QuEChERS-高效液相色谱-柱后光化学衍生法测定粮谷类食品中黄曲霉毒素

目的建立QuEChERS-高效液相色谱-柱后光化学衍生法测定粮谷类食品中黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G2的分析方法。方法样品经过1%甲酸-乙腈提取,MgSO_(4)+C_(18)+PSA净化,高效液相色谱-柱后光化学衍生化法检测。结果黄曲霉毒素B_(1)、G_(1)和黄曲霉毒素B_(2)、G2分别在0.5~20、0.125~5μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999,方法检出限为0.1~0.3μg/kg,定量限为0.3~1.0μg/kg,加标回收率为86.4%~97.8%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为2.9%~6.3%。结论该方法前处理简便,回收率稳定,测定结果准确,成本低廉,可用于粮谷类食品中黄曲霉毒素的大批量检测。

HPLC-柱后光化学衍生法测定清火片(胶囊)中黄曲霉毒素G_2、G_1、B_2、B_1的含量及其安全性评价

目的:建立测定清火片(胶囊)中黄曲霉毒素(AF)G_2、G_1、B_2、B_1的方法,并评价该制剂的安全性。方法:采用高效液相色谱(HPLC)-柱后光化学衍生法,并以全国37个厂家生产的266批清火片(胶囊)为样品。色谱柱为Agilent C_(18);流动相为水-乙腈-甲醇(V/V/V),梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;柱温为40℃;进样量为10μL;荧光检测器激发波长为360 nm、发射波长为450 nm。结果:AF G_2、AF G_1、AF B_2、AF B_1分别在进样量为10.197～101.97(r=0.999 7)、10.197～101.97(r=0.999 6)、9.958 6～99.586(r=0.999 1)、9.999 0～99.990(r=0.998 3)pg范围内线性关系良好;精密度(n=6)、重复性(n=6)、稳定性(12 h,n=5)试验的RSD均小于3.0%;检测限分别为0.80、4.00、0.80、4.00 pg;定量限分别为1.60、8.00、1.60、8.00 pg;加样回收率分别为85%～90%、85%～90%、55%～65%、65%～75%(RSD为1.8%～4.7%,n=6)。在266批样品中均未检测出AF G_2、AF G_1、AF B_2、AF B_1。结论:该方法可用于清火片(胶囊)中AF的检测;虽在抽检样品中未检测出AF,但建议增订AF检查项,以提高其安全性。

高效液相色谱-柱后光化学衍生法测定茵栀黄口服液中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的含量

目的建立HPLC-柱后光化学衍生法测定茵栀黄口服液中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的含量。方法Welch Ultimate XP-C18色谱柱;甲醇-乙腈-水(40∶18∶42)为流动相,梯度洗脱;流速1.0 mL·min^-1;柱温40℃;进样量10μL;荧光检测器激发波长360 nm,发射波长450 nm。结果黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1分别在进样量为0.00143~0.14 ng(r=0.9998)、0.00381~0.372 ng(r=0.9995)、0.00123~0.12 ng(r=1.000)、0.00381~0.372(r=0.9999)ng与峰面积线性关系良好;平均加样回收率为66.46%~129.3%,RSD≤2.9%。结论该方法可用于茵栀黄口服液中黄曲霉毒素的检测;本次抽检样品中未检测出黄曲霉毒素,但茵栀黄中原料药材茵陈、黄芩、栀子均存在霉变污染风险,建议增订黄曲霉毒素检查项,以提高其安全性。

高效液相色谱—光化学衍生法测定杜仲叶中的黄曲霉毒素

为建立测定杜仲叶中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的高效液相色谱-光化学衍生法,本文选取色谱柱为Agilent Zorbax C18,流动相为甲醇-乙腈-水(40∶18∶42),流速1 mL/min,采用柱后光化学衍生法,以荧光检测器检测,激发波长为360 nm,发射波长为450 nm,柱温为30℃,进样量20μL。结果显示,黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2分别在10.4~62.4、3.8~22.8、10.8~64.8、3.8~22.8 pg,线性关系良好,平均加样回收率分别为94.0%、93.1%、92.7%、92.4%。可见该方法准确、重复性好,可以作为杜仲叶中黄曲霉毒素的含量测定。

