盐度变化的研究提供数据支持。

柳宗元“民本官仆”思想的形成和实践

柳宗元在任永州司马漫长的政治贬谪岁月中,在深入民间了解百姓疾苦之后,逐渐形成了“以民为本”与“吏为民役”的为官思想。在担任柳州刺史期间,柳宗元积极革除当地奴婢买卖陋习;重修孔庙,宣扬儒家教化、发展教育以改良社会风气;凿井、植树以改善民生,促进了柳州的发展。但其崇尚佛教有一定的愚民色彩,固守儒家重农抑商的传统等与“民本官仆”思想背离,显示出一定的历史局限性。

曹雪芹隶籍佛满洲皇室包衣世家新证——兼议冯其庸关于内务府曹家归旗及芹溪身世误考

自《红楼梦》面世,诸多读者未能辨识书中满语与满洲礼俗等满文化元素,皆以纯汉本小说、描写汉人贵族生活阐释此书。上世纪二十年代胡适作《红楼梦考证》,确认作者曹雪芹出自八旗世家。1963年,北京民间发现《五庆堂辽东曹氏族谱》,实证曹家先世本为汉人。本文借助对满语校释、八旗建制架构、满洲包衣制度的探析,厘清曹雪芹隶籍老满洲皇室包衣世家,为江宁织造曹寅嫡孙,辨明冯其庸论曹雪芹身世等处误考。

环境、政治与日常:郑州仆射陂的空间功能与城市记忆

城市湖泊是人类活动的产物,其兴衰变迁与城市环境、政治、文化的发展密不可分。仆射陂曾是郑州城东的一处湖泊,北魏孝文帝将其赐予尚书仆射李冲而得名,自此从自然湖变成“非自然”湖,是闻名遐迩的“官湖”。后在明清时期经过郑州圃田阴氏大族的几代营建,成为郑州八景之一“凤台荷香”的核心和依托,是郑州城市生活的重要标志性空间,交织了娱乐、生产与消费、文化、民间信仰等多元空间功能。清代以后,随着郑州城市水环境、政局、城市空间等多重因素的变迁,尤其是近代以来城市化、现代化的影响,仆射陂最终归于平陆。这一“水域空间”的演变历程,叠加了政治、文化、生态、城镇化等诸多因素,是郑州城市文脉与城市记忆不可或缺的一部分。

老王的太极春秋:杨式

我习练的是杨式老架太极拳,共有85式,除去重复的动作,主要拳式也就30多个动作。早晨在公园跟李老师学习,他早上课结束走了以后,上午我稍作休息,就向老学员请教整套拳后面的动作。这样天天揣摩日日用心,加上小时候与小伙伴一起无师自通互教互学所习的弓马仆步等拳术基本功,短短两个月下来,85式杨式老架太极拳我已能从头打到尾,练得有模有样了。

鸡多个组织Perilipin基因表达的发育性变化与脂肪性状的相关研究

为揭示脂滴表面蛋白Perilipin(PLIN)基因的发育性变化对家禽脂肪性状发育的作用,采用定量PCR方法首次测定1、14、28、42、56、70和84 d四川山地乌骨鸡胸肌、肝脏、腹脂和皮脂组织中PLIN基因的表达量,同时测定各个体活体质量、冠质量、皮脂厚以及肌内脂肪含量。结果,除28和70 d外,在各时间点不同组织间PLIN基因的表达量呈现腹脂>皮脂>胸肌>肝脏的规律,并且PLIN基因在鸡腹脂和皮脂中的表达量随个体日龄的增长明显上升。腹脂中PLIN基因的发育性变化同皮脂厚的发育性变化呈极显著正相关(P≤0.01),胸肌中PLIN基因的发育性变化同肌内脂肪含量的发育性变化呈极显著正相关(P≤0.01)。因此,推测PLIN基因在鸡脂肪性状形成中具有极重要的调控作用。

