光学蛋白质芯片

本文介绍一种新型光学蛋白质芯片技术 .它通过表面格式化、表面改性和配基固定形成多元生物活性感应表面 ;借助蛋白质的特异结合性和高分辨率的生物光学显微成像技术达到识别和检测蛋白质的目的 .它是一种非标记的多元蛋白质定量分析方法 .

光学蛋白质芯片法定量检测C-反应蛋白的研究

目的本研究利用光学蛋白质芯片系统定量检测心肌梗死早期标志物C-反应蛋白（CRP）,探讨光学蛋白质芯片在医学检验诊断中的应用。方法实验采用椭偏光学生物显微成像系统、光学蛋白质芯片分析系统及软件、芯片装置、微流控芯片加样系统等,在4×6点芯片上装配生物探针,然后用人血清蛋白（HAS）封闭检测位点,利用抗原、抗体特异性结合的特性定量检测CRP（选用浓度为200、100、50、20、10、5μg/ml）,并绘制了检测CRP的标准曲线。采用SPSS统计学软件10.0分析处理实验数据。结果检测结果显示,CRP浓度与检测位点具有高度相关性,具有浓度-灰度的一致性,可以绘制出定量检测标准曲线,检测灵敏度为5μg/ml,符合临床检测CRP的灵敏度要求。各浓度（5、10、20、50、100、200μg/ml）的组内变异系数（CV%）分别为：2.47%、1.15%、2.06%、4.32%、1.39%、0.36%,皮尔逊相关系数为95.3%。结论光学蛋白质芯片可以定量检测CRP,灵敏度为5μg/ml,符合临床检测CRP的灵敏度和实用要求,具有临床检测CRP的潜在应用前景。此外,利用椭偏光显微成像技术的光学蛋白质芯片不需要标记试剂,被测样品不需要任何处理,样品需要量少,操作简单。

光学蛋白质芯片法测定甲胎蛋白的初步研究

采用微流道反应器系统，优化甲胎蛋白单克隆抗体浓度，并装配在醛基改性后的硅片表面上，经牛血清白蛋白封闭后形成检测AFP芯片阵列。通过制作AFP浓度梯度标准曲线标定光学蛋白质芯片，实现肿瘤标志物AFP的检测，结果表明，该方法的最低测定浓度可以达到1．Ong／mL，变异系数为3．1％，回收率在94．4～105．O％之间，与人纤维蛋白原的交叉反应率≤O．25％、与1％葡萄糖≤0．08％、与人源1gG≤0．16％和与人血清白蛋白≤0．20％，说明光学蛋白质芯片技术检测AFP，灵敏度高、重复性好、操作简便，有望应用于临床检测。

光学蛋白质芯片检测乳腺癌胸苷磷酸化酶的初步研究

目的应用我国自行研制的无标记光学蛋白质芯片检测乳腺癌组织中的胸苷磷酸化酶(Thymidine phosphorylase,TP),为建立一种快速、简便的临床检测方法进行初步探索。方法将 TP 的多克隆抗体固定于已经过表面改性的固相光学抛光硅片表面上制备无标记光学蛋白质芯片,通过椭偏光学显微成像技术检测20例经病理证实的乳腺浸润性导管癌组织标本和正常组织标本中 TP 水平,以芯片灰度值表示组织中 TP 浓度高低。同时应用 ELISA 方法测定,并比较两种方法检测结果的一致性。结果 20例癌组织的灰度值35.40±11.55,20例正常组织的灰度值为26.80±8.78,两组间差异具显著性意义(P<0.05)。以44.36(正常组织平均值+2倍标准差)为阈值,乳腺癌检测的灵敏度为20.00%,特异度为100.00%。同 ELISA 检测结果相比,在20例乳腺癌组织标本检测中,两种方法的一致性具极显著意义(P<0.01)。结论我国首创的椭偏光学显微成像技术简单、直观,结合光学蛋白质芯片可用于胸苷磷酸化酶的临床检测。