高效液相色谱-光化学衍生法测定陈皮中黄曲霉毒素G2的不确定度评定

目的评定高效液相色谱法-光化学衍生法测定陈皮中黄曲霉毒素G2的含量的不确定度。方法参考中国药典四部通则2351黄曲霉毒素测定法第一法对陈皮进行提取,以C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm)为分析柱,甲醇:乙腈:水(30:12:58,V:V:V)为流动相进行洗脱,流速0.6 mL/min,柱温40℃,使用柱后光化学衍生器连接荧光检测器进行检测。找出影响不确定度的因素,对不确定度进行评估,并给出不确定度,如实反映测量的置信度和准确度。结果该批次陈皮样品中黄曲霉毒素G2的含量为0.08μg/kg,其实际含量可表示为(0.08±0.005)μg/kg(k=2)。结论黄曲霉毒素G2测定过程中主要影响因素为高效液相色谱仪的校准,其次为测量重复性,而样品溶液的配置与对照品溶液的稀释引入的不确定因素较小,天平称量引入的不确定因素可以忽略不计。

HPLC-柱后光化学衍生法测定72批舒筋活血丸中黄曲霉毒素G_2、G_1、B_2、B_1的含量

目的：建立HPLC-柱后光化学衍生法测定舒筋活血丸中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的含量，并通过对72批样品检测结果的分析初步考察舒筋活血丸制剂在黄曲霉毒素污染方面的安全性，以提示企业选择合格安全的原料药材投料。方法：采用Diamonsil C18（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱，以乙腈-甲醇-水为梯度洗脱流动相，流速1．1mL·min^-1，柱温40℃；采用柱后光化学衍生法，荧光检测器激发波长λex=360nm、发射波长λem：450nm。结果：黄曲霉毒素G1、G2、B2、B1分别在2．806—16．825Pg（r=0．9973）、9．830—58．983Pg（r=0．9998）、2．891～17．345Pg（r=0．9956）、9．9—59．4pg（r=0．9966）范围内线性关系良好；黄曲霉毒素B．及总量回收率（n=6）分别为78．5％（RSD=1．6％）和85．5％（RSD=4．0％）。有27批样品检出黄曲霉毒素，其总量含量为0．007×10^-3～39．87×10^-3μg·g^-1。结论：该方法经方法学验证可用于舒筋活血丸中黄曲霉毒素检测：建议增订舒筋活血丸中黄曲霉毒素检查项；建议企业重视动物类药材的质量和安全性。

HPLC-柱后光化学衍生法测定蛤蚧定喘丸中黄曲霉毒素G_2、G_1、B_2、B_1的含量及LC-MS/MS确证

目的:建立HPLC-柱后光化学衍生法测定蛤蚧定喘丸中黄曲霉毒素G_2、G_1、B_2、B_1的含量,并建立LC-MS/MS确证方法。方法:采用SPOLAR C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇(A)-乙腈(B)-水(C)为梯度洗脱流动相进行洗脱,流速1.1 mL·min^(-1),柱温35℃;采用柱后光化学衍生法,柱后光化学衍生器波长为254 nm;荧光检测器激发波长为365 nm,发射波长为450 nm,增益值为15。用LC-MS/MS进行确证,流动相为水(0.1%甲酸+5 mmol·L^(-1)甲酸铵)-乙腈,离子源:电喷雾电离源(ESI),扫描模式:多反应监测(MRM)。结果:黄曲霉毒素G_2、G_1、B_2、B_1分别在0.001 18~0.029 6 ng(r=0.999 8)、0.004 18~0.104 6 ng(r=0.999 9)、0.001 23~0.030 8 ng(r=1.0000)、0.004 267~0.106 7 ng(r=1.0000)范围内线性关系良好;黄曲霉毒素G_2、G_1、B_2、B_1回收率(n=9)分别为101.2%(RSD=7.10%)、103.2%(RSD=3.91%)、92.5%%(RSD=2.91%)和93.5%(RSD=7.95%)。结论:所建立的HPLC-柱后光化学衍生法操作简便、可靠,结果准确,灵敏度高,重现性好,可作为该产品中黄曲霉毒素检测质量控制的方法。