游仆虫中心蛋白在大肠杆菌中的高效表达和多克隆抗体制备

中心蛋白是一种在微管组织中心的复制和分离中起着重要作用的蛋白质。为了进一步进行中心蛋白结构和功能的研究 ,我们克隆了单细胞真核生物游仆虫中心蛋白基因并构建了重组表达质粒pGEX 6P EoCen ,其在大肠杆菌BL2 1中经IPTG诱导后获得了大量的可溶性表达 ,融合蛋白表达水平达到了细菌总蛋白的 32 6 %。GST抗体进行Westernblotting检测结果为阳性。经GST亲和层析和superdex 75凝胶层析后得到 90 %以上电泳纯的蛋白。用纯化后的蛋白免疫大鼠产生抗血清 ,经ELISA检测抗体效价达 1∶2 5 6

海洋纤毛虫实验生态学研究I:不同浓度葡萄糖对种群增长的影响

为揭示不同碳氮比对纤毛虫种群增长的影响以及纤毛虫对碳源和能量来源的选择性 ,利用实验生态学方法 ,对海水养殖水体中 3种常见的纤毛虫原生动物 :扇形游仆虫 (Euplotesvannus)、海洋尾丝虫 (Uronemamarinum)和巨大拟阿脑虫 (Paranophrysmagna)在牛肉浸膏及梯度浓度葡萄糖培养基中的种群增长过程进行了初步的探讨 .数据分析表明 ,在牛肉浸膏培养基中加入不同浓度的葡萄糖对于纤毛虫种群增长影响显著 ,其中在 0 .0 5 gL-1葡萄糖浓度的培养基中 3种纤毛虫种群增长最佳 (P <0 .0 5 ) ,而在 0 .4 gL-1浓度时纤毛虫的生长繁殖均受到高度抑制 (P <0 .0 5 ) .这一结果显示 ,不同C N比对纤毛虫的种群增长有着直接的影响 .图 3表 3参

游仆虫Rab蛋白基因的克隆表达与纯化

为对单细胞原生动物纤毛虫中Rab蛋白的功能进行研究 ,进而探讨以胞吞和胞吐为主要物质交换途径的纤毛虫中囊泡定向运输的机理 .利用PCR技术从游仆虫大核DNA及cDNA中扩增出rab基因 ,并进行了序列分析 ,该基因全长为 783bp ,两端为端粒序列 ,编码框为 6 2 4bp ,编码 2 0 7个氨基酸 ,开放读框中有 3个TGA ,在此编码半胱氨酸 .利用定点突变将rab基因中 3个TGA突变为通用半胱氨酸密码子TGC .将游仆虫Rab蛋白基因构建于原核表达载体pGEX 4T 2中 ,得到的重组质粒pGEX Eorab1转化至大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,IPTG诱导表达 .表达产物与抗GST抗体在 4 9kD处有很强的交叉反应 .融合蛋白GST EoRab1通过亲和层析柱纯化和凝血酶的切割 ,再经两步纯化得到电泳纯的游仆虫Rab蛋白 .

休眠期和营养期包囊游仆虫的纤毛器骨架及其微管蛋白

应用光镜和透射电镜术 ,显示了包囊游仆虫休眠细胞中纤毛器骨架的形态 ,并对该纤毛虫休眠细胞和营养细胞的纤毛器及其α、β -微管蛋白进行了免疫荧光定位的比较研究。由免疫荧光显微术显示 ,包囊游仆虫形成休眠包囊后 ,背部毛基体完整地按原有模式保存下来 ;纤毛杆解聚后微管蛋白多集中在细胞皮层 ,小部分均匀散布在细胞质中。据所得结果认为 ,包囊游仆虫形成包囊后 ,微管蛋白主要有 3个去向 ,即 :①处于自噬泡内被逐步消化 ;②以“微管蛋白库”的形式分布于细胞皮层及细胞质中 ;③保留在残留的基体中。此外 ,以往研究中发现的棘毛基部纤维网络未被标记上 。