光学蛋白质芯片检测乳腺癌组织中胸苷磷酸化酶的临床初探

目的应用我国自行研制的光学蛋白质芯片检测乳腺癌组织中的胸苷磷酸化酶 (Thymidinephosphorylase,TP) ,为建立一种快速、简便的临床检测方法进行初步探索。方法应用TP的多克隆抗体制备光学蛋白质芯片 ,通过椭偏光学显微成像技术检测20例经病理证实的乳腺浸润性导管癌组织标本和正常组织标本中的TP水平 ,以灰度值表示组织中TP浓度高低。同时应用ELISA方法测定 ,并比较两种方法检测结果的一致性。结果20例癌组织的灰度值35.40±11.55,20例正常组织的灰度值为26.80±8.78,两组间差异具显著性意义 (P<0.05)。以44.36(正常组织平均值 +2倍标准差 )为阈值 ,乳腺癌检测的灵敏度为20.00 %,特异度为100.00 %。同ELISA检测结果相比 ,在20例乳腺癌组织标本检测中 ,两种方法的一致性具极显著意义(P<0.01)。结论我国首创的椭偏光学显微成像技术简单、直观 。

血清载脂蛋白B椭偏光蛋白质芯片技术定量检测的条件优化

目的优化椭偏光蛋白芯片技术定量检测血清载脂蛋白B(ApoB)的条件,并观察最佳条件下椭偏光蛋白芯片技术定量检测血清ApoB的准确性。方法用椭偏光蛋白芯片技术检测含有0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mg/m L的载脂蛋白B抗体(anti ApoB)和200μg/m L ApoB标准品的溶液,测得灰度值最高者选为最佳anti-ApoB浓度。用椭偏光蛋白芯片技术检测5、10、20、50、100、200μg/m L ApoB标准品溶液,anti-ApoB浓度为0.3 mg/m L,结果以灰度值表示。然后在上述标准品溶液中加入蛋白G使其终浓度为0.1 mg/m L,再检测一次灰度值。比较两次检测的灰度值,确定是否应该加入0.1 mg/m L蛋白G。最佳条件下椭偏光蛋白芯片技术检测0、5、10、20、50、100、200μg/m L ApoB标准品溶液,计算上述ApoB标准品溶液灰度值与不含ApoB的空白探针溶液(含anti ApoB和蛋白G)灰度值的差值。对上述ApoB标准品溶液浓度和灰度值差值的相关性进行分析,以ApoB标准品溶液浓度为横坐标,灰度值差值为纵坐标描画标准曲线并建立方程。最佳条件下用椭偏光蛋白芯片技术检测16份40倍稀释的已知ApoB浓度(采用免疫比浊法测定)血清的灰度值两次。用上述方程计算16份血清中ApoB浓度,并与其实际ApoB浓度比较。结果最佳anti-ApoB浓度为0.3 mg/m L。与不应用蛋白G者相比,应用0.1 mg/m L蛋白G的椭偏光蛋白芯片技术测得样品的灰度值高(P均<0.05)。以ApoB浓度为横坐标x、灰度差值为纵坐标y描画标准曲线,Maple9.5软件得出的回归方程为:y=-23.116Ln(1-x/60),R2=0.936 4。16份血清ApoB浓度和第一次、第二次用椭偏光蛋白芯片技术检测测得血清ApoB浓度相比P均>0.05。结论椭偏光蛋白芯片技术检测血清ApoB的最佳条件为anti-ApoB浓度0.3 mg/m L,蛋白G浓度0.1 mg/m L。此条件下椭偏光蛋白芯片技术检测血清ApoB结果准确。

蛋白质生物芯片

蛋白质芯片是一种新型的蛋白质分析技术,具有平行、快速、自动化检测、识别或纯化多元蛋白质的功能,在蛋白质功能分析、医学诊断,药物筛选和生物工业具有潜在的广泛应用前景。本文仅简要地介绍目前已经发展起来的几项有代表性的蛋白质芯片技术。