高效液相色谱-光化学衍生法测定湖南产莲子中黄曲霉毒素G1、G2、B1、B2

目的对不同来源的湖南产莲子中黄曲霉毒素G1、G2、B2、B1进行高效液相色谱-光化学衍生法测定。方法采用高效液相色谱–光化学衍生法,采用岛津GL Inertsil ODS-3色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇–乙腈–水(35∶13∶52),柱温35℃;光化学衍生器(254 nm)激发波长λex=360 nm,发射波长λex=450 nm。结果黄曲霉毒素G1、G2、B2、B1分别在6.7~33.3、11.4~56.8、10.3~51.5、4.1~20.3 pg线性关系良好;平均回收率分别为98.07%、97.72%、96.11%、99.52%,RSD值分别为1.69%、1.40%、2.72%、1.34%(n=6)。9批莲子样品中,有6批未检出黄曲霉毒素,来自于农贸市场农户自存的2批次检出黄曲霉毒素B1,实验室塑料袋包装储存1年的1批检出黄曲霉毒素B1、B2,但质量分数均低于法定标准限量。结论不同来源湖南产莲子中黄曲霉毒素质量分数均低于《中国药典》2020年版规定限量。该法测定结果准确、重复性良好,可为完善莲子安全性控制和质量标准提升提供实验依据。

高效液相色谱柱后衍生法测定大黄䗪虫丸中的黄曲霉毒素

目的:建立高效液相色谱法测定大黄䗪虫丸中黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)的含量,并评价大黄䗪虫丸中黄曲霉毒素的安全性。方法:采用高效液相色谱柱后光化学衍生法,色谱柱为Intersil ODS-3 C18柱,流动相为甲醇-水,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,荧光检测器,激发波长360 nm,发射波长450 nm。结果:黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)分别在10.2-51.0 pg(r=0.9989)、4.3-21.5 pg(r=0.9996)、10.6-53.0 pg(r=0.9986)、3.8-19.0 pg(r=0.9996)范围内,具有良好的线性关系,其加样回收率在83%-94%,RSD为1.56%-2.11%。有9批样品检出黄曲霉毒素,其总含量在0.2657-1.5805μg/kg。结论:本方法专属性强,操作简单,结果稳定可靠,分离度好,可用于大黄䗪虫丸中黄曲霉毒素的质量控制。

测定花生油中黄曲霉毒素B1前处理方法的优化

目的建立一种环保的同时适用于高效液相色谱柱后光化学衍生法(liquid chromatography post-column photochemical derivation, LC-PSD)和酶联免疫吸附筛查法(enzyme-linked immuno sorbent screening,ELISA)测定花生油中的黄曲霉毒素B1的前处理净化方法。方法花生油试样经甲醇-水溶液(70:30, V:V)提取,经乙醚净化、冷冻离心除脂净化和免疫亲和柱净化后,采用LC-PSD法和ELISA法测定。结果黄曲霉毒素B1在0.1~40 ng/mL范围内均表现出良好的线性关系,LC-PSD法相关系数均大于0.999,检出限为0.03μg/kg,定量限为0.1μg/kg。ELISA法相关系数均大于0.9346,检出限为0.1μg/kg,定量限为0.3μg/kg,均满足现行国标要求。黄曲霉毒素B1在添加水平为5μg/kg和20μg/kg时, LC-PSD法的加标回收率为84%~99%,不确定度(n=6)为0.2%~3.3%,ELISA法的加标回收率为109%~124%,不确定度(n=6)为0.3%~10.9%。结论优化后的花生油中黄曲霉毒素B1检测前处理方法可以使检验效率提高40%以上,有机溶剂的使用量降低50%以上,经济效益提高50%以上,优化方法适合大批量测定花生油中黄曲霉毒素B1。

3种改进液相色谱法测定植物油中黄曲霉毒素的比较研究

对柱后光化学衍生HPLC法、柱后碘衍生HPLC法及无衍生UPLC法测定植物油中4种黄曲霉毒素(AFB1、AFB2、AFG1、AFG2)含量的样品前处理条件和色谱条件进行改进并进行方法的比较研究。结果发现:样品前处理过程不采用氮吹、用50%甲醇溶液进样,用改进的色谱条件检测,油样中4种黄曲霉毒素均能被较好分离、定量,并简化了前处理过程;柱后光化学衍生HPLC法、柱后碘衍生HPLC法及无衍生UPLC法AFB1的检出限分别为0.035、0.018、0.045μg/kg,AFB2的检出限分别为0.016、0.014、0.017μg/kg,AFG1的检出限分别为0.067、0.024、0.080μg/kg,AFG2的检出限分别为0.029、0.026、0.029μg/kg;3种分析方法线性关系良好(r2>0.99),回收率为90.7%~116.1%,相对标准偏差低于12%;3种分析方法测得花生油样品中4种黄曲霉毒素含量基本一致。3种分析方法均能够满足粮油检测工作的需要,具有实际应用价值。