海洋纤毛虫实验生态学研究Ⅲ:纤毛虫摄食胁迫对弧菌(Vibrio sp.)种群增长的影响

为揭示纤毛虫对弧菌 (Vibriosp.)种群增长的影响 ,利用实验生态学方法对弧菌在海水养殖水体中两种常见的纤毛虫原生动物 ,扇形游仆虫 (EuplotesvannusM櫣ｌｌｅｒ)和海洋尾丝虫 (UronemamarinumDujardin) ,摄食胁迫下的种群增长过程进行了探讨 .数据分析显示 ,弧菌的种群密度在纤毛虫的指数增长期高于对照组 ,但在纤毛虫种群生长平衡期则显著低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,在纤毛虫种群生长衰退期则呈回升的趋势 .结果同时还表明 ,海洋纤毛虫的摄食胁迫对弧菌的繁殖具有明显的激活效应 ,但对其种群生长起着显著的抑制作用 .此外 ,本工作也进一步证实了食菌性纤毛虫对改良水质和维持一个健康的养殖环境所具有的积极作用 .图 6参

海洋纤毛虫实验生态学研究 IV:不同人工海水培养液及温度对扇形游仆虫种群增长的影响

为了揭示出海洋纤毛虫在人工海水中及不同温度下的种群动力学,利用实验生态学方法,就4种培养液及2种(17℃和23℃)温度对海洋纤毛虫扇形游仆虫(Euplotesvannus Müller,1786)种群增长的影响进行了初步探讨.结果显示①该种纤毛虫原生动物在4种人工海水培养液中的种群增长率大小顺序为牛肉浸膏培养液>米粒培养液>酵母粉培养液>蛋白胨培养液;②种群密度大小顺序依次为米粒培养液>牛肉浸膏培养液>酵母粉培养液>蛋白胨培养液;③指数增长期及稳定期在米粒培养液中均长于牛肉浸膏培养液;④随着培养温度的升高,种群增长率增大,指数增长期及稳定期缩短;⑤温度系数(Q10)的大小顺序为蛋白胨培养液>牛肉浸膏培养液>米粒培养液>酵母粉培养液.结果表明,米粒人工海水培养液不仅适合于保种培养,而且适合于种群的扩大培养,而牛肉浸膏培养液更适合于种群的快速扩大培养,其他两种培养液则只适合于保种培养.

包囊游仆虫纤毛器微管在不同生理状态下的分化

应用FLUTAX染色及荧光显微术研究了包囊游仆虫的皮层微管胞器及其形成包囊和脱包囊过程中结构的分化:(1)细胞无性分裂过程中,棘毛基部的毛基体由紧密聚集状态逐渐分离、瓦解和消失;背纤毛基体逐渐膨大,基体内的周围微管散开成梅花形,之后在相应皮层区发生由颗粒组成的条带形原基.(2)细胞形成包囊时,口围带、波动膜和额腹横棘毛等微管胞器经历了部分去分化的过程,伴随着细胞体的凝缩,其纤毛器相互聚集,定位于球形体包囊细胞腹面;背纤毛按原有模式排列,位于包囊细胞背面.(3)脱包囊过程中,细胞吸水膨大,细胞体分化成变形虫状并显示一致的弱荧光,但未见微管胞器的荧光图像;细胞通过包囊壁背面小孔脱囊而出,恢复成为正常形态的纤毛虫;此后,在细胞脱包囊后残留的包囊壁背壁尚保存有部分背纤毛的痕迹.根据所得结果推测,形态发生中,纤毛器微管对新结构的形成可能有物质联系或物质贡献;脱包囊时,细胞成变形虫状,其微管结构可能发生了解聚和再分化的过程.

镰游仆虫腹面皮层细胞骨架的扫描电镜观察

应用非离子去垢剂抽提和扫描电镜样品制备、观察相结合的方法 ,显示了镰游仆虫的腹面皮层细胞骨架 ,详细描述了处于毛基体和毛基体下水平的口围带、口侧膜、额腹横棘毛骨架 ,以及口围带小膜托架、口侧膜托架、额腹横棘毛托架的主要附属纤维和非纤毛区表膜下皮层骨架的立体图形。作者据所述各种纤毛器托架附属纤维的定位和分布特征推测 ,这些附属结构可能与细胞内各种纤毛器间的联系 ,以及包括纤毛器运动在内的整个细胞运动的协调等有关.