骨折挫伤胶囊中黄曲霉毒素的测定

目的 用高效液相色谱柱后光化学衍生法对骨折挫伤胶囊中的黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)进行含量测定。方法 用Persuit 5 C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-乙腈-水(27∶12∶61)(A)-甲醇(B),梯度洗脱;流速为0.8 mL·min^(-1);激发波长λ_(ex)为360 nm,发射波长λ_(em)为450 nm;柱温为30℃。结果 黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)分别在0.52~5.20、0.19~1.90、0.54~5.40、0.19~1.90 ng·mL^(-1)范围内线性关系良好;平均回收率分别为84.90%、85.32%、85.37%、81.92%。138批样品中有7批检出黄曲霉毒素B_(1)、G_(1),但均未超过限度,其余均未检出。结论 建立的方法可快速、简便、准确地检测骨折挫伤胶囊中黄曲霉毒素的含量,样品的测定结果也说明所测138批样品在黄曲霉毒素方面不存在安全性风险。

葛根定眩胶囊中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1含量测定及安全性评价

观察测定黄曲霉毒素(aflatoxin全称,AFT简称)G2,G1,B2,B1含量(葛根定眩胶囊)的方法,并对葛根定眩胶囊安全性进行评价。方法 方法选择,高效液相色谱-柱后光化学衍生法,色谱柱选择150mm×4.6 mm(5μm)的VenusilMP C18柱,色谱柱条件甲醇-乙腈-水流动相,梯度洗脱,40℃柱温设计,1.0 ml/min流速设计,荧光检测器进行检测,检测条件450nm发射波长、360nm激发波长,分析测定AFT G2、AFT G1、AFT B2、AFT B1含量情况,并对葛根定眩胶囊进行测定。结果 试验色谱条件测定AFT G2、AFT G1、AFT B2、AFT B1分离度均大于1.5。AFT G2、AFT G1、AFT B2、AFT B1的平均回收率均在97.5%~99.9%范围内,AFT G2、AFT G1、AFT B2、AFT B1的RSD值均<2.0%,加标回收率、精密度理想。定量限AFT G2的0.45μg/kg、AFT G1的0.48μg/kg、AFT B2的0.42μg/kg、AFT B1的0.32μg/kg;检测限AFT G2的0.08μg/kg、AFT G1的0.10μg/kg、AFT B2的0.11μg/kg、AFT B1的0.12μg/kg。本次研究AFT G2、AFT G1、AFT B2、AFT B1线性回归分析,结果显示各AFT线性关系良好。取葛根定眩胶囊样品共计5批,测定结果AFT含量符合要求。结论 高效液相色谱-柱后光化学衍生法测定AFT G2、AFT G1、AFT B2、AFT B1含量效果理想,可以将其应用于葛根定眩胶囊测定之中,有效进行该药物质控。

18批中药材中黄曲霉毒素的检测分析

建立药材中黄曲霉毒素的超高效液相-柱后衍生方法,并通过两种衍生方法进行比对确认阳性样品.样品用70%的甲醇水提取,经M226多功能净化柱净化,以甲醇-水等度洗脱,利用超高效液相-荧光检测器-柱后光化学衍生及碘化学衍生进行分析测定.黄曲霉毒素在测定浓度范围内线性关系良好,相关系数均在0.999以上,加标回收率范围81.85%—94.75%,方法精密度范围0.79%—2.67%,两种方法均准确稳定.18批次样品中有3批次检出黄曲霉毒素,检出率为16.67%,但均符合药典的限量要求.该两种柱后衍生方法均前处理便捷,灵敏度高,重复性好,准确性好,适用于中药材中黄曲霉毒素的检测.

高效液相色谱柱后衍生法测定归脾丸中的黄曲霉毒素

目的建立归脾丸中黄曲霉毒素G_2、G_1、B_2、B_1的残留量测定方法。方法样品经70%甲醇提取、免疫亲和柱净化后,用高效液相色谱-柱后光化学衍生-荧光检测器对归脾丸中4种黄曲霉毒素(G_2、G_1、B_2、B_1)的残留量进行分析测定。结果黄曲霉毒素G_2在1.232~24.64 pg范围内,黄曲霉毒素B_2在1.212~24.24 pg范围内,黄曲霉毒素G_1、B_1在4.148~82.96 pg范围内,线性关系良好,相关系数均r≥0.999 4。回收率在83.8%~101.4%之间。结论该方法快速简便、准确,可作为归脾丸中黄曲霉毒素残留量的测定方法。

吉林省内花生衣药材中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定

为测定吉林省内花生衣药材中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量,评估样品污染情况,本文采用免疫亲和柱净化、高效液相色谱光化学衍生荧光检测法,以Agilent ZORBAX SB-C18为色谱柱(4.6×250 mm 5μm);以甲醇-乙腈-水(40∶20∶40)为流动相,流速为0.8 mL/min;柱温为25℃;荧光检测器激发波长λex=360 nm,发射波长λex=450 nm。结果显示,AFB1、AFB2、AFG1、AFG2线性关系良好;AFB1、AFB2、AFG1、AFG2检出限依次为0.155μg/kg、0.050μg/kg、0.155μg/kg、0.058μg/kg;定量限依次为0.465μg/kg、0.150μg/kg、0.465μg/kg、0.175μg/kg。由此可见,该方法快速、准确、重复性好,能够为花生衣中黄曲霉毒素测定方法提供科学依据。

葛根定眩胶囊中黄曲霉毒素G_(2),G_(1),B_(2),B_(1)含量测定及安全性评价

目的建立测定葛根定眩胶囊中黄曲霉毒素(AF)G_(2),G_(1),B_(2),B_(1)含量的高效液相色谱-柱后光化学衍生法,并评价其安全性。方法色谱柱为Phenomenex C_(18)Gemini柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-水(40∶18∶42,V/V/V),流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,检测器为荧光检测器,激发波长为365 nm,发射波长为450 nm,进样量为10μL。结果葛根定眩胶囊1个批次中检出AFB_(1),AFB_(2),AFG_(2),含量分别为1.39,0.13,0.10μg/kg,3个批次均未检出AF。结论该方法简便快捷,结果准确可靠,专属性强,灵敏度高,可用于葛根定眩胶囊中AFG_(2),AFG_(1),AFB_(2),AFB_(1)的含量测定,且所检AF残留量均符合药典规定。

远志药材中黄曲霉毒素B1残留量测定能力验证研究

目的:评价参与能力验证(proficiency testing,PT)实验室的黄曲霉毒素残留量检测能力,促进药品行业残留检测质量水平的提高。方法:制备黄曲霉毒素B;残留量测定能力验证用远志样品,根据中国合格评定认可委员会(CNAS)相关文件要求,对其均匀性和稳定性进行检验,并按照项目计划发放样品;以参加实验室检测结果的中位值为指定值,依据Horwitz方程计算能力评定标准差,采用Z比分对能力验证结果进行统计分析,评价标准:|Z|≤2%,评价结果为"满意";2<|Z|<3,评价结果为"可疑";|Z|≥3,评价结果为"不满意"。结果:参加能力验证计划实验室共69家,均按项目要求提交有效数据,满意率为100%。结论:参加黄曲霉毒素残留量检测的实验室对标准的执行能力和质量保障体系整体较好。深入分析收集的原始数据及实验报告,对黄曲霉毒素检测时存在的共性问题进行技术分析,并给出相关的技术建议,有助于提升参加实验室的检验能力。

35种中药饮片黄曲霉毒素B1的含量考察

目的考察常用中药饮片感染黄曲霉毒素 B1 的情况,为制订中药质量标准和科学管理提供参考。方法采用免疫亲和柱净化洗脱结合柱后光化学衍生法对 35 种中药饮片黄曲霉毒素 B1 含量进行检测。结果有 17 种中药饮片存在不同程度的黄曲霉毒素 B1 污染,污染率为 48.57%,其中胖大海、小茴香、延胡索黄曲霉毒素 B1 含量超标,其余受污染品种黄曲霉毒素 B1 含量均小于 1 μg/kg。结论所测中药饮片受黄曲霉毒素污染率高,中药饮片黄曲霉毒素 B1 污染程度与用药部位、产地有一定相关性。建议在《中华人民共和国药典》小茴香、延胡索的检查项下增加黄曲霉毒素的含量限量测定,以更好地控制其质量。